[화학과 수석의 A+ 레포트][조교피드백 포함] Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)

소개

학점 4.44 화학과 수석의 생화학실험 레포트입니다. (10페이지 분량)
저는 생화학실험의 최종성적으로 A+를 받았습니다.
조교가 채점한 흔적도 그대로 업로드 했으니 레포트 쓰실 때 어떤 개념에 대해 중점적으로 서술해야 하는지 참고하실 수 있습니다.

실험과목에서 좋은 성적 얻는 데에 제 레포트가 도움이 될 거라 확신합니다.

목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 고찰

본문내용

1. 실험 목적
수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 Lowry 방법으로 정량한다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득한다.

2. 이론
단백질 정량은 단백질 발색반응을 이용해 흡광도를 측정함으로써 이루어진다. 단백질 양이 적 으면 흡광도도 적게 측정되고, 단백질 양이 많으면 흡광도도 크게 측정된다. 따라서 농도를 알고 있는 단백질의 흡광도를 측정해 표준 곡선을 얻은 후, 농도를 모르는 단백질의 흡광도를 측정하고 그 흡광도 값을 표준 곡선에 대입해 농도를 결정하는 식으로 과정이 진행된다.

자주 쓰이는 단백질 정량 방법들은 아래와 같다. 참고로, 아래 방법들은 발색 방법에만 차이 가 있으며 단백질 발색반응에 의한 흡광도 측정으로 농도를 결정하는 정량 원리는 서로 같다.
1. uv-vis spectroscopy
2. biuret protein assay
3. lowry protein assay
4. bca protein assay
5. bradford protein assay ←단백질 염색용 파란색 시약으로 발색시키는 방법
(*2,3,4번은 발색원리가 근본적으로 같으면서 조금씩의 변화만 있는 방법들이다. 모두 발색시약으로 구리를 사용하기에 파란색을 띈다.)

1 - uv-vis 파장에서 흡광도를 측정하는 방법으로, 별도의 발색 분자 없이도 사용 가능한 방 법이다 일반적으로 방향적 고리 화합물 등의 conjugated 이중결합이 있는 아미노산(ex. 페닐 알라닌, 티로신, 트립토판)이 많이 들어있으면 uv를 잘 흡수하기에 사용가능한 방법이다. 단백 질의 자외선 흡광은 280nm 파장에서 최대치를 가지며, 주어진 단백질을 구성하는 Tyr과 Trp 잔기의 개수를 알면 이론적인 자외선 흡광 계수를 구할 수 있다. 간단하고 빠르게 단백 질의 농도를 측정할 수 있는 방법이나, pH, 이온세기, 버퍼 등의 영향을 많이 받고 rough한 결과만 알 수 있다는 단점이 있다.

참고자료

· 위키백과, biuret test
· 위키백과, Lowry protein assay
· 위키백과, Bicinchoninic acid assay
· 위키백과, Bradford
· 위키백과, Beer-Lambert 법칙
· 위키백과, Dilution
· 위키백과, BSA
· 네이버 지식백과, 마이크로 피펫
· 위키백과, tube
· 위키백과, well-plate
· 위키백과, 시험관
· 위키백과, 시험관대
· 위키백과, voltex mixer
· 위키백과, 분광광도기
· 위키백과, 후드
· 위키백과, 분광광도법
· 위키백과, 흡광도
· 위키백과, urea
· 위키백과, 설탕
· 위키백과, Tris-HCl
· 네이버 지식백과, NaOH
· 위키백과, biuret test
· 위키백과, Folin-Ciocalteureagent