[생화학실험] 3. 단백질 정량법

목차

1. 실험제목
2. 실험날짜
3. 실험목적
4. 이론
5. 실험기구 및 시약
6. 실험방법
7. 참고사항
8. 실험결과
9. 토의

본문내용

1. 실험제목
단백질 정량 실험
2. 실험날짜
2023년 3월 24일
3. 실험목적
단백질 정량의 목적과 다양한 정량법의 원리를 이해하고 직접 시료 속 단백질의 양을 측정할 수 있다.
4. 이론
단백질을 정량하는 일반적인 방법으로는 Biuret Assay, Lowry Assay, Bradford Assay 3가지가 있다.
그 중 가장 많이 쓰이는 Bradford 정량법은 산성 조건에서 commassie brilliant blue G-250과 단백질의 염기성, 방향족 곁사슬 아미노산과 결합하여 raddish, brown의 색이 blue로 색상이 변화를 통해 단백질을 정량하는 방법이다. 595nm에서 흡광도는 결합한 단백질의 농도와 비례한다. 2분 이내에 발색 반응이 일어나고 발생의 안정성은 1시간 정도 유지된다(이 방법을 이용할 때에는 발색 1시간 이내에 실험을 마치는 것이 좋다)는 장점이 있다. 계면활성제의 영향을 받기 쉽고, 사용한 단백질은 비가역적으로 변성된다는 단점이 있다.
자외선 흡수법은 같은 방향족 곁사슬을 아미노산은 280nm에서 흡광도를 가지는 특성과 펩타이드 결합이 200nm에서 흡광도를 가지는 특성을 이용해서 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. 특별한 시약을 첨가할 필요가 없고, 반응을 위한 배양시간이 필요 없고, 표준 단백질을 이용한 표준 곡선이 필요 없고, 시료의 회수가 가능하고 빠르고 간편하다는 장점이 있지만 절대적인 단백질량을 측정하기는 어렵다는 단점이 있다.
BSA(Bovin Serum Albumin, 소혈청 알부민)로 알부민은 가장 풍부한 혈장단백질로서, 당과 결합되지 않은 상태로 존재한다. 연구에 많이 사용되는 알부민으로는 BSA와 HSA(human serum albumin, 사람 혈청 알부민)이 있다. BSA와 HAS는 아미노산 서열로 볼 때 76% 유사하다. 알부민은 주로 간에서 생성되어 혈류로 보내진다. 알부민은 585개 아미노산으로 구성되어 있고, 분자량은 66,400Da이며 pH4.7에서 등전점(isoelectric point)을 갖는다.

참고자료

· 없음