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GFP 단백질과 단백질 정량(Protein Measurements)2025.01.221. 단백질 정량 단백질 정량 방법 중 Lowry assay와 Extinction coefficient assay를 통해 단백질을 정량하고, 비교하는 과정에서 흡광도와 표준곡선의 의미를 이해하고자 수행한 실험이다. 단백질은 아미노산의 중합체로, 아미노산 사이에 펩타이드 결합이 반복되며 단백질이 형성된다. 이번 실험에서 사용한 단백질의 농도를 정량하는 방법은 특정 아미노산 또는 단백질의 흡광도를 이용하는 Extinction coefficient assay와 표준곡선식과 750 nm에서의 흡광도를 이용하는 Lowry assay이다. 2...2025.01.22
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단백질의 정량분석2025.05.051. 단백질 정량 분석 이 실험에서는 Lowry method와 Bradford method를 사용하여 단백질의 농도를 측정하였습니다. Lowry method는 단백질의 아마이드결합에 의한 구리이온의 환원을 토대로 측정하는 방식이며, Bradford method는 Coomassie Brilliant Blue 염색약이 단백질과 결합하여 색이 변하는 것을 이용하는 방식입니다. 실험 결과, 각 미지시료의 단백질 농도가 다르게 나온 것으로 보아 시료 간 단백질 함량의 차이가 있음을 알 수 있었습니다. 1. 단백질 정량 분석 단백질 정량 분석...2025.05.05
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단백질 정량 분석: BCA assay2025.01.021. 단백질 정량 분석 BCA assay는 단백질 정량 분석 방법 중 하나로, 단백질 시료에 BCA 시약을 가한 후 흡광도를 측정하여 단백질 농도를 구하는 방법이다. 이 방법은 단백질에 의해 환원된 구리 이온이 BCA와 반응하여 보라색 화합물을 형성하는 원리를 이용한다. 표준 단백질로 BSA를 사용하여 표준곡선을 그린 후, 미지의 단백질 시료의 흡광도를 대입하여 농도를 계산할 수 있다. BCA assay는 단백질의 아미노산 조성에 크게 영향을 받지 않아 비교적 정확한 정량이 가능하다는 장점이 있다. 1. 단백질 정량 분석 단백질 정...2025.01.02
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단백질 정량2025.05.071. Biuret method 단백질의 알칼리성 수용액에 저농도 황산구리용액을 몇 방울 떨어뜨리면 청자~적자 색을 띠는 단백질 발색반응이 일어난다. 발색은 구리(II)이온과 착체가 형성되어 이루어진다. 트리펩티드 이상의 펩티드도 같은 반응을 보이고, 발색률은 펩티드에 따른 차이가 거의 없다. 조작이 간단하고 다수의 시료를 단시간에서 측정할 수 있어 많이 사용하지만, 감도가 낮다. 2. Ultraviolet Absorption Method 단백질의 tryptophan과 tyrosin잔기가 280 nm에서 강하게 흡광하는 성질을 이용하...2025.05.07
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BRADFORD 단백질 정량법을 이용한 온도변화에 따른 유청단백질의 농도 측정(추가실험)2025.05.121. Bradford 단백질 정량법 Bradford 단백질 정량법은 쿠마시블루와 단백질의 특정 아미노산의 결합력을 이용하여 단백질을 정량하는 방법입니다. 쿠마시블루 G-250 염색약이 산성 환경에서 단백질(염기성 및 방향족 곁 사슬을 갖는 아미노산)과 결합하면 푸른색으로 변하게 됩니다. 이 과정에서 단백질의 소수성 부위가 노출되어 염색약과 반데르발스 힘으로 비공유결합을 이루고, 양전하를 띠는 아민기와 염색약의 음전하 부위가 이온결합을 이루면서 단백질과 염색약의 결합이 더욱 강화됩니다. 2. 온도에 따른 단백질 변성 이 실험에서는 프...2025.05.12
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단백질의 정량실험 Lowry method2025.01.201. 단백질 정량 단백질 정량은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 단백질의 본질, 시료에 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다. Lowry 법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법으로, 감도가 비교적 넓고 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 2. Lowry 법 Lowry 법은 알칼리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리...2025.01.20
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Lowry-Folin 법을 이용한 단백질 정량2025.01.271. 단백질 정량 단백질 정량은 단백질의 발색반응과 흡광도 측정을 사용한다. 단백질은 농도에 비례하여 발색하기 때문에, 흡광도 측정으로 농도를 분석할 수 있다. Lowry-Folin 법은 Biuret 법에 추가 요소가 포함된 정량법으로, 강알칼리성 상태에서 2가 구리이온과 착염을 형성하여 발색하고 아미노산 중 트립토판, 타이로신, 시스테인이 Folin 시약을 환원시켜 청색으로 발색하는 반응을 이용한다. 2. BSA 표준용액 단백질 정량을 위해서는 정확한 농도를 알고 있는 BSA(bovine serum albumin) 표준용액을 사용...2025.01.27
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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01～1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04
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Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석2025.01.151. 단백질 정량 분석 실험 목적은 Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 Standard curve를 그리는 것입니다. Bradford법은 산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료가 단백질과 결합하여 최대 흡광도가 595 ㎚로 이동하는 원리를 이용합니다. 따라서 595 ㎚에서의 흡광도가 단백질 농도와 비례합니다. 이 방법은 빠르고 비단백질성분들에 의한 방해도 거의 없어 실험실에서 가장 자주 사용하는 단백질 정량법입니다. 2. 단백질 정량의 중요성 단백질 정량은 생화학 실험에서 기본이 되는 과정입니다....2025.01.15
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단백질 정량법 비교(BCA, Bradford)2025.01.271. 단백질 정량법 본 실험은 BCA Assay와 Bradford Assay를 이용하여 미지시료의 단백질 농도를 추정하고 어떤 방법이 단백질 정량에 더 적절한 방법인지 비교 분석하고자 하였다. BCA Assay 결과 미지시료의 농도는 711μg/mL, Bradford Assay 결과 1705μg/mL로 추정되었다. 표준곡선의 결정계수(R2)는 Bradford Assay가 0.9283으로 BCA Assay의 0.9094보다 약간 더 높아 신뢰성이 있는 것으로 나타났다. 그러나 국립과학원의 분석기준에 따르면 습식분석의 경우 R2가 0....2025.01.27
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