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플라스미드 DNA 추출과 Mini-prep 흡광도 분석2025.11.171. 플라스미드 DNA와 Mini-prep 플라스미드 DNA는 박테리아의 세포외에 존재하는 작은 원형 이중 가닥 DNA로, 염색체와 별도로 독자적으로 복제 및 증식할 수 있습니다. 유전자 재조합 기술에 사용되며 크기가 작아 정제가 용이합니다. Mini-prep은 형질전환된 세균을 배양한 후 플라스미드 DNA를 정제하는 과정으로, 알칼리 변성(alkaline lysis) 방법을 주로 사용합니다. 이 방법은 SDS와 수산화나트륨으로 세포를 파괴하고, 아세트산칼륨으로 중성화한 후 원심분리와 에탄올 침전법으로 DNA를 정제합니다. 2. D...2025.11.17
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[A]서강대학교 현대생물학실험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. TA Cloning TA Cloning은 PCR을 거친 product의 3'에 존재하는 A overhang과 T vector의 3'의 T overhang의 상보성으로 인해 cloning을 진행하는 기법이다. Lac Z selection을 통해 blue colony와 white colony를 확인하여 insert DNA가 정상적으로 삽입되었는지 확인할 수 있다. Self-ligation을 줄이기 위해 alkaline phosphatase 처리나 T-overhang cloning protocol 수정 등의 방법을 사용할 수 있다....2025.01.18
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[서강대학교 현대생물학실험2] (2차 풀레포트) TA cloning & transformation, mini-prep, Enzyme cut, electrophoresis2025.01.221. TA cloning TA cloning을 통해 insert를 삽입한 vector는 transformation을 이용해 세포에 주입하여 lacZ selection으로 insert 삽입 여부를 확인할 수 있다. lacZ operon이 작동하면 β-1, 4-linkage를 분해 시킬 수 있는 β-galactosidase가 생성된다. X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 β-1, 4 linkage를 가지고 있으며 이 linkage가 분해되면 파란색을 띠게 된다. 2. Tra...2025.01.22
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Purification of Plasmid DNA by Mini-prep2025.01.211. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. Plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다. Plasmid DNA 또한 유전자를 지녔기에 transformation을 일으킬 수 있으며, vector로서 사용되기도 한다. 2. Plasmid DNA Purification Mini-prep은 bacteria로부터 plasmid DNA만을 정제하는 실험법이다. 수확한 bacteria에 다...2025.01.21
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DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA2025.01.221. DNA ligation DNA ligation은 T4 DNA ligase 효소를 이용하여 DNA 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 과정이다. 이 과정에서 vector와 insert의 ligation, vector의 self-ligation, insert의 self-ligation 등 세 가지 형태가 나타날 수 있다. 본 실험에서는 HindⅢ와 NdeⅠ로 double-digestion한 vector와 insert를 T4 DNA ligase로 ligation하였다. 2. Transformation ligation...2025.01.22
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Plasmid purification & DNA 정량 A+ report2025.01.171. Plasmid DNA transformation Plasmid DNA transformation이란 특정 종의 세포에 외부 유전자를 도입하여 그 세포가 새로운 유전자 정보를 표현하도록 하는 과정이다. 간단히 말해, ligation된 plasmid를 숙주세포 안으로 넣어주는 것이다. 일반적으로, plasmid는 작은 원형 DNA 조각으로서 bacteria와 같은 원핵생물의 세포외부에서도 독립적으로 복제할 수 있는 DNA이다. 특정 유전자 조각을 plasmid에 삽입한 후, host cell에 도입해서 해당 유전자가 host ce...2025.01.17
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일반생물학실험 REPORT_Plasmid mini-prep2025.05.101. 플라스미드 플라스미드는 세균을 비롯해 많은 생물들이 염색체 외에 추가로 갖고 있는 DNA 조각으로 크기가 상대적으로 작고 스스로 복제할 수 있는 능력이 있어 클로닝할 때 유용한 벡터로 활용되고 있다. 숙주의 성장과 생식과정에 필수적이지는 않지만 종류에 따라 항생물질 등에 대한 저항성 유전자, 접합에 관여하는 유전자, 새로운 대사를 가능하게 하는 유전자들을 가지고 있어 숙주세포에 선택적 이점을 갖게 해주기도 한다. 2. 제한 효소 제한 효소 또는 제한 내부핵산 가수분해 효소는 이중 가닥 DNA 분자의 특정한 염기서열을 인식하여 ...2025.05.10
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박테리아에서 DNA 분리2025.01.271. plasmid DNA 분리 실험 목적은 plasmid DNA 분리에 대해 이해하고, 그 과정 중 하나인 plasmid mini-preparation에 대해 알아보는 것이다. plasmid DNA 분리법의 공통적인 세 단계는 overnight culture, mini preparation, 순수한 plasmid DNA 분리 과정이다. mini-prep은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법으로, 알칼리 조건에서 세포를 파괴시켜 DNA만을 분리하는 것이다. 2. plasmid DNA 분리 시약 실험에 사용된 시약은 LB 배지...2025.01.27
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TA cloning, Mini prep, Enzyme cut 실험2025.11.171. TA Cloning TA cloning은 PCR 산물의 3'-A overhang과 T vector의 3'-T overhang 사이의 상보적 결합을 이용하는 클로닝 방식입니다. T4 DNA ligase를 사용하여 phosphodiester bond를 형성하고 ligation을 진행합니다. 본 실험에서는 insert DNA와 vector의 molar ratio를 1:3으로 설정하여 충분한 ligation이 일어나도록 했습니다. LacZ selection을 통해 transformation 성공 여부를 확인하며, white colon...2025.11.17
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박테리아에서의 플라스미드 DNA 분리 실험2025.12.181. 플라스미드 DNA 분리 (Mini-prep) 플라스미드 DNA를 분리하는 과정을 prep이라 하며, 소량 분리 시 mini-prep이라 부른다. 가장 보편적인 방법은 Alkali lysis method로, 알칼리 조건에서 세포벽과 세포막을 파괴하여 DNA만 분리한다. 박테리아의 두 종류 DNA(chromosomal DNA와 plasmid DNA) 중 plasmid는 알칼리 조건에서 잘 변성되지 않는 특성을 이용한다. 세포벽을 깨는 Lysozyme과 EDTA 조건을 적용하면 세포가 터지고, 원심분리를 통해 상층액의 플라스미드만 ...2025.12.18
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