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수중의 VFAs 분석방법

Volatile Fatty Acids2005/01/05 수처리공정제어연구실 김 재 혁Volatile fatty acid는 대기압에서 증발할 수 있는 물에 용해될 수 있는 Fatty acid로 나타낼 수 있다. 휘발성산은 높은 끊는점에도 불구하고 증류에 의해 쉽게 용액으로부터 증발할 수 있다. 물에 녹을 수 있는 fatty acid는 6-carbon 까지 속한다[Acetic acid(C2H4O2), Proponic acid(C3H5O2) , Pyruvic acid(C3H3O3), Butylic acid(C4H7O2), Lactic acid(C3H6O3), n, i-Valeric acid(C5H10O2), i, n- Hexanoic(C6H12O2)]Standard method 5560C. Distillation Method1. General Discussion본 방법은 6-carbon까지를 포함한 fatty acid만을 위한 실험으로 heating rate, ss의 존재, 최종 증류된 양 등에 의해 회수율이 달라진다. Hydrogen sulfide(H2S) 와 CO2의 존재 시에 적정과정에 Positive error의 요인이 되므로 증류시작 후 처음 15ml는 제거하고, 회수율 인자를 구하여 보정하여 계산한다. 유리 초자 벽면 등이 오염되 있을 경우 실험에 오차를 유발한다는 보고 가 있으므로 실험용 초자는 깨끗이 씻어 사용한다.2, ApparatusCentrifuge (50ml tubes * 4 ea)Distillation flask, 500mlCondenser, 76cm 길이(증발된 것을 수 냉각시킬 수 있는 초자)pH meter증류 장치3. ReagentsSulfuric acid, H2SO4(1+1)Standard sodium hydroxide titrant, 0.1N(1L flask에 NaOH 4.0 g을 넣고 증류수로 채워 1L가 되게 한다)Phenolphthalein indicator solution(1% 페놀프탈레인 용액: 페놀프탈레인 1g을 Ethanol 50ml에 섞고 다시 증류수 50ml를 섞는다)Acetic acid stock solution, 2000mg/L : 1,9ml Acetic acid를 1L flask 에 넣고 증류수로 1L가 되게 한다)4. ProcedureRecovery factor : 실험과정 중의 오차에 의한 회수율을 구하기 위하여, 측정하려는 샘플의 농도와 비슷하게 Acetic acid를 500mL volumetric flask에 만들고, 시료와 같이 증류하여 적정한다.Ex) 10ppm Acetic acid 제조100ml flask에 2000ppm Acetic stock solution 0.5ml를 넣고 증류수로 채워 100mL가 되게 한 다음, 이를 500ml volumetric flask에 담는다.a = 증류 후에 수거된 Volatile acid conc, mg/Lb = 이미 알고 있는 제조된 Acetic acid 농도, mg/L예상 적정 0.01 N NaOH ml량분석 절차ProcedureMethods1- Centrifuge : 시료 200ml (5min) – SS 제거- 상등수 100ml + 증류수 100ml in 500ml 증류 flask2- Add clay chips- Add 5ml H2SO4- Well Mix (acid does not remain on bottom of flask)3- Distill at the rate of about 5ml/min- Discard the first 15ml- Collect 150mL distillate in 250mL cylinder4* Titrate with 0.01N NaOH *1) Color change method : add Phenolphthalein indicator solution 0.2ml(5방울) to the Collect 150mL cylinderend point : 무색 옅은 핑크2) pH meter method : end point pH 8.3(95℃ 에서 적정시 안전한 적정점을 찾을 수 있다)5. CalculationWhere: N= normality of NaOH, andf= recovery factor

생활/환경| 2007.04.16| 4페이지| 1,000원| 조회(703)

유기산, VFAs

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DO 및 BOD 분석방법

PART 10 : 용존산소(Dissolved Oxygen)아지드 변법(Azide Modification)Standard Method 4500-O C.1. 개 론샘플이 50㎍ 이상의 NO2--N/L 혹은 1㎎ 이하의 ferrous iron을 함유한 대부분의 하수, 유출수, 하천수 등에 아지드 변법은 사용된다. 다른 환원제나 산화제는 존재하지 않아야 한다. 만일 샘플이 산화되기 전에 KF 용액 1mL를 첨가하고, 바로 적정을 한다면 ferric iron 이 100~200 mg/L가 존재할 때에도 적용가능하다.2. 원 리1) 황산망간과 알칼리성 요오드칼륨 용액을 넣을 때 생기는 수산화제1망간이 시료중의 용존산소에 의하여 산화되어 수산화제2망간으로 되고, 황산 산성에서 용존산소량에 대응하는 요오드를 유리한다.2) 유리된 요오드를 티오황산나트륨으로 적정하여 용존산소의 양을 정량하는 방법이다.3. 전처리1) 시료가 착색, 현탁된 경우→DO의 정량 곤란→칼륨 명반응집법 처리■ 전처리 조작: 칼륨 명반용액 10mL와 암모니아수 1~2mL 사용? 시료를 마개가 있는 1L 유리병(마개는 접촉부분이 45°로 절단되어 있는 것)에 기울여서 기포가 생기지 않도록 조심하면서 가득 채운다.? 칼륨 명반용액(KAl(SO4)2?24H20) 10mL와 암모니아수(NH4OH) 1~2mL를 유리병의 위로부터 넣고 공기(피펫의 공기)가 들어가지 않도록 주의하면서 마개를 닫고 조용히 위?아래를 바꾸어 가면서 1분간 흔들어 섞고 10분간 정치하여 현탁물을 침강시킨다.Al3+ + 3H2O → Al(OH)3 + 3H+(생성된 H+는 암모니아수의 OH-에 의해 중화된다)? 상등액을 고무관 또는 폴리에틸렌관을 이용하여 사이펀 작용으로 300mL 용존산소 측정병(또는 BOD병)의 아래로부터 침강된 응집물이 들어가지 않도록 주위하면서 조용히 가득 채운다.2) 활성오니의 미생물 플럭이 형성되었을 때→정량 방해→황산구리응집법 처리■ 전처리 조작(황산구리-술파민산법): 황산구리-술파민산용액 10mL 사용? 시료를 마3) 산화성 물질(잔류염소 등)이 함유된 경우→용존산소의 정량을 방해한다.■ 전처리 조작: 알칼리성 KI-NaN3용액(1mL) + H2SO4(1mL) + MnSO4(1mL) → 0.025N-Na2S2O3용액으로 적정→측정치에 보정? 시료중에 잔류염소 등이 함유되어 있을 때에는 공시험으로 별도의 용존산소 측정병에 시료를 가득 채운다.? 알칼리성 요오드화칼륨-아지드화나트륨 용액 1mL와 황산 1mL를 넣어 마개를 닫고, 조용히 위?아래를 바꾸어 가면서 약 1분간 흔들어 섞는다.? 여기에 황산망간용액 1mL를 넣고 다시 위?아래를 바꾸어 가면서 흔들어 섞은 다음 이 용액 200mL를 취하여 삼각 플라스크에 옯기고 전분용액을 지시약으로 하여 0.025N 티오황산나트륨액으로 적정하고 그 측정값을 용존산소량의 측정값에 보정한다.3. 실험 시약 및 기구1) Manganous sulfate solution480g MnSO4?4H2O(400g MnSO4?2H2O 혹은 364g MnSO4?H2O를 대신 사용해도 된다)를 증류수에 녹인다. 그 후 필터로 걸러내고 증류수를 채워 1L로 만든다.2) Alkali-iodide-azide reagent① 포화되거나 불포화된 시료의 경우: 500g NaOH(또는 700g KOH)와 135g NaI(또는 150g KI) 그리고 10g NaN3를 증류수에 녹여 1L로 만든다. 칼륨과 나트륨은 교환되어 사용될 수 있다. 이 시약은 희석되거나 산성화될 때 starch 용액과 빛을 띄지 않는다.② 과포화된 시료의 경우: 500mL 증류수에 10g NaN3를 녹인다. 여기에 480g NaOH와 750g NaI를 넣어주고, 모두 녹을 때까지 섞어준다. 이 용액은 Na2CO3 때문에 흰 색을 띠는 탁도를 가질 것이나, 위해하지는 않다.3) Sulfuric acid, H2SO4, conc이 용액의 1mL는 3mL의 Alkali-iodide-azide reagent와 등가이다.4) Starch2g의 soluble starch와 0.2g의 salicylic 녹인다. 6N 황산 1mL 혹은 농황산 몇 방울과 standard bi-iodate solution 20mL를 넣어준다. 200mL로 희석하고 starch를 첨가한 후, 엷은 노란색이 될 때까지 thiosulfate titrant로 적정한다. 이 용액과 동가일 때, 0.025M Na2S2O3 20mL가 필요하다. 그렇지 않다면 Na2S2O3용액을 0.025M로 조정한다.4. 실험 방법1) 샘플을 250 혹은 300mL BOD병에 모은 후, 1mL MnSO4 용액을 첨가한다.2) 이 후 1mL alkali-iodide-azide reagent을 넣는다(피펫의 팁이 시료에 닿지 않도록 주의한다. 닿을 경우, 증류수로 세척 후 이용한다).3) BOD 마개를 기포가 안 들어가게 신중히 닫고 섞는다. 침전물이 병 전체 부피의 1/2까지 가라앉으면, 1mL H2SO4를 넣는다.4) 마개를 닫고, 침전물이 완전히 녹도록 섞어준다(I2의 노란색 용액이 된다). 원래 샘플의 200mL에 해당하는 보정된 양(시약들로 인한 샘플들의 치환으로 인한 샘플 손실 ⇒ 200×300/(300-2) = 201mL)을 적정한다.5) 0.025M Na2S2O3용액으로 적정하며, 엷은 황색이 될 때 starch 몇 방울 떨어뜨려 푸른색을 만든 후 천천히 적정한다. 푸른색이 완전히 없어질 때까지 적정한다.5. 계산 방법200mL 샘플의 적정시, 0.025M Na2S2O3 1mL는 1mg DO/L와 같다. 증류수의 경우 20㎍/L, 하수 및 이차 처리수는 60㎍/L 정도의 표준편차를 나타내면 실험이 정확하게 이루어졌다고 할 수 있다. 방해물질이 존재할 시에는 100㎍/L정도의 높은 표준편차를 나타낸다. 또한 유기부유물질을 포함하거나 심하게 오염된 경우의 샘플을 사용하면 더 높은 값을 나타내는 경우도 있다.a: 적정에 소비된 0.025N-티오황산나트륨액(mL)f: 0.025N-티오황산나트륨의 여가(factor)V1: 전체의 시료량(mL)V2: 적정에 사용한 시료량(mL)R: 황산망간용액과 알칼리성 요오드 유리2Mn(OH)3 + 2KI + 3H2SO4 → I2 + 2MnSO4 + K2SO4 + 6H2O? 적정 (티오황산나트륨)I2 + 2Na2S2O3 → 2NaI + Na2S4O6PART 10 : 생화학적 산소요구량(Biochemical Oxygen Demand)Standard Method 5210BOD5(5-day BOD Test)Standard Method 5210 B.1. 실험 원리이 방법은 공기가 통하지 않는 일정한 규격의 용기에 샘플을 넘치도록 담고 일정한 온도에서 5일 동안 배양하는 것으로 이루어진다. 최초의 용존산소와 배양 후의 용존산소가 측정되고, BOD는 이 초기와 최종의 차이로 계산되어진다. 초기 DO는 희석을 한 바로 직후에 결정되는 것이기 때문에 이 측정이 끝날 때의 모든 소모된 산소가 BOD측정에 포함된다.2. 샘플링 및 시료 보관BOD분석을 위한 시료들은 시료를 채취하는 동안과 분석하는 사이에도 급격하게 분해되며, 낮은 BOD 값을 나타낼 수 있다. 이런 BOD값의 감소를 최소화하기 위하여 현장에서 바로 분석하거나, 보관하는 동안 온도를 거의 0도에 가까게 한다. 그러나 낮은 온도라 할지라도 분석까지 걸리는 시간을 최소화하여야 한다. 분석 전에는 차가워진 샘플들은 20±3℃에 가까게 올려야 한다.1) grab samples - 분석이 채취한 후 2시간 안에 이루어진다면, 시료를 냉동 보관할 필요가 없다. 분석이 2시간 안에 이루어지지 않는다면, 샘플은 채취하고 나서부터 4℃이하로 보관해야 한다. 분석을 채취할 때부터 6시간 이내에 분석해야 한다. 샘플링 지점이 실험실과 멀리 떨어져있어서 이것이 불가능하면, 냉동보관하면서 거리와 온도를 기록해 놓는다. grab sample collection이후 분석까지 24시간이 넘는 일이 없도록 한다. 샘플들이 수질규제를 위한 목적으로 사용되는 것이라면 6시간 이내 분석을 해야 한다.2) composite samples - composite 동안 4℃이하로 샘플들을 유지한다. 한계 composi을 이용하여 밀봉한다(water seal). BOD bottle의 입구에 물을 첨가하거나 water bath에서 병을 inverting함으로써 water seal을 한다. 배양기간 동안 water seal의 증발을 막기 위해 병 입구를 paper, plastic cup 혹은 foil cap으로 막는다.2) air incubator 혹은 water bath20±1℃로 온도가 일정해야 한다. 광합성에 의한 DO 생성의 가능성을 막기 위해 모든 빛을 차단해야 한다.3) Phosphate buffer solution8.5g KH2PO4, 21.75g K2HPO4, 33.4g Na2HPO4-7H2O, 1.7g NH4Cl을 500mL 증류수에 녹인 후, 증류수로 1L를 만든다.4) Magnesium sulfate solution22.5g MgSO4-7H2O를 증류수에 녹여 1L로 만든다.5) Calcium chloride solution27.5g CaCl2를 증류수에 녹여 1L로 만든다.6) Ferric chloride solution0.25g FeCl3-6H2O를 증류수에 녹여 1L로 만든다.4. 시료의 전처리1) 산성 또는 알칼리성 시료(pH가 6.5~8.5의 범위를 벗어나는 시료)pH가 6.5에서 7.5사이가 되도록 황산이나 수산화나트륨 용액을 이용하여 중화한다. 이때 넣어주는 산?알칼리의 양이 시료량의 0.5%가 넘지 않도록 한다. 희석수의 pH는 샘플의 가장 낮은 희석에 의해 영향을 받아서는 안 된다. pH가 조절된 샘플은 항시 식종한다.2) 잔류염소 함유시료가급적이면 염소공정 앞에 샘플링을 하여 잔류염소가 남아있는 샘플들은 사용하지 않는다. 만약 샘플들이 염소 소독되었으나, 잔류염소가 검출되지 않는다면 희석수를 식종한다. 하지만 잔류염소가 존재한다면 샘플들을 탈염시키고 희석수를 식종한다. 희석수를 식종하지 않고 chlorinated/dechlorinated samples을 실험하지 않는다. 염소는 빛에 노출되면 1~2시간 내에 사라지는 경우도 있다. 이는 보통한다.

생활/환경| 2007.04.16| 9페이지| 1,000원| 조회(819)

용존산소, DO, BOD

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SS 분석방법

PART 1 : SS (suspended solids)액체 물질속에 들어있는 물을 제외한 모든 물질이 고형물로 분류된다. 그러나 고형물(Solids)의 정의는 보통 103～105℃에서 건조할 때 증발잔류물로 남는 물질을 말한다.다음은 고형물의 종류별 또는 처리 대상별의 분류이다.휘발성 ←∥→ 강열잔류TS=TVS+TFS∥∥∥TSS=VSS+FSS+++TDS=VDS+FDS불용성 용존성 무기물 ←∥→ 유기물TS : Total Solids ( 총고형물질, 증발잔류물)FS : Fixed Solids (강열잔류물, 강열 또는 작열 잔류물)VS : Volatile Solids (휘발성 고형물, 강열 또는 작열 감량)TSS : Total Suspended Solids (총부유물질)FSS : Fixed Suspended Solids(강열잔류부유물, 작열잔류부유물)VSS : Volatile Suspended Solids (휘발성 부유물)TDS : Total Disso.ved Solids (총용존 고형물)FDS : Fexed Dissolved Solids (강열 또는 작열 잔류 용존 고형물)VDS : Volatile Dissolved Solids ( 휘발성 용존 고형물)Standard method 2540.1. 실험 준비SS를 측정할 때 시료가 잘 섞여 있어야하며, 만약 시료의 농도가 너무 높으면 적당한 값으로 희석해야한다.(시료내의 고형물로 필터가 막혀 여과에 지장이 될 수 있다.) 그리고 여과 전 필터를 1시간정도 105℃로 건조시켜야한다.2. 실험 기구(1) 메스실린더(2) 여과기(3) 진공펌프(4) GF/C(유리섬유여과지)(5) 데시게이터(6) 저울3. 실험 방법절 차방법1- 건조, 냉각시킨 여지(수분 제거)의 무게측정 → W1- 이때 전자저울이 민감하여 오차가 나올 수 있으므로 몇 차례측정해 오차를 줄인다.2- 여과지를 진공여과기에 잘 부착시킨다.- 증류수를 조금 뿌려줘 여과기에 밀착하도록 한다.3- 잘 섞은 시료를 여과시킨다.- 필요에 따라서 시료는 희석시킨다.- 시료를 주입할 때 주변에 묻지 않도록 주의하고 묻으면 증류 수로 붙어있는 나머지 고형물을 마져 여과한다.4- 여과한 필터를 105℃에서 2시간동안 건조시킨다.- 건조 후 필터의 무게를 측정한다. → W25- 건조 후 필터를 550℃에서 15분동안 강열한다.- 강열 후 필터의 무게를 측정한다. → W34. 계산(1) TSS계산W2 : 여과 후 여지 무게 (mg)W1 : 여과 전 여지 무게 (mg)V : 여과한 시료량 (mL)P : 희석배수·(2) VSS계산W2 : 여과 후 여지 무게 (mg)W3 : 강열 후 여지 무게 (mg)5. 각 고형물의 정의TS : Total Solids ( 총고형물질, 증발잔류물)FS : Fixed Solids (강열잔류물, 강열 또는 작열 잔류물)VS : Volatile Solids (휘발성 고형물, 강열 또는 작열 감량)TSS : Total Suspended Solids (총부유물질)FSS : Fixed Suspended Solids(강열잔류부유물, 작열잔류부유물)VSS : Volatile Suspended Solids (휘발성 부유물)TDS : Total Disso.ved Solids (총용존 고형물)FDS : Fexed Dissolved Solids (강열 또는 작열 잔류 용존 고형물)VDS : Volatile Dissolved Solids ( 휘발성 용존 고형물)(1) 용존 고형물물속에 포함한 오염된 고체성 부유 물질로서 무기성 및 유기성 이물질의 양을 ppm 단위로 나타낸다. 입경 2mm이하의 물에 용해되지 않는 물질, Suspended Solids 의 약칭. 또는 현탁물질이라고 한다. 크기가 대략 0.1㎛ 이상의 입자로 수중에 부유하는 물질을 말한다. 부유물질은 수중의 탁도를 유발하는 원인물질로서, 어패류의 호흡과 수중식물 및 조류의 광합성 작용을 방해한다.(2) 총용존고형물TDS는 Total Dissolved Solide(총용존고용물)의 약자이다. 오염된 물을 여과지에 여켰을 경우 여과지에 걸러지는 것이 있고 통과하는 것이 있다. 여과지에 걸려지는 것을 SS(Suspended Solide 부유물질)리고 하며 이를 건조하여 무게를 측정한다. 여과지를 통과한 용액 속에 있는 용해된 물질이 바로 용존고형물(TDS)이라고 한다.(3) 휘발성고형물 (Volatile Suspended Solids)총고형물중 550±50℃로 가열할 때 휘발하는 고형물을 말한다.(4) 침강성고형물

생활/환경| 2007.04.16| 4페이지| 1,000원| 조회(1,886)

ss, suspended solids, 고형물 분석방법

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[환경미생물학] mpn Test 평가A+최고예요

{대 장 균 군 실 험 (MPN Test)실험일시 : 2001 . 10. 18.(목)실 험 조 : 2조실 험 자 : 김재혁실험자 학번 :1997024731. 실험 목적▶ 대장균 시험은 그 물을 인간이 이용하는데 있어 적합한가의적부를 악리 위한 것이다. 이 시 험에 의해 검출되는 세균은 보통 인축의 장관내에 기생하므로 소화기계 전염병 및 인축분뇨 에 의한 오염의 지표가 된다는데 의의가 있다. 대장균은 하수중에 통상 존재하며 그 수는 ml 당 1,000,000에 이른다 대장균은 무해한 것으로 알려져 있고 이의 존재는 다른 병원균의 존 재 가능성을 시사한다. 배설물 오염에 대한 실험은 시료속에 존재하는 대장균의 측정수에 대 한 개략적인 조사로 시작된다. 이 시험을 통해 대장균의 정량 및 정서성분석을 해보고 오수처 리플랜트에서 요구되는 수질로 처리되었는가의 여부를 판단해보고자한다.2. 실험 이론▶ 대장균군은 Gram음성, 무아포성 간균의 유당을 분해하여 산과 가스를 발생하는 모든 호기성또는 통성혐기성균을 말한다.대장균군은 온혈동물의 장과 내장에서 생식하고 있으므로 그것이 수중에 존재하는 것이 많은 경우는 그 물이 온혈동물의 분뇨로 오염되어 있는 것을 의미한다. 따라서 그 물은 소화기계의 병원세균에 의하여 오염되거나 또는 그 가능성을 나타낸다. 또 수중의 대장균군의 검출은비교적 용이하므로 분변에 의한 오염의 유무를 직접 알 수 있고 또 그 오염도를 추정하는 데 유효하다.▶ 대장균군의 계수법:1. 최적확수시험법1.1 적용범위본 시험방법은 환경정책기본법 제10조의 환경기준에 규정된 대장균군수 시험에 적용 한다.1.2 측정원리세균학적 정성적 수질검사는 3단계로 구분해서 하게 된다. 즉 추정시험, 확정시험, 완전시험으로 구분하게 되며 각 단계는 대장균의 특성에 따라 검사하게 된다.1) 추정시험대장균은 유당을 발효하여 가스를 생성하는 특성을 가지고 있다. 그러므로 듀람시험관(Durham Tube)발효관이 들어있는 시험관에 유당배지 일정량을 넣고 일정량의 검수를 넣어 35℃의 배은 부분적으로 들뜨게 된다. 그러나 대장균 이외에 다른 박테리아도 유당배지에서 가스를 생성하기 때문에 가스발생만으로 절대적인 대장균군이라고 판단하기에는 무리가 있기 때문에 대장균군의 추정시험으로써 유당배지 발효시험을 하게 된다. 그러므로 추정시험 양성을 나타내는 박테이라는 대장균으로 확정되어서는 안된다.2) 확정시험추정시험에서 양성으로 나타났을 경우 가스를 발생하는 박테리아는 대장균군이 아닐수도 있으므로 그람음성의 유당 발효세균의 존재를 확인하기 위한 확정시험이 필요하다. 확정시험에 사용되는 접종배지로는 흔히 EMB(Erosin Methlence Blue)한천배지를 사용하낟. 이 배지에서 접종하는 방법은 추정시험 양성시험관에서 한 백금니를 채취하여 세균을 순수분리배양과 같은 방법으로 EMB 한천 배지 평판 표면에 도말 접종한다. 대부분의 세균은 염료 등에 의해 생장에 저해되나 대장균군은 유당 때문에 생장이 촉진된다. EMB 한천배지에 포함한 메틸렌브루와 이오신 두 염료는 그람양성의 세균 발육을 억제하는 효과를 가지고 있다.E.Coli. 와 E.aerogens의 집락은 크기와 녹색의 금속성 관액에서 차이를 나타낸다. 즉 E.Coli.의 집락은 그 규모가 적으며 금속성광택을 내는 반면 E.ferogens은 중심에 검은색을 띠고 볼록하고 습기가 있으며 EMB배지외에 BGLB(Brilliant Geenbile Lactose Broth)가 사용되기도 한다. 접종방법은 EMB배지 접종때와 같으며 시험관내에 듀람발효관을 넣어 일정시간 배양하면 대장균군은 저해염료와 관계없이 증식하고 비대장균은 염료 때문에 일반적으로 배양 24시간에 생장이 저지된다. 이 때 가스발생이 없으면 대장균군은 음성이다.3) 완전시험확정시험에서 사용된 emb배지에서 대장균형으로 나타난 세균을 보통 한천뱉의 사면배지와 유당액체배지에 접종하여 최종적으로 검사한다. 접종한 사면배지와 한천배지를 35℃에서 2시간 배양후 유당액체배지에서 가스를 형성했는가를 조사하고 한편 사면배양의 집락은 그람염색을 실시하여 Tube에 Lactose broth 15ml 를 넣는다.2 Druham Tube를 Test tube에 넣고 함께 멸균했을 경우네는 핀셋으로 조심스럽게 durham tube를 test tube에 넣는다.3 동일한 희석비를 가지고 5개의 test tube에 1ml씩을 넣는다. 따라서3개의 희석비를 5개식 만들어 15개를 만든다.4 Test tube 의 뚜껑을 닫고, test tube내에 있는 durha tube에 기포가 생기지 않게 놓는다.5 35-37℃에서 24시간 배양하여 가스발생여부를 확인한다.6 가스가 발생하지 않았을 때에는 추정시험 음성이고, 가스발생이 있을 때에는 양성이며, 대장균의 확인에는 확정시험에 따른다.▶ 확정시험1 추정시험에서 lactose broth를 사용했던 것과는 달리 확정시험에서는 BGLB broth 40g/l를 만들어 멸균하여 사용한다.2 test tube에 멸균한 BGlB를 20ml씩 넣는다.3 추정시험에서 가스가 발생한 발효관에서 발효관에서 inoculation needles을 이용하여 무균조작으로 BGLB both가 분주된 발효관에 이식한다.(5개씩).4 Durham tube에 기포가 생기지 않게 놓은 후 35-37℃에서 48시간 동안 배양하여 가스발생여부를 확인한다. (가스가 발생하면 확정시험은 양성).5 배지의 색깔이 갈색으로 되었을 때에는 완전시험을 해야 한다.▶ 완전시험대장균군의 존재를 완전히 증명하기 위하여 위의 평판상의 집락이 그람음성 무아포성의 간균임을 확인하고 유당을 분해하여 가스의 발생을 재확인 한다. 완전시험에는 엔도 또는 EMB 한천배지를 사용한다.확정시험에서 갈색으로 변한 시험관은 다시 엔도 또는 EMB 평판배지에 이식하여 다음과 같이 조자을 한다.평판배지에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 대장균적 집락 또는 2개이상의 비전형적인 집락을 따서 라우릴 트리프토스부이온 또는 유당부이온 발효관과 보통 한천배지 사면에 이식한다.부이온 발효관은 48±3시간 배양하여 가스 발생여부를 관찰하고, 보통 한천사면 배지는 2생시험관수(추정시험)5개3개1개0개( 시료 : 갑천시료 )▶ Endo agar가 굳지 않아서 확정시험과 완전시험을 하지못하고 추정시험으로 실험을 마쳤다.▶ Thomas의 근사식에 의한 MPN/100ml{MPN/100ml = {{ 양성관의 수×100} over { SQRT { 음성관의 시료총량(ml)×총 시료량(ml)} }에서{MPN/100ml =4 TIMES 100{ } over { SQRT { 0.024(㎖) TIMES 0.055(㎖)} }=11009.6MPN/100 ml{{{ 양성관의 수×100} over { SQRT { 음성관의 시료총량(ml)×총 시료량(ml)} }▶ 최적확수표에 의한 값(참고 참조){1) 0.1ml, 0.01ml, 0.001ml에서5 - 3 - 1 = 110 (최적확수표값) * 100 (배) = 11000 MPN/100ml(기준이 10ml , 1ml , 0.1ml 이므로 100배를 해주었다.)2) 0.01ml, 0.001ml, 0.0001ml에서3 - 1 - 0 = 11 (최적확수표값) * 1000 (배) = 11000 MPN/100ml(기준이 10ml , 1ml , 0.1ml 이므로 1000배를 해주었다.){5. 토의 및 고찰Thomas식에 의한 결과 값과 최적확수표에 의한 결과 값을 비교해본 결과 Thomas식에서는 11009MPN/100ml 였고 최적확수표에서는 11000MPN/100ml 로 비슷한 결과 값이 도출됫음을 알 수 있었다.이 번 실험의 목적은 시료의 3단계 추정, 확정, 완전, 실험을 통하여 대장균의 정량적 분석과 더불어 분변성 오염원으로서의 대장균군을 알아보는데 있다. 즉 대장균군의 정량 및 정성분석까지가 실험 목적이었으나 추정시험 후 확정시험 하는데 있어서 EMB(Erosin Methylene blue)한천배지를 사용하려 했으나 agar을 적게 넣어서 굳지 않았기에 추정시험만으로 실험을 마쳐야 했다. 실험의 전체적인 순서와 왜 그렇게 해야되는지에 대해 폭 넓게 토의해보았다. 먼저 배운데로 대장균군에는 E. Coli우라도 가스를 발생하는 박테리아는 대장균군이 아닐수도 있으므로 그람음성의 유당 발효세균의 존재를 확인하기 위해 확장시험을 하는데 여기에 쓰이는 EMB배지에는 메틸렌블루와 이오신 두 염료가 포함되어 있고 이 두염료는 양성의 세균 발육을 억제하는 효과를 가지고 있기에 그람음성인 대장균군만이 생장을 계속할 수 있는 것이다. 생성된 Colony로 Aerogenes와 E.Coli, Enterobacteria를 구분해줄 수 있는데 금속성 초록광택의 큰 Colony인 E.Coli와 Enterobacteria가 발견됫을 때에는 분병성 오염이 됫다고 확정하고 다시한번 이를 확인해주기 위해 완전시험을 하는 것이다. 하지만 중앙에 검은색을 띄고 볼록하고 습기가 있는 작은 Colony인(조교님은 Pink색의 작은 colony라고 하셨지만 실험을 하지 않았기에 우리만의 표현을 할 수 가 없다.) Aerogenes가 발견됫을 시에는 대장균군이지만 분변성오염은 되지 않았다고 보고 완전시험을 하지 않아도 되는 것이다.전체적인 실험이 희석, 배양, 멸균 등 이미 몇 차례 해보았던 실험과정 이였기에 그리 어렵지 않았다.한가지 어려운 점이였다면 시험관에 듀람 Tube를 넣어줄 때 기포가 들어가지 않게 넣어주는 작업이 어려웠던 같다.마지막으로 결과 값과 수질기준과 비교를 해보았다. 우리가 구한 갑천시료에서의 대장균군수는11000 MPN/100ml 으로 어떠한 수질기준보다도 높은 수치임을 알 수 있다.(참고 자료 참고)실험시 주의해야 할 사항들에 대해서 생각해보았다.▶ 대장균군은 분변성 오염원이 될 수 있으므로 특히 인체로부터의 오염을 막기위해서 실험시 위생상태를 유지해야한다.(Poly glove 착용 및 실험장소를 멸균)▶ 가장 기초적인 실험기구의 완전 멸균이다(시험관, 듀람튜브, 핀셋, 피펫...)▶ 각각의 희석배수대로 5개씩 만들어 놓은 시험관에 듀람튜브를 넣을 때 튜브내에 gas가 들어가지 않게 해야하며 되도록 뉘위는 것보다 세워놓아야 실험시 정확한 결과를 얻을 수 있다.다른 조와 결과 값-2-0

공학/기술| 2001.11.02| 9페이지| 1,000원| 조회(2,289)

미생물학, 대장균, MPN

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