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[공학기술]DNA 정량법 평가A+최고예요

1.DNA 정량법1)분광법분광학(spectroscopy)은 전자기복사선과 물질의 상호작용을 연구하는 분야이다. 빛이 물질을 통과할 때 흡수(absorption)된 빛 에너지가 열로 변환되거나 입사광보다 낮은 진동수의 빛으로 방출(emission)되는 현상은 양자역학적으로 해석 및 예측이 가능하다. 따라서 분광학적 방법은 물질의 정성, 정량 및 구조분석에 이용될 수 있다.? 분광광도법의 응용- 정량분석광도측정법은 흔히 용액에 존재하는 흡광성 화합물의 농도를 결정하기 위하여 사용된다. A=Ecl (식 1)식은 일정한 조건에서 주어진 화합물의 흡광도는 화합물 고유의 흡광계수 E 와 그리고 화합물의 농도와 빛의 통과길이에 비례한다는 것을 나타낸다. 앞에서 언급한 바와 같이 만일 1cm 통과길이의 큐벳을 사용하고 용질 농도를 mole/liter 로 정의 한다면 다음과 같다.A = (E1cm1m)(c) = ?c (식 2)몰 흡광계수 ?은 특정한 파장과 일정한 조건하에서의 그 화합물의 문헌에 발표된 스펙트럼이나 알려진 농도의 그 화합물의 흡수스펙트럼으로부터 얻을 수 있다. 그러므로 여러 조건 하에서 특정한 화합물의 흡광도를 측정하여 A=Ecl 로부터 흡광계수가 알려진 화합물의 농도를 결정할 수 있다. 마찬가지로 특정한 용질이 어떠한 농도에 있든 간에 그 흡광도를 예측할 수 있다.식 1 과 식 2에서 흡광도-농도간의 관계는 직선관계가 된다. 이를테면 아데닌의 양이 추가로 증가함에 따라서 흡광도도 비례해서 증가한다. 즉, Beer의 법칙(흔히 Lambert-Beer의 법칙을 뜻한다)이 성립한다. 대부분의 흡광성 화합물은 Beer의 법칙을 따르나 몇몇 경우 예외가 있다. 이러한 예외는 일반적으로 농도 변화에 따라서 일어나는 화합물의 본질 변화에 기인된다고 할 수 있다. 예를 들면 용액에서 어떤 산, 염기, 염들은 희석될수록 그들의 이온화가 된 것과 안 된 것에 대한 빛의 흡수는 서로 다르기 때문에 Beer의 법칙을 따리지 않는다. 어떤 유기 화합물은 농도의 변화에 따라서 응집되는 경향이 있다. 따라서 흡광계수를 결정할 때는 2~3가지 농도에서 화합물의 흡광도를 측정하는 것이 좋다.? 분광광도계(UV spectro) 방법분광광도계 방법은 핵산에 함유되는 염기의 자외선 흡수를 이용하는 것으로 그 흡수가 260nm부근에서 최대가 된다는 점을 이용하며 분광 광도계에의해 260nm에서의 흡광도(OD260)를 측정한다.예를 들면, 1mg.ml의 농도를 갖는 이중사슬 DNA용액의 OD260치는 약 20이 된다. 한편, 1mg/ml의 한가닥 사슬 DNA혹은 RNA용액의 OD260치는약 25를 나타낸다. 이것으로부터OD260이1일때의 각 농도를 구하면 아래와 같이 된다.이중사슬 DNA 용액인 경우: OD260 = 1 ? 약 50㎍/ml의 농도에 상당.한가닥사슬DNA 혹은 RNA용액인 경우: OD260 = 1 ? 약 45㎍/ml의 농도에 상당.이 OD260치와 핵산농도치와의 관계를 알고 있다면 OD260치를 측정하면 핵산 농도를 산출할 수 있다. OD260 = 10을 나타내는 이중사슬 DNA농도는 50㎍/ml ×10으로 500㎍/ml가 된다.2)디페닐아민 분석법에 의한 DNA 정량? 원리DNA는 산성 pH에서 디페닐아민과 반응하여 푸른색을 나타낸다. 이발색반은은 DNA의 2-데옥시리보오스에 의하는데 산성용액에서 반응성이 큰 -히드록시레블린알데히드로 되어 이것이 디페닐아민과 반응하여 착색물질을 만드는 것이다. 이 발색반응을 DNA의 비색정량에 이용한다. 그러나 DNA의 퓨린 뉴클레오티드의 데옥시리보오스만이 디페닐아민과 반응하기 때문에 이때 얻어지는 값은 DNA에 함유된 데옥시리보오스의 총량의 절반에 해당한다.

자연과학| 2007.05.09| 2페이지| 1,000원| 조회(2,288)

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