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[의학] 염증반응, 예방접종, 종양면역 평가A+최고예요

면역학 4차 레포트염증반응, 예방접종, 종양면역건국대학교 의과대학의학과 2학년담당교수님 : 허억 교수님제출일 : 2005년 6월 1일1. 요약Ⅰ . 염증반응- 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환장애와 삼출(渗出), 조직 증식의 세 가지를 병발하는 복잡한 병변이다. 인체가 병원체에 감염되는 일은 쉽지 않다. 물리적 장벽은 비 특이적으로 병원체들이 체내로 들어오는 것을 방지한다. 즉, 피부와 같은 물리적 장벽은 인체에 해로운 것이든 아니든 간에 모든 세균에 대한 장애물이다. 콧속에는 점액이 있어 들어오는 먼지를 제거할 수 있고, 리소자임을 포함한 눈물은 눈으로부터 화학물질을 씻어낸다. 이런 장벽을 통과하더라도 위로 들어온 대부분의 미생물은 위에서 분비되는 위산 때문에 죽는다. 또한 호흡계로 침입한 미생물은 기도의 섬모운동으로 제거된다.만일 병원균이 신체의 물리적 장벽을 개고 들어온다면 염증반응이 일어난다. 염증반응(inflammation)은 상처부위에 침입한 미생물들에 대한 적대 환경을 만드는 비 특이적인 방어작용이다. 염증반응의 대략적 과정은 다음과 같다. 염증반응 초기에는 식세포가 상처부위로 모여들어 침입한 세균을 공격한다. 그리고 상처부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시킨다. 혈류가 증가하므로 상처부위가 따뜻해지며 피부가 붉게 변하고 부어오른다. 이런 과정은 모두 일련의 면역 보호 작용이라 할 수 있다.염증은 선천성 면역의 일부이며 다른 동물에서처럼 인간의 선천성 면역은 병원체에 특이적으로 존재하는 세포 표면의 패턴을 인식한다. 식세포는 그런 표면을 가진 세포를 비자기로 인식하고 병원체 표면에 달라붙는다. 신체에서 어떤 식세포는 한 조직에 머물러 있지만 호중구(neutrophil), 대식세포(macrophage) 등은 움직인다.Ⅱ . 예방접종- 전염성 질환을 예방하기 위하여 미생물 병원성을 제거하거나 약하게 하여 인체에 주사 또는 접종하는 것이다. 예방접종은 해당 질환을 앓지 않게 하고 감염에 대하여 유리한 쪽으로신에 존재하는 sialynated carbohydrate 구조는 셀렉틴과 반응하여 세포접합을 유도한다. 백혈구 표면에 발현된 L-selectin은 림프절의 혈관내피세포에서 발현되는 CD34나 Gly-CAM과 같은 mucin-like molecule에 결합하여 림프절로 림프구가 들어가는데 중요하게 작용한다. 또한, 호중구에서 발현되는 PSGL-1이라는 mucin-like molecule은 염증조직 근처의 혈관내피세포에 발현되는 E-selectin이나 P-selectin과 반응하여 호중구를 염증조직으로 이동하게 만든다.3) Integrin family- 인테그린은 와 두 대의 단백질이 모여서 이루어진 heterodimeric receptor로서, 주로 백혈구 표면에 발현되어 백혈구가 혈관내피세포에 결합하거나 다른 세포와 상호작용할 때 세포접합분자로 작용한다. 인테그린은 subunit의 구조에 따라 여러 그룹으로 나뉘어지며, 백혈구의 집단에는 서로 다른 인테그린이 발현된다. 인테그린은 다른 세포에 발현된 Ig superfamily에 속하는 세포접합분자와 반응하여 세포접합을 유도한다.4) Immunoglobulin superfamily- 이 세포접합분자는 immunoglobulin의 domain 구조를 가지고 있는 세포접합분자를 말하는 것으로, 이들은 인테그린과 결합하여 세포접합을 유도한다. ICAMs과 VCAM 등은 혈관 내피세포에 발현되어 백혈구와 상호작용하는 데 관여하며, MAdCAM 분자는 점막상피조직에 발현되어 점막조직으로 면역세포가 이동하는 데 중요한 역할을 한다.2. 림프구 혈관통과와 세포접합분자활성화된 림프구는 염증반응 때에 항원이 있는 곳으로 이동하여 항원을 제거하며, naive lymphocyte는 특정한 이차림프조직으로 들어가 면역반응에 관여한다. 이들 림프구가 적절한 조직으로 이동하기 위해서는 혈관내피세포 사이를 통과해야 한다. 특히 림프구의 림프조직으로의 이동은 각각의 림프조직에 정상적인 수의 B cell과 T cell을 유지하는데 매우 중요한 탄수화물구조와 혈관내피세포의 selectin 사이의 약한 결합에 의하여 나타난다. 염증반응에서 오는 신호는 근처 혈관내피세포에 작용하여 내피세포 표면에 E-selectin과 P-selectin의 발현을 증가시킨다. 이들 selectin들은 호중구 표면에 발현된 mucin-like cell adhesion molecule이나 sialyl Lewisx라고 부르는 탄수화물 구조와 반응하여 호중구를 내피세포에 결합시킨다. 그러나 이 반응의 결합력은 약하여 혈류의 물살에 의하여 (shearing force) 다시 떨어지고, 떨어진 호중구는 다음 내피세포와 결합하는 방식으로 호중구의 구르기 (rolling)이 시작된다. 이러한 과정에 호중구는 내피세포가 분비하는 화학유인분자 (chemoattractant)에 의하여 활성화되어, 호중구 표면의 integrin 분자를 친화력이 높은 구조로 바꾼다. 혈관내피세포가 만들어내는 화학유인분자에는 IL-8이나 MIP-1 와 같은 chemokine과 PAF, C5a, C3a 등과 같은 인자들이 있다. 이렇게 친화력이 증가된 integrin은 내피세포표면에 발현된 ICAM 들과 반응하여 내피세포에 단단히 결합하게 되고, 결국에는 혈관벽의 내피세포사이를 뚫고 염증조직으로 이동하게 된다 (그림 6).{{4. 염증반응 매개물질 (inflammatory mediators)- 염증반응이 시작되고 진행되는 동안 염증반응을 촉진하는 다양한 종류의 물질들이 만들어져 염증반응의 여러 현상들이 시작되고 발전하도록 자극한다. 이들 염증매개물질들은 림프구, 호중구, 대식세포, mast cell, 호산구 등과 같은 백혈구 뿐 아니라, 혈소판으로부터도 만들어진다. 이러한 염증반응 매개물질에는 chemokine, 혈장효소단백질, 지용성 염증매개물질, cytokine 등을 들을 수 있다.1) Chemokines (케모카인)- 케모카인은 약 100여개의 아미노산으로 구성된 작은 단백질들의 집단으로, 선택적으로 백혈구 소집단의 세포접합, 화학유인작용, 활성화 등을 조ve oxygen intermediate)나 반응성질소중간체 (reactive nitrogen intermediate) 등을 많이 생산한다. 이러한 반응성 산소나 질소화합물들의 작용과 세포내과립에서 분비된 protease, phospholipase, elastase, collagenase 등의 분해효소들의 작용으로 감염균들이 살해되어 사라지게 된다. 이 과정은 비특이적인 과정이어서 결과적으로 이웃한 조직들도 파괴될 수 있으며, 염증부위에 죽은 세포, 죽은 미생물, 혈장, 단백질 등이 쌓이게 되면 고름 (pus)이 되기도 한다.2) 급성염증반응 (acute inflammatory response)- 급성염증반응은 감염이나 조직손상을 처치하기 위하여 국소적인 반응과 전신적인 반응을 수반한다.국소적인 급성염증반응의 특징 (hallmark)은 부종 (swell), 발진 (redness), 발열 (heat), 통증 (pain) 그리고 기능상실 (loss of function)의 다섯 가지로 표현된다. 조직손상이 발생한지 수 분 내에 근처 혈관이 확장되어 (vasodilation), 혈액의 양이 늘어나고 대신 혈류의 속도는 줄어들어 백혈구가 이동하기 좋은 조건이 마련된다. 또한 늘어난 혈액은 조직을 붉게 만들고 (redness), 조직을 데우게 되고 (heat), 혈장성분이 조직으로 들어가게 만들어 (swell), 조직의 부종 (edema)을 유도한다. 또한 혈장성분의 유출이 나타나면서 염증반응을 매개하는 kinin 체계, 응고 체계, fibrinolytic 체계가 활성화되어 bradykinin, fibrinopeptide 등이 만들어지면서 혈관 확장이 더욱 진행된다. 이 과정동안 활성화된 C3a, C5a 등과 같은 보체단백질 조각들은 mast cell을 자극하여 histamine을 분비하여 혈관 확장과 평활근 수축을 유도한다. 이 과정에 prostaglandin도 작용하여 혈관확장과 혈관의 투과성이 더욱 증가된다.이러한 혈관의 변화가 시작된 지 수 시간 내에 호중구가 염증반응을 억제할 수 있을 것이다. 이 과정에 세포접합분자들이 중요한 역할을 하므로, 이론적으로 이들의 작용을 막아줄 수 있는 항체와 같은 분자를 이용하여 염증반응을 억제할 수도 있을 것이다. 동물모델을 이용한 연구에서는 LFA-1에 대한 항체가 염증부위에 호중구의 축적을 방해하는 것으로 확인되었으며, ICAM-1에 대한 항체도 조직 괴사를 억제해주고, 이식된 조직의 파괴를 지연시켜주는 것으로 확인되었다. 현재 이러한 항체를 이용한 방법은 콩팥이식환자를 대상으로 임상시험 중에 있다.Ⅱ . 예방접종(Vaccine)- 예방접종은 해당 질환을 앓지 않게 하고 감염에 대하여 유리한 쪽으로 반응을 만들어 내는 역할을 함으로써 질병에 걸리지 않도록 해 준다. 면역원으로 사용되는 접종액을 넓은 의미로 백신이라고 한다. 예방접종에 쓰이는 항원(抗原)에는 크게 나누어 세균성 항원과 바이러스성 항원이 있는데, 세균성 항원에는 사멸된 전체 세균(백일해 백신 등), 병원체가 체외로 배출하는 독소를 멸독한 톡소이드(디프테리아 ·파상풍 등), 독력을 약화시킨 생세균체(BCG 등) 등이 있고, 바이러스성 항원에는 생약독화한 것(소아마비)과 사멸된 백신(인플루엔자) 등이 포함된다.한국에서는 전염병 예방법에 두창 ·디프테리아 ·백일해 ·장티푸스 ·콜레라 ·파상풍 ·결핵 등 7개 질병에 관하여 정기 예방접종을 시행하도록 되어 있다. 또 대한소아과학회에서는 BCG ·소아마비 ·디프테리아 ·백일해 ·파상풍 ·홍역 ·유행성이하선염(볼거리) ·풍진 ·일본뇌염 등 9개 예방접종을 정하고 있다.1. 예방접종을 추천 시 고려되어야 할 사항1) 첫째는 예방접종을 하였다고 해서 그 질병에 대하여 완전히 예방되는 것은 아니며, 개인위생 ·환경 등에 주의를 해야 한다. 백신에 따라서 효과가 큰 것도 있고 작은 것도 있으며, 또 예방접종에 따른 부작용도 있을 수 있다. 그러므로 예방주사를 맞았다고 하여 질병에서 완전히 해방되는 것은 아니다.2) 둘째는 그 병의 위험성이 얼마나 큰지를 감안하여야 한다. 환경이 개선다.

의/약학| 2005.06.01| 38페이지| 1,000원| 조회(1,134)

예방접종, vaccine, 염증반응, inflammation, 종양면역

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[분자생물학] PCR 과 DNA복제 평가A좋아요

분자생물학 2번째 리포트PCR 과 DNA replication〈요약〉1) PCR- 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하다.PCR은 DNA분자의 특정 부위를 선택적으로 증폭시킨다. 어떤 DNA분자의 어떤 부위라도 선택될 수 있다. Border sequence들은 PCR이 수행되기 위해서 알려져 있어야 한다. 또한 두 개의 짧은 oligonucleotide가 이중나선의 각 가닥과 혼성화되어야만 한다. DNA합성반응을 위한 primer로써 역할을 하는 이들 oligonucleotide들은 증폭될 부위의 범위를 정해준다.◎ PCR 과정1) Pre-PCR status : PCR 전 실온의 buffer condition에서의 DNA는 안정적인 B form double helix구조를 이루고 있다. templates라고 부르기도 한다.2) Denaturation : 공유 결합으로 이루어져 있다. PCR에서 base pairs간의 hydrogen bond를 끊기 위해 사용하는 energy는 보통 90oC까지 열을 가하 면 single strnad로 풀어진다.3) Annealing : PCR의 최종적인 sensitivity와 specificity를 결정하는 제일 중요 한 과정.4) Extension : Taq polymerase가 primer의 3’end의 free OH기를 시작점으로 해서 single strand template의 상보적인 dNTP를 가져와서 붙여 나가며 chain extension을 시행한다.2) DNA replication- DNA 분자는 상보적인 염기쌍에 의한 이중나선으로 된 독특한 구조를 가지고 있다. 복제되는 동안에 DNA 분자의 이중나선은 풀려지고 상보적인 염기쌍은 서로 분리된다. DNA 복제는 먼저 단사 DNA를 주형으로 하여 작은 RNA 단편을를 만들게 되는 것이다(amplification). 1번의 denaturation-annealing-amplification으로 1개의 DNA double strand(또는 DNA duplex)를 template로 하여 원하는 증폭부위의 DNA duplex를 2개로 증폭되며 다시 한번의 cycle을 반복하게 되면 2개가 4개로 증폭되는 것이 바로 PCR amplification의 결과이다. 따라서 증폭되는 DNA duplex의 수는 2n으로서 25 cycle의 PCR을 하면 225 = 3.4 x 107 DNA를 얻을 수 있게 되는 것이다. 이와 같은 PCR 반응조건에서 보듯이 DNA polymerase는 일반 온도조건에서 생육하는 생명체로 얻을 수 있는 것이 아니라 94oC에서도 안정적인 heat-stable DNA polymerase여야 한다. 다행히도 화산지역의 온천같이 끓는 물에서 서식하는 세균들이 이미 발견되었고 생육적정온도가 72oC인 세균 Thermus aquaticus에서 얻은 Taq DNA polymerase로 이 PCR 반응에 성공적으로 사용될 수 있었다. 매우 간단한 아이디어가 현재 생명공학 연구에 필수적으로 사용되는 tool로 사용되는 것은 이 PCR 방법뿐만 아니라 현재 게놈염기서열 분석에 기본이 되는 DNA sequencing 방법 또한 매우 간단한 아이디어가 실용화되어 그 개발자에게 Nobel Prize를 안겨준 것이다.④ Genomic DNA를 뽑는 방법( PCR을 위한 시료 준비)* 조직(tissues)인 경우1) 막자사발에 조직을 적당량 놓는다.2) -196도 액체 질소를 부어, 얼린 뒤 잽싸게 가루로 빻는다.(falcon tube에 유리막대로 하면 더 쉬움)3) 10x lysis buffer solution을 넣어 더욱 미세하게 빻는다.4) phenol extraction을 시행한다.동일 volume의 phenol을 넣고 상온에 Dance위에서 5분간 돌린다.(pitfall: phenol을 넣은 뒤 vortex에 돌리면, DNA0cycle을 돌린다.6) 중간에 꼭 확인하여 기계가 잘 작동하는지 확인한다.7) 거의 끝나갈 무렵 1% agarose gel을 만든다.삼각 flask에 agarose powder를 1x TAE 에 섞어 원하는 농도에 맞춘 뒤, 전자 레인지에 1분이내로 돌려 완전히 녹게 한다.1% Agarose Gel = Agarose 0.4g + 1xTAE 40ccAgarose의 농도(%)Pore를 통과할 수 있는 범위(kb)0.35 - 600.61 - 200.70.8 - 100.90.5 - 71.20.4 - 61.50.2 - 32.00.1 - 2* 1x TAE(Tris-acetate)0.04M Tris-acetate0.001M EDTA* 50x TAE : concentrated stock solution (per liter)Tris base242gGlacial acetic acid57.1ml0.5M EDTA (pH 8.0)100ml8) 꺼내어 물에다 겉을 돌려가며 식힌다.9) ethidium bromide(EtBr)를 지금 넣든지, gel이 전기영동기구내에서 굳은 뒤 1x TAE (buffer solution)에 넣든지, 두 가지 방법이 있다.(전자는 staining, destaining 시간이 걸리지 않는 장점이 있으나, DNA와 결합하는 자리를 차지 해 band가 확실히 선명하게 안 나올 수 있고, 후자는 시간이 조금 더 소요되나, 선명한 band를 얻을 수 있다.)10) gel plate에 gel을 부은 뒤, well을 꽂고 굳힌다.11) 다 굳은 후 well을 떼어내고, 전기 영동 기구 내에 위치 시킨 뒤, gel위 에 1x TAE solution을 붇는다.12) paraffin paper를 한 장 책상 위에 놓고, PCR을 시행한 tube에서 각각 5ul (원하는 만큼)를pipette으로 떨어뜨리고, Bromphenol blue 1ul를 그 밑에다 떨어뜨려서, pipette으로 섞는다.(pitfall: 섞을 때, air가 들어가지 않게 한다) (Bromphenol 경우에도 cDNA의 5'과 3'-끝의 non-coding region 일부는 library screening에서 얻기가 어렵다. 이러한 문제를 해결하고자, 1988년 Frohmann 등은 다음과 같은 방법을 소개하고, 이를 RACE(rapid amplification of cDNA ends)라 이름하였다. 즉, cDNA의 일부 염기서열을 알고 있으면, 이 부분에서 gene specific primer를 합성하고 PCR reaction을 통해 5' 혹은 3'-end 까지의 DNA를 증폭하는 것이다. 3'-RACE에서는 mRNA의 3'-end에 존재하는 poly(A) tail을 이용할 수 있으므로, down stream primer로 oligo-(dT) primer를 쓴다. 그러나, 5'-RACE의 경우는 gene specific primer로 합성한 1st single strand cDNA의 끝에 TdT(terminal deoxynucleotidyl transferase)를 사용하여 poly(A) 혹은 poly(C) tail을 인위적으로 만들어 주어야만 한다.4) ISPCR(In Situ Polymerase Chain Reaction)PCR은 원하는 DNA를 대량으로 증폭시키는 방법이고, in situ hybidization (ISH)은 세포나 조직에 존재하는 극미량의 DNA 및 RNA를 찾아낼 수 있음은 물론 원하는 유전자들의 위치까지 확인할 수 있는 방법이다. ISPCR은 이 두 가지 방법의 장점을 혼합하여 응용한 방법으로서 PCR의 sensitivity와 ISH의 specificity를 고루 갖추고 있다. ISPCR의 실험원리는 일반적인 PCR 방법과 같으나, slide glass 등의 사용에 적합한 ISPCR용 기구가 필요하며 사용하는 기구에 따라 반응시키는 방법들이 다양하게 제시되어 있다.ISPCR은 세포내의 target sequence를 증폭시키는 것으로부터 반응이 시작되며 세포막을 통해 여러 물질(예: PCR 용액에 들어 있는 salt 등)들이 쉽위는 상대적으로 쉽게 분리되는데, 복제기점은 전형적으로 A-T염기쌍이 많이 발견된다. 세균의 게놈은 7백만 개의 뉴클레오티드로 구성된 원형으로 되어 있으며, 단 한 개의 복제기점을 가지고 있다.인간의 게놈은 약 10,000개의 복제기점을 가지고 있다. 인간의 경우에는 여러 군데에서 동시에 DNA복제를 개시하므로 세포는 상대적으로 신속하게 DNA를 복제할 수 있다.개시단백질이 복제기점에 결합하여 이중나선을 열고나면 DNA복제를 수행하는데 필요한 일련의 단백질과 결합하는데, 이 단백질군은 각 구성단백질이 독특한 기능을 수행함으로써 복제기구로 작용한다.1) 이중나선상의 특정한 위치에 복제가 시작되는 점이 있는데, 이 부분에 복제를개시하는 단백질이 붙으면 DNA가닥이 분리되며, 공기방울 같은 모양으로 된다.2) 공기방울 모양의 양쪽 끝에서 새로운 DNA가닥이 합성된다.3) 진핵세포는 복제시발점을 많이 갖고 있으므로 복제가 여러 곳에서 동시에 일어난다.4) 새로 합성되는 DNA 사슬(strand, 가닥)은 5'→3'방향으로 합성된다.5) DNA가닥은 3'과 5' 말단을 가지며, 이때 숫자는 뉴클레오티드에 있는 당의 탄소번호이다.6) 각 DNA가닥의 한 쪽 끝에 있는 당의 3'탄소에는 OH기가 붙어 있으며, 다른 쪽 끝에 있는 당의 5' 탄소에는 인산기가 붙어 있다.7) DNA중합효소 (DNA polymerase)는 뉴클레오티드를 DNA가닥의 3'말단에만 붙인다. 그래서 새로운 DNA는 5'→3'방향으로 길어진다.8) 분리된 DNA의 두 가닥에서 새로운 DNA가 합성될 때, 3'말단이 주형인 사슬은 새로운 DNA사슬이 5'→3'방향으로 연속적으로 합성되나, 5'말단이 주형인 사슬의 경우는 사슬이 분리되는 방향과는 반대로 5'→3'방향의 짧은 단편이 합성된다음 DNA연결효소(ligase)에 의해서 하나의 긴 가닥으로 된다.9) DNA복제는 신속하고 정확한데, 10억 개의 뉴클레오티드 중 1개 정도의 오차를 가지고 복제를 한다. 이는 DNA중합효소가 교정(proofreadiNMN)

의/약학| 2003.10.23| 32페이지| 1,000원| 조회(2,081)

PCR, DNA, DNA 복제, DNA 중합효소, DNA replication

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[인테리어] 인테리어-집안에서의 색

☆집안에서 나타나는 색의 비밀~⑴인테리어란?-인테리어 디자인이란 생활공간을 보다 아름답게 꾸미고 쾌적한 생활공간을 연출하여 인간 생활의 쾌적성을 추구하는데 그 목적이 있다. 그러기 위해 서는 단순한 장식을 위한 부분적인 장치보다는 전체적인 분위기를 연출하여 안정감 있고 조화있게 꾸며야 한다.-인테리어의 기본 색채(Color of Interior)▶ 인테리어의 색채를 생각 할 때 중요한 것으로는 그 방의 기능과 목적에 맞게 색이 가진 성격을 생각해야한다.다시 말하면 거실은 마음이 편안하면서도 느긋하게 쉬는 공간이므로 대단히 중요한 자리이므로 색 사용방법이 필요하다.다음으로 키친룸인데, 식사시간이 재미있고 맛이 있는 공간이므로 요리가 맛있게 보여져 식욕을 증진시킬 수 있는 색을 생각해야 한다. 그 다음으로 각각의 방들인데 그 곳에 맞는 기능과 목적을 잘 조화시켜서 색채를 선택하여 취급하는 것이 색채계획에 중요한 포인트가 된다.⑵인테리어의 필요성-실내공간의 쾌적성 기능과 형태의 적합성과 감성적 요소가 충족되었을 때 이루어진다. 실내 공간에서의 인간생활을 기능적으로 분류해 보면 취침기능, 휴식기능, 취식기능, 작업기 능의 네 가지로 분류할 수 있으며, 이 네 가지 기능을 중심으로 인간생활을 보다 편리하고 풍부하게 해주기 위해서는 외부나 내부로부터의 휴식을 방해하는 요인들과의 차단, 이용장소 의 쾌적성, 작업환경의 합리성등 주변의 기능도 만족되어야 한다.또한 실내공간이 편리한 기능을 해결하고 있다고 해도 그것이 차고 딱딱하며 매력없는 것이라고 한다면 정을 느낄 수 없을뿐더러 인간생활을 위해 유용한 것이 될 수 없다. 그래서 정서적 환경조성도 중요한 부분인데 정서적 환경 조성은 인간성의 존중, 인간생활의 실상을 위해 필요한 요건으로 기능 치중의 결과로만 나타나는 딱딱한 분위기의 건축공간에 인간이 정을 느끼고 살 수 있도록 멋과, 정과, 격조를 부여해 주는 역할을 하는 것이다.⑶인테리어 스타일①모던스타일-모던 스타일의 특징은 현대적이고 심플하다는 것이다. 모던 스타일은 어떤 요소가 첨가되느냐에 따라 '모던', '내추럴 모던', '미니멀' 등으로 나누어지는데 내추럴 모던은 기본 모던에 자연주의적 요소를, 미니멀은 최대한 절제된 장식을 강조하여차별화 된 모던 스타일을 표현한다.모던의 기본흐름은 간결하고 단순한 디자인으로 '도시적.합리적. 진보적. 절제. 날카로움. 차가움'의 이미지를 갖고 있으며 중성적이다. 블랙& 화이트가 기본색을 이루고 있으며 회색 같은 무채색도 많이 사용된다. 파스텔 톤이나 꽃무늬 패턴은 주조색으로 거의 사용하지 않으며 부드러운 분위기 연출을 위해 포인트색으로 사용하는 경우는 있다. 때로 원색 같은 강렬한 색으로 공간의 표정을 선명하게 한다. 그러나 지나친 흑백이나 보색대비는 피하도록 한다. 모던스타일에 자주 쓰이는 소재로 차가운 속성의 스틸, 유리, 아크릴 등이 있으며 나무 소재와 어우러져 세련된 느낌이 든다. 벽은 흰색 페인트나 디자인적 요소가 거의 없는 벽지, 스트라이프 또는 체크 패턴의 벽지로 마감한다. 마루바닥재는 주로 메이플 같은 연한 색상의 마루재를 사용한다.창 장식은 커튼보다는 직선미가 돋보이는 블라인드나 버티컬이 잘 어울린다. 일반적으로 창이 작은 침실이나 주방에는 블라인드를, 창이 넓은 거실에는 버티컬을 설치하고 강한 색상보다는 연한 파스텔톤으로 하는것이 좋다. 만약 천으로 하고 싶다면 로만쉐이드로 한다. 가구는 대부분 장식이 배제되어 있으므로 원색소품으로 포인트를 준다. 이때 소품의 재질은 통일시킨다. 조명은 밝고 투명한 것이 무난하며 형태 역시 장식이 거의 없는 깔끔한 것을 선택한다.②내츄럴스타일-현대사회는 고도의 기계화.문명화 되어가고 있으면서 사람들은 편안한 휴식과자연을 찾게된다. 자연을 소재로한 흙,돌,식물,자연광 등 자연을 느끼고 적극적 도입한 것이 내추럴리즘이다.내추럴 스타일은 인위적이지 않고 편안한, 말 그대로 자연주의를 담고 있으며 휴머니즘을 토대로 하고 있다. 자연을 집 안으로 끌어들여 자연의 숨결을 조금이라도 느낄 수 있게 하는데 주안점을 두고있다. 때문에 소재는 가공되지 않은 나무, 흙, 식물 등이 주로 쓰이는데 자연적인 무늬와 질감을 그대로 살려 따뜻하고 안정감이 느껴진다. 주조를 이루는 색채는 친숙한 느낌의 아이보리, 연한 파스텔톤 등이며 연한 노란색이나 옥색 등을 보조색으로 사용하면 은은한 분위기를 배가시켜준다.벽 마감으로 회벽이나 자연색의 갈포벽지 등을 사용하기도 하는데 종이를 꼬아 만든 지사벽지나 한지를 덧바르기도 한다.벽지는 크고 화려한 무늬보다는 작고 잔잔한 것을 선택한다.문양도 식물이나 돌 등을 단순하게 패턴화 시킨 것이 많다. 바닥재는 색을 입히지 않은 쪽마루가 잘 어울린다. 나뭇결이 그대로 드러나 친자연적인 느낌이 든다. 카펫을 깔 경우는 반듯한 기성제품보다는 손으로 짠 듯한 느낌이 잘 어울린다.가구는 나무결을 나타낼 수 있는 도장이나 자연색에 가깝게 도장 된 것이 좋다. 소품은 플라스틱 등은 배제하고 바구니, 대나무 등이 식재된 화병, 조화, 도기류 등 천연소재를 이용한 것이나 자연미가 살아 있는 것들로 구성한다. 패브릭은 면이나 마 같은 자연소재의 것이 잘 어울리며 커튼은 작은 꽃무늬가 프린트 된 것이나 형태가 작은 체크무늬가 좋다. 혹은 돌, 조화, 나뭇가지 등을 이용, 부분적으로 장식하기도 한다.조명은 자연적인 느낌이 나면서 튀지않는 것으로 한다.③클래식 스타일-고풍스러운 장식과 전통적 이미지가 강한 '클래식'은 화려한 장식과 디자인이 많은 편이며 진한 브라운톤과 그린톤, 레드톤 등의 강한 컬러를 쓴다.'클래식'에 현대적인 감각을 일부 도입한 것을 '세미클래식'이라 하는데 '클래식'과 같이 우아하고 부드러운 느낌을 강조, 곡선을 많이 사용하나 차이점이 있다면 회색과 아이보리톤을 가미하여 도시적이고 세련된 느낌을 부여했다는 점이다.이 스타일은 일반 종이벽지보다 실크벽지나 섬유벽지 등의 다소 화려한 벽지가 잘 어울리며 종이벽지를 사용할 경우는 금박이 들어가거나 무늬가 많이 들어간 벽지를 사용한다.마루바닥재는 파켓트리를 사용하여 정렬된 형태보다는 리듬감을 살려준다. 카펫은 클래식 스타일에 빠질 수 없는 디자인적 요소로 강한 컬러를 사용한다.바닥재는 대리석이 좋으며 대리석이 마땅치 않을 경우 가진 대리석 느낌이 나는 타일재를 사용해도 무관하다.조명 또한 심플한 것보다는 곡선을 살리고 장식이 있는 화려한 것이 어울리며 공간마다 다른 형태로 하여 다양성을 나타내 주는 것이 좋다.④로맨틱스타일-아기자기하고 여성적인 느낌의 이 스타일은 마치 꿈을 꾸거나 동화 속에 온듯한 낭만적인 분위기이다.꽃무늬, 레이스, 프릴 등이 주요 소재로 등장하여 포근하고 화사한 분위기를 조성한다. 그러나 자칫 산만하고 조잡해 질 수 있으므로 정돈되어 보이는 패턴 선택과 배열이 중요하다.로맨틱한 분위기를 연출하기 위해서 칙칙하고 무거운 느낌은 배제, 밝고 가벼운 느낌의 소재를 선택한다. 벽지는 디자인이 화려하거나 큰 것보다는 작은 것이 잘 어울린다.바닥재는 강한 느낌의 색상보다는 은은하고 산뜻한 것이 분위기를 잘 살려준다.또한 직접조명보다는 간접조명이 부드러움을 표현하는데 더 효과적이다. 침실이나 거실, 현관입구에 벽등을 설치하면 낭만적인 분위기를 높여줄 수 있다 커튼은 섬세한 분위기를 돋구어 줄 수 있도록 볼륨과 레이스가 많이 들어간 것으로 한다. 망사로 이중 커튼을 만들어도 괜찮다. 소품은 추억과 향수를 떠올릴 수 있는 것으로 하되, 전체 분위기를 흩트리지 않도록 한다. 클래식한 가구와 꽃무늬 패턴 패브릭으로 장식. 부드럽고 고운 실루엣의 소품을 이용하여 포인트를 주고, 벽지는 아이보리나 핑크 등을 사용 하고 꽃무늬 띠벽지 등으로 로맨틱 분위기를 연출한다⑤에스닉스타일-에스닉 스타일은 민속적이고 토속적인 아름다움을 표현하는 스타일로, 원시자연으로 회귀하고자 하는 인간의 욕구를 충족시킨다. 에스닉한 요소들을 조금만 변형시켜 생활공간에 반영한다면 색다른 분위기를 느낄 수 있을 것이다.에스닉 스타일의 특징은 화려하고, 강렬한 색상들, 독특한 문양, 자연 소재를 이용한 내추럴한 소품이라고 말할 수 있다.기하학적 무늬의 알록달록한 색상의 패브릭과 이국적 느낌의 목각, 도자기, 비즈를 이용한 소품을 이용한 장식과 페인팅으로 변화를 주면 강렬한 인상을 줄 수 있다. 또한 이런 강렬함 때문에 에스닉스타일은 여름에 잘 어울린다.강렬한 색채의 조화, 과감한 소재의 사용이 에스닉 스타일의 포인트라고 할 수 있으며, 또한 깔끔한 마감보다는 거칠고 투박한 느낌으로 표현하는 것이 좋다.⑷색에 따른 인테리어의 느낌①오렌지-오렌지는 활발함, 유쾌함, 따뜻함을 상징하는 컬러다. 밝고 화사한 느낌과 강렬한 색상이기때문에 주색보다는 포인트 색상으로 많이 사용된다.비비드 오렌지 컬러는 퍼플계열과 함께 코디하면 개성있는 공간을 연출할 수 있고, 그린 계열과도 잘 어울린다. 딥 컬러, 내추럴 컬러와도 자연스럽게 어우러진다.진한 브라운 계열의 테이블과 매치를 시킨 오렌지색 쇼파. 다소 무거워질 수 있지만 흰색 벽지와 밝은 바닥색으로 안정된 느낌을 전해준다.②Blue-코발트 블루, 베이비 믈루, 로열블루, 등... 참으로 다양한 표정이 있는 블루는 시원하고 상쾌한 느낌을 주기때문에 여름에 잘 어울리는 컬러다.차갑고 이지적인 실내를 연출하거나 도회적인 느낌을 표현하고 싶을 때 어울리는 색채 계획이다.도회적이고 모던한 이미지로 연출한 부엌 공간. 스틸 소재의 씽크대와 진한 블루 컬러가 차갑고 이지적이며 사이버적인 느낌을 연출하고 있다.연한 블루 컬러와 화이트가 어우러져 공간을 시원하면서 상쾌하게 해준다. 깨끗한 이미지를 연출하고 싶을 때 사용하면 좋은 컬러 코디다.

예체능| 2004.11.07| 9페이지| 1,000원| 조회(2,142)

색, 인테리어, 스타일, 집안, 장소

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[스포츠 의학] 스포츠와 의학 평가D별로예요

보 고 서제 목: 스포츠와 전공의 결합 탐색과 목 명:스포츠 길라잡이학 과:의예과학 번:이 름:제 출 일:담당교수:서희진 교수님- 나의 전공은 의학이다. 스포츠와 의학 둘 다 건강한 삶을 지향한다는 점에서 이 둘의 관계성은 매우 크다고 생각한다. 현재까지 알려진 최고의 건강법은 운동이라는 말이 있듯, 스포츠와 의학은 떨어질 수 없는 불가분의 관계가 있다고 생각한다. 우선, 스포츠와 의학간의 관계에 있어서 역사에 대해서 살펴보자.스포츠에 대한 의학의 관심은 역사가 태동하면서부터 라고 할 수 있다. 치료적 성격을 가진 운동은 수세기 전부터 시행되었고, 만성 류마티즘을 치료하기 위해서 마사지와 운동이 권장되기도 하였으며 스포츠 의학이라는 용어가 처음 사용되기 시작한 것은 1928년 2월 스위스 모리츠시에서 개최된 제 2회 동계올림픽에서였다. 같은 해 8월 암스테르담에서 개최된 9회 하계올림픽에서 세계 최초로 국제 스포츠 의학회(International congress of Sports Medicine)를 열었으며 그 자리에서 국제 스포츠 의학연합(International Assembly on Sports Medicine)의 결성을 제안하였다고 한다.스포츠와 나의 전공 -의학- 과의 연결점을 찾아 볼 때, 그게 두 가지 관점으로 생각해 볼 수 있을 거라 생각된다. 첫 번째, 스포츠와 관련된 스포츠 의학이다. 여기에는 평상시 선수들의 건강관리를 위한 의학 분야와 운동 상해를 치료하는 의학 분야 등을 생각할 수 있다. 두 번째, 건강 증진을 위한 일반적인 스포츠 의학이다. 여기에는 재활 치료를 위한 치료운동 분야, 만성 퇴행성 질환의 예방 및 치료를 위한 분야, 일반인들의 건강 증진을 위한 분야, 노화예방을 위한 운동 분야가 있다.우선, 스포츠와 관련된 스포츠 의학을 살펴보면, 선수들의 건강관리에 있어서 만큼 중요한 것은 없을 것이다. 작년 2002 월드컵에서 우리 나라가 4강에 오를 수 있었던 것 중 큰 요소가 지치지 않는 체력이었던 것을 생각한다면, 주먹구구식 훈련보다는 좀 더 과학적이며 효율적이고 체계적인 의학적 자료를 가지고 선수들을 트레이닝을 시키는 것이 승리의 필수 조건이라고 생각한다. 물론, 이는 코치들의 재량에 관한 것이지만, 의학적 관심과 자료에 근거한 훈련 지도가 필요한 것은 당연한 것이다. 스포츠의 상해에 있어서도 대부분이 정형 외과적 질환으로써 타박상, 염좌, 탈골, 골절 등이 있으며, 심한 경우 수술이 필요할 수도 있다. 수술 후에는 반드시 재활이 필요한데, 튜빙, 등속성 운동, 원심성 운동, 등척성운동, 플라이오메트릭스 등 스포츠 상해 치료법은 근래에 와서 크게 발전하였다. 스포츠 의학은 최첨단 의료기술의 발달에 따라서 앞으로는 레이져와 같은 비침습적인 치료 기술을 이용하여 수술을 함으로써 치료율과 회복율을 현저하게 높일 수 있을 것이라 예상된다. 우리나라에서 스포츠 의학에 관한 기구는 1981년 대한스포츠 임상의학회가 최초로 발족되었으며, 1984년 88서울올림픽을 대비하여 대한 스포츠 의학회로 개칭하여 현재까지 이어지고 있다. 또한 1998년에 스포츠의학 분과 전문의 제도를 도입하여 현재 많은 스포츠 의학 분과 전문의를 배출하였고 많은 영역에서 활발하게 활동하고 있다. 그리고 저번 2002 월드컵을 계기로 일반인에게도 스포츠 의학에 관한 관심은 매우 커지게 되었으며, 스포츠 의학의 중요성도 크게 부각되었다.두 번째로, 건강 증진을 위한 일반적인 스포츠 의학이다. 소득수준, 생활수준의 향상과 의학기술이 발달됨에 따라서 신체 건강상태가 좋아지고 평균수명이 연장되는 결과를 가져왔다. 또한, 현대문명의 발달로 인해 우리 주변의 모든 환경이 기계화, 자동화 되면서 일상생활에 편의를 제공하고 있지만 오히려 건강을 유지하고 체력을 향상시킬 수 있는 기회는 상대적으로 줄어들고 있다. 또한 나날이 복잡해져 가는 문명사회 속에서 이 시대를 살아가는 현대인들은 온갖 스트레스에 위협받고 있다. 이러한 상황에 따라 의학은 스포츠와 연계하여 방안을 찾고 있다. 작년에도 '스포츠와 건강'이라는 교양과목에서 이러한 방식의 과제를 한 것이 생각나는데, 그때는 직접 나의 건강을 체크해보고 그에 따라서 알맞은 트레이닝 방법을 조사하였다. 다음은 운동과 관련한 의료적 처방이다.●건강한 성인을 위한 운동처방●성인 비만을 위한 체중감량법●노화와 운동●고혈압 환자를 위한 운동처방●당뇨환자를 위한 운동처방●골다공증 환자를 위한 운동처방●고지혈증과 운동각각의 사례들을 살펴보자.첫째, 건강한 성인을 위한 운동처방이다.- 경제적으로 풍요로와 짐에 따라 운동과 건강에 대한 대중적인 관심이 높아 졌지만 생활방식과 식생활이 변화함에 따라 사람들의 체력 수준이 저하되고 신체 기능은 약화되어 갔다. 여기서는 심폐 체력, 근력과 근지구력, 유연성을 효율적으로 향상시키기 위한 운동 프로그램을 제시하고 있다.운동 처방은 이러한 참여자에 관한 정보, 목표, 그리고 초기 체력 수준을 바탕으로 심폐 체력, 근력과 근지구력, 그리고 유연성을 조화롭게 발달시킬 수 있는 프로그램이 되도록 신중하게 작성해야 한다. 규칙적이고 지속적인 운동만이 향상된 체력을 유지할 수 있으므로 운동처방을 하는 사람은 사람들이 운동을 지속할 수 있도록 적절하고 단계적인 프로그램을 제공하고 운동과 신체활동을 통해 ‘라이프스타일’이 변화 할 수 있도록 유도해야 한다.둘째, 성인 비만을 위한 체중감량이다.- 비만이란 비정상적인 체중의 증가로 건강에 부정적인 결과를 초래하는 상태를 말하며 심장질환 및 고혈압 각종 암 등의 질환을 유발시키고 더 나아가 고지혈증 및 고혈당을 일으키는 원인이 되기도 한다. 1956년 Vague에 의하면 복부 내 지방은 고인슐린 혈증과 고지혈증 및 고혈압의 원인이 된다고 보고하였다. 비만 치료 방법에 있어서 식이요법으로 최소 칼로리의 섭취나 불균형적인 식이 섭취는 단기간내 많은 체중감량를 가져오지만 장기간 체중감량에는 효과가 적다. 운동요법으로 운동처방을 할 때에는 많은 것을 고려해야한다. 체질이나 성별에 따라서 각각의 운동 영향이 다르기 때문에 항상 개별적인 운동 처방이 필요하며 처방 사항 역시 체력의 향상인지 또는 장기간 체중 감량이 목표인지에 따라서 운동 빈도, 강도, 형태를 개별적 특성에 맞추어 처방해야 한다. 무엇보다도 장기간 체중 감량을 위해선 생활습관으로 식이요법이나 운동요법, 스트레스 관리 등 모든 것들이 조화를 잘 이루어져야 만이 최고의 효과를 볼 수 있다.셋째, 노화와 운동이다.- 노화는 유전요인, 생활습관요인, 만성질환 등과 같은 다양한 요인들이 포함된 복잡한 과정이며 규칙적인 신체활동이 노화에 따른 많은 기능쇠퇴에 유익한 효과를 주는 것으로 알려져 있다. 노화에 따라 운동계와 감각계의 기능쇠퇴로 자세의 안정성이 떨어져 낙상의 빈도가 증가한다. 심리적으로는 신체활동과 인지기능관계에 대한 포괄적 연구들이 있는데 인지 기능은 노화가 진행됨에 따라 중추신경계의 기능을 감소시킨다고 보고하고 있으며 피할 수 없는 현상으로 받아들여지고 있다. 또한 노년층에서는 우울증이 자주 보여진다. 노인의 운동의 효과로써 노인이 유산소 운동을 할 때 젊은 사람과 동일하게 심혈관계기능이 10-30% 증가될 수 있다. 노인의 운동의 효과를 살펴보면 심혈관계 기능, 심박출량, 동정맥 산소차를 증가시키며, 고혈압 환자에서는 혈압을 떨어뜨린다. 혈장 지질성분의 변화도 호전시킬 수 있고, 체구성의 변화로는 체중은 변화하지 않지만 체지방은 1-4% 정도 감소하고, 복부내 지방을 감소시켜 성인병 위험인자를 감소시킨다.넷째, 고혈압 환자를 위한 운동처방이다.- 고혈압이란 수축기 혈압이 140이상이거나 이완기 혈압이 90이상일 때를 의미하며 고혈압은 1차성 고혈압과 2차성 고혈압으로 나눌 수 있는데 1차성 고혈압은 고혈압환자의 85-90%이상이며, 유전적 요인과 후천적인 요인이 작용하지만 자세한 원인은 명확하게 밝혀지지 않고 있으며, 지금까지 밝혀진 원인으로는 비만, 스트레스, 운동부족, 식염의 과잉섭취, 영양불균형, 과다한 육체노동, 정신적인 흥분이나 긴장, 불안 등이 있으며, 2차성 고혈압은 고혈압 환자의 5-10% 정도이며 이는 원인이 되는 질병을 치료하면 완치될 가능성이 높은 질환이며 원인이 되는 질환에는 신부전, 신장염, 신혈관성고혈압, 내분비질환, 갑상선기능저하증, 갑상선기능항진증, 임신 자간증, 임신중독증, 신경질환, 뇌압상승 등이 있습니다. 고혈압 환자들의 혈압을 낮추기 위한 권고된 운동의 방법은 자전거, 걷기, 조깅, 수영과 같은 대근육 활동을 주당 3-5일 정도 비연속적으로 실시하는 것이 바람직하며, 1회 운동시간은 20-60분정도 라고 한다.

의/약학| 2003.12.05| 5페이지| 1,000원| 조회(665)

스포츠, 노화, 운동, 고혈압, 의학

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[의학유전학] PCR과 DNA 전기 영동을 이용한 Genotype 확인 평가A좋아요

보 고 서제 목: PCR과 DNA 전기 영동을 이용한 Genotype 확인과 목 명:의학 유전학학 과:의 예 과학 번:0 2이 름:제 출 일:담당교수:양 영 목 교수님1. 실험명PCR과 DNA 전기 영동을 이용한 Genotype 확인2. 실험목적현대 유전학은 각 생물의 유전자 지도를 그려내는 수준까지 왔다. 이것은 인간에게도 해당되어 인체의 유전자 지도를 완성하는 것과 그려진 유전자 지도의 활용이 최근 유전학의 주요 관심거리가 되고 있다. 이번 실험은 이렇게 관심의 대상이 되는 유전자 중에서 하나를 추출해 봄으로써 유전자에 대한 관심과 유전자를 실험실에서 다루는 방법을 익히는데 목적이 있다. 또 각 개인의 유전자 type를 파악하기 위한 실험적 기술인 PCR(Polymerase Chain Reaction의 약자로써 소량의 DNA를 대량으로 증폭시키는 기술)과 전기영동(전장 내에서 전하를 띤 입자들이 움직임으로서 서로 분리되는 것)의 원리를 이해할 수 있다. 그 밖에 유전한 실험을 함에 있어 기초가 되는 피펫팅, 원심분리기 조작법, vortex 사용법 등을 익히는 것도 이 실험의 부수적인 목적 중 하나 일 것이다.3. 실습한 실험에 과한 고찰◎체력관련 유전자(ACE gene)란?- 체력관련 유전자는 Angiotensin Converting Enzyme의 유전자를 일컫는 것입니다.1998년 Nature(네이쳐 : 과학저널)에 ACE 유전자와 체력(physical performance)과의 관계를 기술한 논문이 발표되어 ACE유전자를 체력관련 유전자라고 하게 되었습니다. ACE는 "혈액 중에 만들어지는 혈압상승물질(Angiotensin)을 변환(Converting)시켜주는 효소(Enzyme)"인데, ACE는 인체의 심폐기능과 지구력에 관련이 깊은 효소입니다. 즉 혈관의 확장과 수축에 관여하는 물질인 Angiotensin을 변환시키는 효소를 발현하는데, ACE유전자의 변이에 따라 인체의 심폐기능과 지구력이 많은 영향을 받습니다.ACE유전자는 사람의 체력을 좌우하는 혈xing10) 원심분리 3분간(12,000rpm-14,000rpm)11) 상층액(약 450㎕)을 New E-tube(1.5ml)에 옮긴 후 900㎕의 DNA-Binding buffer를 넣고 잘 섞어줌12) Collection tube에 Spin filter를 끼우고 11)번에서 준비된 용액 700㎕를 옮긴 후 원심분리 1분간(12,000rpm-14,000rpm)13) Collection tube의 용액을 버린 다음 11)번의 나머지 시료(약 700㎕)로 12)번 과정을 한번 더 수행14) Collection tube의 용액을 버린 다음 600㎕의 Column wash buffer를 넣음15) 원심분리 1분간(12,000rpm-14,000rpm)16) Collection tube의 용액을 버린 후 300㎕의 Column wash buffer를 넣음17) 1분간 원심분리(12,000rpm-14,000rpm)18) Collection tube의 용액을 버린 후 2분간 한번 더 원심분리(12,000rpm-14,000rpm)19) Collection tube의 용액을 버린 후 Spin filter를 New E-tube(1.5ml)로 옮긴 다음 50㎕의 Elution buffer를 넣음(바닥 근처까지 깊숙이)20) R/T에서 1분간 방치한 다음 원심분리 1분간(12,000rpn-14,000rpm)21) Spin filter는 버리고 1.5ml tube의 뚜껑을 닫음(각자 labeling)22) Spectrophotometer를 이용해 추출된 DNA 농도를 계산(260OD, 50㎍/㎖) 후, -20℃에 냉동 저장함23) 필요한 경우 gDNA를 전기영동(0.8% Gel)하여 확인할 수도 있음실험 B. PCR(Polymerase Chain Reaction)을 이용한 유전자 증폭1. 실험에 필요한 시약- 이것은 가장 일반적인 것이며 용도에 반응량과 반응요소의 농도 등은 변화를 줄 수 있다. 최근에는 premixed 된 형태의 PCR 제품들이 많이 나오고 있어 보다 편리하게 사C-rich 영역, long-size, gene cloning용- 이 많이 판매되고 있으므로 적절하게 선택하여 사용하도록 한다.d. Deoxynucleotide triphosphate (dNTP)항상 dNTP의 4가지 요소들은 동일 농도로 사용하여야 한다. dNTP mixture의 불균형은 Taq polymerase의 fidelity를 감소시켜 error rate가 증가될 수 있다. 또한 dNTP stock은 thawing/freezing에 민감하여 3∼5차례만 반복하여도 활성이 감소하여 올바른 결과를 기대할 수 없다. 그러므로 stock은 사용량에 맞게끔 적절하게 배분해놓는 것이 좋다. 만일 dNTP의 농도를 증가시킬려면 반드시 Mg2+ 의 농도 역시 증가시켜주어야 한다. 높은 dNTP 농도는 free Mg2+을 감소시켜 효소의 반응을 방해하고 primer의 annealing을 감소시키게 된다. 일반적으로 사용되는 dNTP의 최종 농도는 각 200∼250uM이다. 실험에 이용할 PCR 시험관에 다음과 같이 실험에 사용할 재료들을 혼합하고 pipette으로 잘 섞는다.2). 실험에 이용할 PCR 시험관에 다음과 같이 실험에 사용할 재료들을 혼합하고 pipette으로 잘 섞는다.a. 10x PCR 완충용액(100 mM Tris-Cl, pH 8.3, 500 mM KCl, 15∼20 mM magnesium chloride, 0.01% gelatin 또는 bovine serum albumin[BSA])은 효소에 딸려오는 것을 사용하면 되지만, MgCl2의 농도를 변화시킬 필요가 있는 경우에는 Mg-free 완충용액을 사용해야 한다.b. 여러명의 다른 환자 혈액에서 분리한 template를 같은 primer로 증폭하려 할 때에는 template를 제외한 다른 성분을 한꺼번에 섞은 PCR mix를 만들어서 쓰면 좋다.c. 위 반응은 단지 예일 뿐이며 모든 성분은 PCR 반응마다 여러번 실험을 반복하면서 최적 조건을 결정하여 사용해야 한다. 각 조성마다 고려해야 할 점과 지 않으며 오히려 비특이적 밴드가 늘어난다. (최근에는 reaction buffer의 조성변화나 thermostable pyrophosphatase 등을 사용함으로해서 보다 많은 수의 PCR cycle이 가능한 long cycle PCR kit들이 판매되고 있다.)실험 C. DNA 전기영동:PCR 산물의 전기영동 (electrophoresis)1. 일반적 전기영동법- 시판되는 agarose는 완전히 순수 분리된 것은 아니며 다른 다당류나, 염, 단백질 등이 혼합되어 있으며, 이런 물질들이 포함된 정도에 따라 전기영동시 DNA가 이동되는 정도나 DNA가 gel에서 분리되는 정도가 달라진다. 따라서 효소 억제제와 nuclease가 함유되어 있지 않으며 ethidium bromide로 염색할 경우 형광의 배경을 극소로 하기 위한 특별히 정제된 agarose를 구입하여 사용한다.Gel의 기능을 유지하면서 낮은 온도에서도 녹을 수 있게 화학적으로 변형된 low melting agarose는 gel에서 쉽게 DNA를 용리할 수 있도록 고안된 것인데 현재는 잘 사용되지 않는다. 또 일부 시약회사에서는 아주 작은 DNA 조각(10∼500 bp)을 분석할 때 이용할 수 있는, 낮은 온도에서 gel을 형성하는 agarose를 시판하고 있는데 이와 같은 agarose는 일반적으로 사용되는 agarose보다는 DNA가 잘 분리되지만 polyacrylamide를 이용하여 얻은 결과보다는 그 분리되는 정도가 낮다. 이러한 gel은 agarose의 농도를 높게 하여 사용하므로(4∼10%) DNA 조각들을 gel에서 용출한 후에 제한효소를 처리하면 효소작용이 억제되는 수가 많다.1) 1.2∼1.5% Agarose gel상에 PCR 증폭된 DNA sample을 각각 20㎕ Loading2) 30분간 Running3) 전기영동한 Gel을 조심스럽게 UV Illuminator상에 올려놓고 Band type을 확인4) 사진 촬영2. PCR 산물의 전기영동 (electrophoresis)- PCR분 정도 지나면 gel은 굳어서 불투명하게 됩니다. 그러면 electrophoresis를 할 준비가 된 것입니다.5. Electrophoresis 하기- 사진처럼 PCR product(즉, DNA 시료) 20 ul와 6x gel loading buffer 4 ul를 섞은 후 조심스럽게 gel 판에 comb으로 만들어진 홈에 집어넣습니다. electrophoresis에 필요한 직류전류를 걸어주는 장치를 설치합니다. 붉은 색이 양극, 검은 색이 음극입니다. 거꾸로 꽂지 않도록 유의해야합니다. Bromophenol blue dye를 보면서 전기영동이 얼마나 되었는지를 판단하고, 이것이 gel 중간 쯤 갈 정도면 대개 적당한 정도가 되므로 gel을 꺼내서 사진과 같이 자외선을 내는 판 위에 놓습니다. 이 장비의 이름은 UV transilluminator입니다. 자외선을 쬐면 DNA가 있는 부분이 형광을 발하게 됩니다. Etidium Bromide가 끼어 들었기 때문이죠.아래에 한 사진이 그 예입니다.6. Agarose gel 전기 영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들1) DNA분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다2) Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다3) DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그 다음 linear DNA, open circular 순으로 빠르게 이동한다.4) 부하되는 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다5) 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다6) Ethidium bromide는 DNA이동속도를 15% 정도 감소시킨다7) 전기영동 완충용액의 성분과 이온강도는 전기영동 속도에 영향을 준다.실험 D. DNA Sequencing1. 필요한 시약Recombinant DNA in PGEM-T Vector - 10㎕Forward primer(T7) - 3㎕dH2O - 29㎕2. 실험 과정1) 총 42㎕를 잘 혼합하여 10㎕씩 각각의 dNTP가 들어있는 tube에 넣음2) Sampleyme;

의/약학| 2003.12.05| 11페이지| 1,000원| 조회(2,344)

PCR, 전기영동, 보고서, ACE, DNA sequencing

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