1. Ligation 실험에서는 Vector와 PCR 산물을 Ligation하는 과정을 수행하였습니다. Ligation 시 주의사항으로는 T4 Ligase를 ice에 보관하며 가장 마지막에 첨가하고, 강한 충격을 피하는 것 등이 있습니다. 2. Transformation Transformation 과정에서는 Competent cell(E.coli)에 Ligation 산물을 처리하고 Heat-shock을 주었습니다. Competent cell은 온도에 매우 민감하므로 실험 중 ice 상태를 유지하는 것이 중요합니다. 실험 결과 일부 ...

1. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. Plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다. Plasmid DNA 또한 유전자를 지녔기에 transformation을 일으킬 수 있으며, vector로서 사용되기도 한다. 2. Plasmid DNA Purification Mini-prep은 bacteria로부터 plasmid DNA만을 정제하는 실험법이다. 수확한 bacteria에 다...

1. DNA Ligation의 원리 및 과정 Ligation은 DNA나 RNA의 말단을 연결하는 과정으로, 재조합 DNA를 만들기 위해 Insert DNA 단편과 vector를 연결한다. 제한효소로 DNA를 자르면 상보적인 말단이 생성되며, ligase 효소가 수소결합을 더 강한 공유결합으로 전환하여 두 DNA 가닥을 연결한다. 제한효소는 가위 역할, ligase는 풀 역할을 수행한다. 2. Ligation에 영향을 미치는 요인 DNA 농도, ligase 농도, 온도, buffer 구성이 ligation 효율에 영향을 미친다. DN...