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[생물소재공학]식품소재공학 - 자일리톨

..PAGE:1식품첨가물..PAGE:2제1절 식품첨가물의 개요식품의 섭취는 근원적으로 인간의 생명유지와 에너지 공급원으로서뿐만 아니라 섭취식품의 질적인 향상과 가치증대를 위해서 식품에 첨가하는 것이 식품첨가물이다식품첨가물(첨가물) : 식품으로서 품질은 높이고 가치를 부여하여 보존연장,영양강화,기호성 및 관능특성 증진 등을 목적으로 하여 식품 본래의 목적을 손상하지 않는 범위에서 인위적 혹은 고의적으로 적은 양을 식품에 첨가하는 것..PAGE:3식품첨가물의 정의식품첨가물에 대한 용어 정의*식품위생법 제 1장 제2조 2항에 “첨가물이라 함은 식품을 제조,가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가,혼합,침윤,기타의 방법으로 사용되는 물질을 말한다”라고 정의*미국의 국립과학학술원 및 국립연구협위회 산하의 식품보호위원회(Food Protec-tion Committee of the National Academy of Science-National Research Counil)에서는 “생산,가공,저장,포장의 어떤 국면에서 식품 속에 들어오게 되는 기본적인 식량이외의 물질 또는 물질들의 혼합물로서 여기에는 우발적인 오염물은 포함되지 않는다”라고 정의..PAGE:4식품첨가물의 종류와 특성천연물과 화학적합성품으로 구분,식품산업에서는 화학적합성품이 많이 사용됨화학적합성품이란?화학적 수단에 의하여 원소 또는 화합물에 분해반응 이외의 화학반응을 일으켜 얻은 물질- 식품첨가물의 구비조건 -인체에 무해,유독성이 없을 것체내에 축적,잔류하지 않을 것미량으로도 효과가 있을 것물리화학적인 변화에도 안정할 것값이 저렴하고 경제적일 것식품의 영양가 유지, 외관상 좋을 것사용 간편, 품질특성 양호..PAGE:5식품첨가물의 분류1)식품첨가물의 식품공학적인 기능별 분류기타생리적인 기능과 성숙촉진작용품질관련 생리적 기능조절 화학물질산류, 염류, 알카리류 등으로 조절 작용pH 조절용 화학물질왁스성분이나 항조해작용수분조절용 화학물질식품의 위생 및 관능특성 향상, 소포제, 킬레이트제 효모영양제식품가공용 화학물질식 간편할 것인체에 무해,독성이 없을 것장기적으로 사용해도 위해성이 없을 것..PAGE:13보존료의 사용시 장,단점장점식품의 보존성 향상대량생산 가능,유통기능 강화식중독 예방부패방지로 인한 영양가 유지 및 폐기의 최소화단점잘못 사용하거나 과용시 독성 유발두드러진 효과로 인해 위생관리 소홀 가능..PAGE:14허용 보존료의 종류 및 사용기준캡슐류(1g/kg이하),간장(0.25g/l이하),식초(0.1g/ℓ이하),과실,채소류음료(0.1g/kg이하),소스류(0.2g/kg이하),과실,야채의 표피(0.012g/kg이하)파라옥시안식향산부틸-과실주,약주,탁주(0.05g/ℓ이하)무색의 작은 결정,백색의 결정성 분말,냄새 없음,물에 녹기 어려움,알코올에 잘 녹음파라옥시안식향산부틸,에틸,프로필,이소부틸,이소프로필,향산부틸빵류 (0.4%이하),소스류 (0.25%이하),건과류(0.05%이하),식용유지,식육제품,캔디류(0.1%이하)백색 결정성 고체,초산냄새,흡습성,물에 잘 녹음이초산나트륨에탄올에 녹음,곰팡이에 효과,효모에는 효과가 거의 없다프로피온산치즈 (3g/kg이하),백색의 결정,분말,과립형태,냄새없거나 약간 특이한 냄새,물에 잘 녹음프로피온산칼슘빵 및 생과자류 (2.5g/kg이하)유상의 투명한 액체,특이한 냄새,물,에탄올에 잘 녹음,향균력 약함,발효식품에 많이 함유프로피온산나트륨백색의입상,결정성 분말,냄새가 없고,물과열탕에 잘녹음안식향산나트륨청량음료,간장(0.6g/kg이하),알로에겔 (0.5g/kg이하),마가린류 (1g/kg이하)백색의엽상,침상의결정,냄새가 없거나 벤즈알데히드 같은 냄새가 남,물에녹기 어렵다,에탄올,메탄올,아세톤등에 잘 녹음안식향산백색,담황갈색 결정,냄새 없음,물에 잘 녹음소르빈산칼륨식육제품,땅콩버터 가공품,어육연제품 (2g/kg이하),된장,고추장,절임식품(1g/kg이하),잼,케첩 (0.5g/kg이하),치즈(3g/kg이하),과실주(0.2g/kg이하),유산균음료(살균한 것 제외) (0.05g/kg이하),무색,바늘모양의 결정,냄새가 없고,물에는 녹기 어려움,열탕,알코올불용,무취식용적색 제40호,식용적색 제40호 알루미늄레이크등적색의 분말,낱알,물,글리세린에 가용,알코올과 유지에 불용,무취식용황색 제5호,식용황색 제5호 알루미늄레이크등황,오렌지색 분말,낱알,물,글리세린에 가용,알콜과유지에 난용,무취식용황색 제4호,식용황색 제4호 알루미늄레이크암자청,암자갈색의 분말,낱알,물,글리세린,글리콜에 가용,무취식용청색 제2호,식용청색 제2호 알루미늄레이크금속광택이 있는 적자색의 분말,낱알,알콜,글리세린에 가용,유지에 불용,무취식용청색 제1호,식용청색 제1호 알루미늄레이크적색,적갈색 분말,알콜,글리세린,글리콜에용,유지에 불용,무취식용적색 제3호적갈색,암갈색 분말,물,프로필렌글리콜에 가용,유지에 불용,무취식용적색 제2호,식용적색 제2호 알루미늄레이크면류,다류,단무지(황색4호는 허용),특수 영양식품,쥬스류,묵류,젓갈류,천연식품,벌꿀,식초,케첩,소스,카레,식육제품(소시지 제외),식용유지,식빵,버터,마가린,해조류 등에 사용금지금속광택,암록색 분말,낱알,물,글리세린에 가용,무취식용녹색 제3호,식용녹색 제2호 알루미늄레이크타르계식용색소사용기준성상합성착색료..PAGE:195.발색제식품 중위 색소와 결합하여 그 색을 고정시킴으로 식품 본래 색을 유지하는데 사용되는 물질허용 발색제의 종류 및 사용기준명반을 가열하여 결정수를 제거하고 얻은 백색분말로 합성 팽창제의 산성성분소명반된장에는 사용금지회백색 분말,산화가 어려운 건조상,회백색의 결정,결정성 분말인 결정상,수용액은 산성황산제일철무색의 주상결정,백색의 결정성 분말,물에 잘녹음,냄새 없고,짠맛,청량미질산칼륨식육제품,경육제품 (0.07g/kg이하),어육소세지,어육햄 (0.05g/kg이하)무색의 결정,백색의 분말,물에 잘녹고,알콜에 약간 녹으며,흡습성,냄새가 없고,짠맛질산나트륨식육제품,경육제품 (0.07g/kg이하),어육소세지,어육햄 (0.05g/kg이하),명란젓,연어알젓(0.005g/kg이하)백색,담황색 결정성 분말,입자,봉상의 화합물,물에 녹기 쉽고, 알칼리성아질산나트륨사용기준성상발색제..PAGE:206작용을 함LD50=1.2mgN/g(개구리,임파선)백색의 결정,결정성 분말,물에 가용,알코올에 불용글리신L-알라닌양성전해질,완충작용,금속에 Chelate로 작용,합성청주에 풍미부여,핵산계 조미료와 병용시 정미력 증강,유기산에 병용시 부드러운 신맛 유지LD50=1.75mgN/g(개구리,임파선)무색,백색의 결정성 분말,특유의 단맛 함유,물에 가용,알코올에 약간 가용 무취DL-알라닌L-글루타민산암모늄L-글루타민산칼륨L-글루타민산나트륨(MSG)글루텐과 카제인에 다량 함유,다시마의 감칠맛이 대표적,글루타민산나트륨은 짠맛,신맛,쓴맛을 완화하고,단맛에는 진한맛을 부여함,핵산계 조미료와 병용시 정미력은 증강하고 지미료임LD50=20g/kg(마우스,경구)백색의 결정성 분말,무색의 결정,특이한 감칠맛,신맛을 약간 함유, L-글루타민산은 물에 불용이지만, L-글루타민산나트륨은 물에 가용,알코올에 난용,무취, L-글루타민산칼륨은 제외하고 흡수성이 없고,열,광선,알칼리에 안정L-글루타민산기타독성특성조미료..PAGE:26유기산계 조미료의 특성-2pH조정제로 활용LD50=2,000mg/kg(마우스,복강)무색 투명의 시럽,무취젖산나트륨호박산-2-나트륨조개국물맛으로 자연계에 널리 분포,단독보다는 핵산계 조미료와 병용사용LD50=4,500mg/kg(생쥐,정맥)무색,백색의 결정,결정성 분말,신맛,물,알코올에 가용,에테르,벤젠에 불용,무취호박산독성은 구연산,구연산1나트륨,구연산나트륨,구연산2나트륨순으로 약함,청량음료의 신맛 완화,기타식품에는 pH조정제,산패방지제,증점제,유화제,안정제로 활용LD50=1,549mg/kg(마우스,복강)무색의 결정,백색의 결정성 분말,청량한 짠맛,물에 가용,알코올에 불용,무취구연산나트륨조해성,신장병,당뇨병환자의 소금 대용으로 사용,산미식품에 병용시 신맛의 완충작용을 함LD50=3,300mg/kg(개,피하)백색의 결정성 분말,물에 가용,짠맛,무취DL-사과산나트륨DL-주석산나트륨주석산은 D,L,DL,Meso의 4개 이성체가 존재,천연은 D형으로 우선성이며,합성은 DL형으로 제무색,백색 결정,결정성 분말,물에 난용성제1인산칼슘빵,과자 등-산제백색의 결정성 분말,물에 난용성,칼슘강화,양조의 발효조성제산성피로인산나트륨백색의 결정,결정성 분말,흡습성,강한 암모니아냄새탄산암모늄비스킷,과자 등- CO₂, NH₃백색의 결정,결정성 분말,흡습성,강한 암모니아냄새,물에 녹고 알코올에 녹지 않음탄산수소암모늄백색의 결정,결정성 분말,물에 녹고 알코올에 녹지 않음탄산수소나트륨빵,전병,비스킷 등-CO₂무색투명한 결정,백색의 입상 분말,물에 녹고 알코올에 녹지 않음탄산수소칼륨DL-주석산수소칼륨빵,과자 등-산제무색 결정,백색의 결정성 분말,청량한 신맛,열탕에 녹고,알코올에 녹지 않음D-주석산수소칼륨비스킷,전병 등- NH₃백색의 결정성 분말,짠맛,청량미,물,알코올,글리세린에 녹고,아세톤,에테르에 녹지 않음염화암모늄빵,과자 등-산제,NH₃무색 결정,백색의 결정성 분말,알코올에 녹지 않음,글리세린에 서서히 녹음황산알루미늄암모늄빵,과자 등-산제무색,투명한 결정,결정성 분말,물에 녹고,알코올에 녹지 않음황산알루미늄칼륨사용기준성상합성팽창제..PAGE:3214.강화제식품에 비타민류,무기질류,아미노산류 등을 첨가하여 영양강화 목적의 식품첨가물로 체내에 없어서는 안될 영양소를 보충하거나 조리가공 중 파괴되는 영양소를 보충 및 원래의 식품에 없는 영양소를 강화시키기 위해서 사용하기 때문에 강화식품이라고도 함-강화제 중 다른 용도로 사용되는 첨가물-발색제-비타민C,L-아스코르빈산나트륨,니코틴아미드,황산제1철항산화제-비타민C,L-아스코르빈산나트륨,비타민E합성팽창제-제1인산칼슘두부응고제-염화칼슘,황산칼슘..PAGE:3315.유화제서로 잘 혼합되지 않는 두 종류의 액체를 혼합,분산시켜 분리되지 않도록 해 주는 식품첨가물로 일명 계면활성제라고 함20-황색,적갈색의 유상액체,특이한 불쾌취,약간의 쓴맛,물에 잘 녹음60-황색,등황색의 유동성액체,식용유에는 녹지 않음,65-황갈색의 고체,알코올에 녹음,80-황색,등황색의 유동성액체,물,알코올,초산에틸,식용유에도 녹음폴리소르베이트 20,6

자연과학| 2006.04.13| 73페이지| 2,000원| 조회(418)

생물, 첨가물, 자일리톨, 식품소재, 생물소재공학

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[공학]protein folding

..PAGE:1Folding or Not folding문 두 범..PAGE:2Protein folding..PAGE:3단백질의 삼차구조Hydrophobic interactionVan der Waals interactionHydrogen bondElectrostatic interactionIntramolecular disulfide bond..PAGE:4Folding intermediateMolten globule- 10~30% large- circular dichroism measurement- loose packing- more structural flexibility..PAGE:5Folding intermediate 구조탐색방법1. Molten globule- Nonphysiologic pH- Chemical denaturant2. Two-state folding mechanism- transition state..PAGE:6Folding transition state의 분석유의점- mutation이 folding pathway를 바꾸지 않아야 한다.- mutation이 native상태와 unfold상태의 구조를 심하게 바꾸지 않아야 한다.- mutation에 의해서 native상태에서 존재하지 않던 새로운 결합이 생기지 않아야 한다...PAGE:7측정Stopped-flow장치 사용단백질을 고농도의 denaturant에 녹여 unfold 상태로 만든다.Buffer와 빠른 시간에 섞어준다.Data를 exponential equation에 fitting하여 속도상수를 구한다.

공학/기술| 2006.04.13| 8페이지| 1,000원| 조회(423)

단백질, Protein, 생물, 단백질공학, protein folding

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[생물정보학]bioinformatics 평가C아쉬워요

..PAGE:1Bioinformatics’99 문두범..PAGE:2BioinformaticsBiology + Informatics생물체로부터 대량의 data를 acquisition하고, 이를 manage하고, 나아가 유용한 지식을 얻기 위해 analysis 하는데 필요한 다양한 전산학/수학/통계학적인 것들을 통칭...PAGE:3BioinformaticsGenome을 문자로 나타내 서열연구단백질체를 연구하는 proteomics단백질의 2D, 3D구조 연구Functional genomics계통 연구정상세포와 비교 연구..PAGE:4Biology vs informaticsBiology즉각적인 실험이나 모두가 인정할 수 있는 어떤 이론적인 사실이 적음.‘정답’이라고 하는 것이 없음.Informatics모든 것을 정량화 할 수 있음.사실 여부를 판단할 수 있는 실험도 (비교적) 단시간에 가능...PAGE:5Biology vs Bioinformatics전통적인 “Biology”가설을 세우고 그것을 실험을 통해 검증하는 방법을 사용해왔음.Bioinformatics통계/분석 같은 전산학적 방법을 사용>> 그러나 결국 목표는 생물학과 같음.생명 현상의 이해를 지향한다...PAGE:6세부 연구 분야DNA/RNA 염기 서열 분석 시스템단백질 아미노산 서열 분석 시스템유전자 발현 분석 시스템Bioinformatics DB와 검색 시스템..PAGE:7overview..PAGE:8Bioinformatics’s toolSmith-Waterman- Dynamic programming을 이용하여 전체서열에서 유사성 검색FASTA- FASTA는 임의의 서열과 유사성을 가진 서열을 서열 database로부터 찾는 softwareBLAST- 염기서열과 단백질 서열의 상동성 검색을 수행..PAGE:9응용분야-1질병의 원인 규명 및 예방질병의 원인으로 의심되는 유전자에 대한 정보를 지닌 집단과 정상 집단 사이의 비교 분석을 통해 질병의 원인이 되는 유전자를 찾아내고 연관 관계를 밝혀냄.암, 각종 전염병 등..PAGE:10응용분야-1신약 개발유전자 DB분석을 통해 기본적인 시뮬레이션 실시신약 개발과 임상실험에 이르는 전 과정을 전산화 분석 자료를 자동화유전자 분석 정보 제공..PAGE:11응용분야-2GenomicsProteomicsDNA chipProtein chip..PAGE:12GenomicsStructual Genomics- 구조 유전체학은 초고속으로, 다량의 단백질들의 3차원 구조를 결정하고 이를 이용하여 학문적으로는 단백질들의 기능들을 밝히면서 산업적으로는 이 구조를 근거로 신약을 발굴하는 연구Functional Genomics- 어떤 염기서열로부터 어떤 단백질이 만들어지며 이 단백질이 각 세포내에서 뿐만 아니라 실제로 사람의 몸 안에서 어떤 역할을 하는지를 밝혀내는 작업이다. 기능유전체학의 핵심은 개별 유전자의 기능을 다원적으로 시스템을 의미..PAGE:13Proteomics목표- 단백질 발현 측정- 단백질 변화 관찰- 유전자 발현 규명- 연결고리 제공연구방법- Simple preparation- 2-Dimensional Gel Electrophoresis(2-DE)- Staining- Image Acquisition- Image Analysis- Protein Excision- Protein Identification..PAGE:14Proteomics의 특성정제 과정 없이 모든 단백질을 펼쳐 분석유전자의 발현 정도를 파악하기 용이유전자에 의한 현상 및 외적 요인 추적 용이단백질 발현 차이 확인..PAGE:15DNA chip한 세포내에서 발현되는 유전 정보의 총체를 밝힘유전자형 분석(genotyping)염기서열 밝힘유전병, 암, 감염병 등의 DNA 진단등에도 널리 활용..PAGE:16Protein chip바이오칩 기술의 하나로, 특정 단백질과 반응할 수 있는 항체, 수용기, 핵산, 탄수화물 등의 관련 물질을 단일 칩 상에 고밀도로 고정화시킨 것. 단백질의 분리, 확인 정량 및 기능 해석에 이르는 일련의 단백질 분석 작업을 수행할 수 있어 기존의 생명 공학 산업뿐만 아니라 궁극적으로는 질병의 원인 규명을 유전자 수준에서 단백질 수준까지 확대하는 프로토믹스(Proteomics) 분야에 널리 활용된다.

자연과학| 2006.04.13| 17페이지| 1,000원| 조회(750)

생물, 생물정보, bioinformatics

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[생물] 혈액형 검사, 혈액응고시간측정, 혈압측정, 심음청진 평가A+최고예요

Ⅰ. Introduction● 혈액형 검사임상적 의의Rh 혈액형의 종류는 C, c, D, E, e 등을 포함하여 47 가지나 되지만 일반적으로 Rh 양성 또는 음성이라고 말할 때는 Rh 혈액형 항원 중에서 가장 중요한 D 항원을 의미한다. ABO 적혈구항원과는 다르게 D 항원 음성인 사람이 모두 Anti-D를 가지고 있지는 않다. Rh 혈액형 항원은 적혈구에만 존재하므로 anti-D는 임신이나 수혈 등으로 D 항원이 양성인 적혈구에 노출된 경우에만 형성된다. D 항원은 면역원성이 높으므로 D 항원 음성인 사람이 D 항원 양성 혈액을 수혈받는 경우 50-80% 정도에서 anti-D를 형성한다. 그러므로 모든 수혈자와 공혈자 혈액에 대해서 Rh(D) 혈액형 검사를 시행해야 하며, D 항원 음성인 환자에게는 D 항원 음성 혈액만 수혈하여야 한다.검사방법1. Slide 법1) Tile판을 미리 view-box에 올려놓아 37-40℃ 되게 한다.2) 판정용 anti-D 혈청을 1 방울 가한다.3) 자기 혈청에 부유되어 있는 40-50% cell suspension을 1 방울 넣는다.4) 면봉으로 직경이 2 cm 정도 되게 섞으면서 편다.5) Tile판을 전후로 움직이면서 응집 여부를 관찰한다.6) control로 D+ 또는 D- 적혈구(panel cell)를 이용한다.7) direct Coombs test 양성이 의심스러울 때는 anti-D대신 bovine serum albumin을1 방울 떨어뜨려서 관찰한다..2. Tube 법1) Anti-D 혈청을 1 방울 넣는다.2) 환자의 2-5% 적혈구 부유액을 1 방울 가한 후 흔들어 섞는다.3) 3400 rpm에서 15초간 원침한 후 시험관을 천천히 기울여가면서 응집 유무를 관찰한다.4) Rh(D)음성으로 판독되면 항글로불린 시약을 넣고 weak-D 검사를 실시한다.● 혈액응고혈액과 조직내에는 50종 이상의 혈액을 응고시키는데 관여하는 물질들이 발견되었다. 혈액내에서 혈액을 응고시키는데 관여하는 것을 전응고물질(procoa쁘거나 비타민 K가 부족한 경우 프로트롬빈 형성에 지장을 받아 출혈성 경향이 나타나게 된다. 혈관이나 혈액내 특별한 활성물질이 손상을 받으면 프로트롬빈 활성제(prothrombin activator)가 형성된다. 이는 프로트롬빈을 트롬빈으로 변환시키고 이 트롬빈은 피브리노겐을 피브린으로 변화시킨 다음 이 피브린 단량체를 중합체(polymer)로 만들어 결국 피브린사(fibrin thread)를 형성하여 혈소판과 혈구를 둘러싸 혈병을 형성한다. 이 혈병을 형성하는데 소요되는 시간은 약 10 - 15초가 소요되며 혈병을 형성하는데 소요되는 시간은 주로 프로트롬빈 활성제의 형성과 관계가 있다고 한다.② 화이브린노겐의 화이브린으로 변환화이브리노겐은 분자량이 많은 단백으로(340,000) 프로트롬빈과 마찬가지로 간장에서 형성되기 때문에 간장 질환이 있는 환자들에게는 화이브리노겐의 혈중 농도가 낮아 출혈성 경향이 나타난다.트롬빈은 단백분해를 할 수 있는 단백 효소로 이는 피브리노겐 분자에 부착된 4개의 저분자량 펩타이드를 제거함으로 화이브린 단량체(monomer)를 형성한다. 이 화이브린 단량체는 자발적으로 수초 이내에 중합체(polymer)를 형성하여 긴 화이브린사를 형성한다. 그래서 화이브린사는 그물모양의 혈병 망상체(clot reticulum)를 형성한다.화이브린 단량체가 중합체로 되는 초기에는 결합이 약한 수소의 비공유결합(non-covalent) 으로 이루어지지만 수초가 지나면 조직이나 혈소판 등과 특히 화이브린 자체에서 화이브린 안정인자(fibrin stabilizing factor)를 활성화하여 화이브린 단량체 사이를 공유결합하게 하고 화이브린사를 교차결합(cross-link)하여 단단한 혈병을 형성한다.③ 혈병수축혈청: 혈병이 형성된 후 몇 분이 지나면 혈병에서 약 20 - 60분까지 계속 액체가 나온다. 이 액체를 혈청이라 한다. 이 혈청은 대부분의 화이브리노겐과 응고인자가 매우 적거나 없기 때문에 응고되지 않는다.혈병수축에 혈소판이 매우 중요한 작용을 합(prothrombin activator complex)이 형성되어 프로트롬빈을 트롬빈으로 변환하게 된다. 프로트롬빈 활성제 복합(prothrombin activator complex)은 2가지의 기본적인 방법으로 형성된다. 즉,외인성 경로 (extrinsic pathway) : 혈관벽이나 주위조직의 손상으로 시작내인성 경로 (intrinsic pathway) : 혈액자체에서 시작3) 혈액 응고의 외인성 경로혈관이나 혈관밖 조직에 손상이 오면 프로트롬빈 활성제가 형성되기 시작하여 다음의 3가지 단계로 응고과정이 일어난다.① 조직 트롬보플라스틴(thromboplastin)의 형성조직에 손상이 오면 세포막의 인지질(phospholipid)과 단백분해효소로 작용하는 당단백을 포함하는 지방단백 복합 등의 물질인 트롬보플라스틴 복합이 만들어진다.② 제10인자(factor X)를 활성화된 제10인자로 변환조직 트롬보플라스틴인 지방단백복합이 제7인자와 복합하며 조직 인지질과 칼슘이온의 효소작용으로 제10인자를 활성화된 제10인자로 형성한다.③ 활성화된 제10인자는 프로트롬빈활성제를 형성활성화된 제10인자는 조직트롬보플라스틴이나 혈소판에서 유리된 인지질과 복합하고 제5인자와 함께 프로트롬빈 활성제를 형성한다. 이 프로트롬빈 활성제는 프로트롬빈을 트롬빈으로 변환하여 응고작용이 일어나기 시작한다. 제5인자는 처음에는 활성화되지 않은 상태로 존재하다가 트롬빈이 형성되면 이에 의해 활성화되며, 트롬빈은 positive feedback의 효과를 나타낸다.4) 혈액응고의 내인성 경로프로트롬빈 활성제 형성을 시작하는 2번째 기전은 혈액이 손상을 받거나 혈액이 손상된 혈관벽의 콜라겐에 노출되면 그림 4와 같이 폭포처럼 연속반응이 일어난다.① 제12인자의 활성화와 혈소판 인지질의 유리혈액이 손상을 받거나 혈관벽의 콜라겐에 노출되면 혈액내의 중요한 제12인자와 혈소판에 변화를 일으켜 제12인자가 단백분해효소인 활성화된 제12인자(activated XII)로 된다. 동시에 혈액손상이 일어나면이온이 없으면 혈액은 응고되지 않는다. 인체내에는 충분한 양의 칼슘이온이 존재해 있기 때문에 혈액응고기전에 영향을 받을 정도의 칼슘이온 결핍현상은 일어나지 않는다. 그러나 혈액을 체외로 분리하는 경우, 즉 예로 수혈을 위하여 헌혈을 받는 경우 칼슘이온을 제거하거나 침전시키면 응고되지 않는다. 혈액을 헌혈받는 경우 혈액백(blood bag)내에는 citrate ion이 들어 있어서 이 citrate가 칼슘이온을 탈이온화하여 혈액이 응고되지 않도록 한다.6) 외적 경로와 내적 경로의 상호작용과 혈액응고의 시작혈관이 손상을 받으면 2개의 외적경로와 내적경로를 통하여 혈액응고가 시작된다. 외적 경로로는 조직 트롬보플라스틴이 활성을 시작하는 반면, 내적경로에는 제12인자와 혈관에 있는 콜라겐과 함께 혈소판이 외적 경로를 시작한다.혈액응고시 2개 경로가 상호작용으로 응고현상이 일어나는데 여기에 관여하는 것이 트롬빈의 단백분해작용으로 내적경로에서는 제8인자를 활성화하고 혈소판에 직접적으로 작용하여 전혈액응고물질(procoagulants)을 포함하는 과립을 유리시킨다. 외적경로의 시작이 내적경로를 활성화하여 혈액을 응고시킨다.혈관내 응고는 위에서 설명한 내적 기전 이외에도 항원-항체 반응의 영향으로 발생되기도 하며 약물투여나 순환계에 어떤 이물질이 들어가면 발생되기도 한다. 혈액응고의 외적 기전은 매우 폭발적으로 시작하며 일단 응고가 시작되면 조직에서 나온 트롬보플라스틴의 양이나, 제 10, 7, 5인자의 양에 따라 그 속도가 변한다. 심한 손상이 발생되면 약 15초 이내에 응고가 되기 시작하는데 내적경로는 반면에 응고시작이 다소 늦어 보통 약 1분에서 6분이 지나야 응고가 일어난다.7) 정상 순환계에서 혈액응고가 일어나지 않는 이유(혈관내 항응고기전)① 내막표면의 요인들혈관내에서 내적응고경로가 활성화되지 않는 이유는 다음의 3가지로 요약할 수 있다.a. 내피세포의 매끄러움b. 내피세포 아래 glycocalyx의 층이 응고인자인 혈소판이 들어오지 못하도록 함c. 내피세포 막 혈액내에는 양이 매우 적지만 정상 상태하에서는 충분한 항응고작용을 한다. 헤파린 분자는 매우 강한 음전기를 띤 복합다당질로 헤파린 자체는 항응고작용이 거의 없으나 항트롬빈 III와 결합하면 수백 - 수천 배 이상의 항응고작용을 한다. 헤파린 - 항트롬빈 결합은 트롬빈을 순환계에서 제거하는 역할을 하며, 그외에 활성화된 응고인자 제 XII, XI, IX, X인자를 제거하여 응고가 일어나지 않도록 한다. (대부분의 심장수술, 혈관수술에 헤파린을 사용하며, 혈전증에 의한 급성 및 만성 혈관폐쇄질환에 일차적으로 사용하는 매우 중요한 약물이다)헤파린은 체내의 비만세포(mast cell)와 호염기세포(basophilic cell)에서 만들어져 혈관내 항응고작용을 한다. 이 비만세포는 주로 폐나 간장의 모세혈관 주위에 많은데 이는 폐나 간장에는 이물질이 많이 들어와 응고작용이 수시로 일어나기 때문이다.8) 혈병의 용해 - 플라스민(plasmin)혈장단백은 플라스미노겐(plasminogen) 또는 전피브리노리신(profibrinolysin)이라 불리는 유글로빈(또는 진성 글로부린, euglobulin)이 있다. 이것이 활성화되면 플라스민 또는 피브리노리신으로 되는데 이는 트립신과 같이 매우 강력한 단백분해효소로 피브린사나 혈병 주위에 있는 피브리노겐, 제 5, 8, 12인자 등 혈액응고인자를 소화시킨다. 따라서 혈병에 플라스민이 형성되면 혈병을 분해하고 다른 여러 응고인자들을 파괴하여 응고상태를 약하게 한다. 혈병이 형성되면 많은 량의 플라스미노겐이 혈병 주위에 나타난다. 이 플라스미노겐은 혈병이 완전히 지혈할 때까지 플라스민으로 활성화되지 않는다.손상된 조직과 내피세포에서 분비되는 조직플라스미노겐 활성제(tissue plasminogen activator)는 출혈이 완전히 멎은 하루 또는 수일이 지난 다음 유리되며 이 조직 플라스미노겐 활성제는 플라스미노겐을 플라스민으로 변화시켜 혈병을 분해한다.플라스민은 혈병의 주요한 트롬빈사를 분해할 뿐 아니라 피브리노겐을 분해하고 된다.

자연과학| 2005.03.29| 8페이지| 1,000원| 조회(1,961)

혈액검사, 혈압측정, 혈액응고, 청진, 혈액형검사

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[식물] 형질전환 식물의 배양

형질전환 식물의 제작Ⅰ. IntroductionAgrobacterium에 의한 형질전환 방법1. 순무의 형질전환(1) 식물체 절편식물재료는 MS 0.1배 강도의 배지에서 무균상태로 6~7일간 키운 어린 묘이 하배축을 2~4mm로 잘라 절편으로 이용한다.(2) 기본배양의 배지조성① 1차 배양 (캘러tm 유도) : B5 염류 + B5 비타민 + 2,4-D 1mg/l + 수크로오스 3% + phytagar 0.6%, pH 5.6에 3~16일간 배양한다.② 2차 배양 (재생배양) : B5 염류 + B5 비타민 + BAP 3mg/l + 제아틴 1mg/l + 질산은 5~10mg/l + 수크로오스 1% + phytagar 0.6%, pH 5.8에 2~8주 배양한다.③ 3차 배양 (발근배양) : B5 염류 + B5 비타민 + IBA 2mg/l + 수크로오스 1% + phytagar 0.6%, pH 5.8에 2~4주 동안 배양하고, 이후는 토양에 이식한다.(3) 아그로박테리움A. tumefaciens 계통에 NPT Ⅱ 유전자와 GUS 유전자가 존재하는 이원 플라스미드 PCGN 7001을 3친 교배를 통해서 삽입시킨다.(4) 급여배양변형된 MS 배지 (MS염류 + myo-inositol 100mg/l + tiamine HCl 1.3mg/l + KH2PO4 200mg/l + 2,4-D 1mg/l + 수크로오스 3% + phytagar 0.6%, Ph 5.8) 위에 담배 세포를 살포하고, 그 위에 다시 여과지를 놓은 다음, 그 위에 준비된 절편을 놓는다. 여기서 절편을 18~24시간 동안 산광하에서 배양한다.(5) 형질전환① 절편을 박테리아 밀도가 1 X 108/ml 인 현탁에 10분간 침지하였다가 이것을 급여배지 위에 다시 놓는다.② 절편을 박테리아와 2일간 공동배양한다.(6) 재생배양① 절편을 카르베니실린 500mg/l와 카나마이신 25mg/l가 들어간 캘러스 유도배지로 옮긴다(밀도는 100 X 25mm 접시에 40~50개).② 배양접시를 파라필름이나 미공 종이테이프로 봉하고 베니실린 500mg/l와 카나마이신 25mg/l 및 AgNO3 5~10mg/l가 첨가된 재생배지에 옮겨 2주간 배양하고, 이후는 AgNO3 가 없는 새로운 배지에서 2주마다 계속 계대배양한다. 2차 계대배양 이후는 배양밀도를 접시당 20~25개로 줄인다.④ 배양개시 후 5~9주에 카나마이신으로 선발된 캘러스에서 나온 녹색의 싹을 잘라 카르베니실린 300mg/l와 카나마이신 50mg/l가 첨가된 성숙배지 (수크로오스 1%와 호르몬이 없는 B5 배지)에 옯겨 2주간 배양한다.⑤ 길게 자란 줄기와 가지를 2~3마디만 남기고 잘라서 카나마이신 50mg/l이 첨가된 B5 발근배지에 옮긴다. 발근이 되지 않은 싹은 기부를 다시 잘라 같은 배지에 2~4주간 더 배양한다.(7) 형질전환율재생된 식물체에 대하여 NPTⅡ와 GUS효소활성을 분석하고 DNA를 분리한다.(8) 후대 검정재생 식물체의 종자를 파종하여 이들의 묘를 항생제가 든 배지에 파종하고 형질전환하지 않은 대비와 비교한다. 여기서 저항성인 NPTⅡ 인자를 가진 것은 녹색 자엽이 전개하고 뿌리가 출현한다.종자의 발아능과 종자세§1. 종자의 발아능- 종자가 발아하여 정상적인 묘를 만들 수 있는 능력- 살아있는 종자와 죽은 종자1. 표준발아검사- 미국의 공인종자검사자협회 (Association of Official Seed Analysis: AOSA)에서 제정한 발아검사- 발아: “종자가 배로 부터 적합한 환경조건 하에서 정상적인 식물로 계속 발육할 수 있는 능력을 지닌 중요한 식물의 구조가 출현 발달하는 것”2. 표준발아검사의 절차- AOSA의 발아검사절차에 관한 규정(1) 종자준비순도검사를 마친 整粒種子를 무작위로 최소한 400 립을 추출하여 100립씩 4반복 으로 치상한다. 발아조사의 결과는 발아종자수를 백분율로 나타내고, 소수점 이하 는 반올림한다.(2) 치상재료 및 치상방법치상에는 살레?흡습지?여과지?발아지?모래?탈지면?면포 등의 재료가 사용 된다.1) 濾過紙: 보통 Whatman2호2) 살 레 (petri d 吸濕紙(bIotter): 종자를 흡습지 위에 치상하거나 (top of blotter; TB), 흡습지 사이(between blotter;B) 또는 큰 발아지 사이에 치상 하여 말아 세우거나 (paper toweIing;T)한다.4) 모래와 흙(S): 모래는 0.8mm의 체로 거르고 0.5mm의 체 위에 남는 것 을 살 균하여 사용(3) 수분과 통기- 수분이 건조하지 않도록 해야함(4) 온도- AOSA 규정온도 ± 1℃- 복수온도: 변온, 예 (20-30)= 첫 번 온도를 16시간, 둘째 온도를 8시간(5) 광- 광발아서 종자는 광이 필요 : 목초종자, 담배, 상추 등- AOSA 규정: 810-1,620 lux의 광 권장 (8시간/일)(6) 휴면타파- KNO3 처리, thiourea, ethephon, ethylene, GAprechilling, 층적(stratification), predrying 등(7) 발아조사기간- first count, final count 등(8) 발아묘의 판별- 정상묘(normal seedling), 비정상묘(abnormal seedling)- hard seed, dormant seed, fresh seed(9) 발아해석 용어1) 發芽槪念(concept of germination)a. 생리화학적 의미: 흡습 후 대사작용을 시작하여 신장에 들어가는 단계b. 식물학적 의미: 종피를 뚫고 유근 혹은 유아가 출현c. 종자검사상 의미: 정상생육이 가능한 묘가 출현(normal germinationd. 경종상 의미: 포장지면에 유묘 일부가 출현(field emergencee. 실용적 의미: 포장입묘의 최종상태(field stand, established stand)2) 發芽率(percent gemination;PG): 총공시종자에 대한 발아종자의 백분율PG=(N/S)×100, 식에서 N:총발아수, s:총공시종자수B=between blotters; TB=top of blotters; T=paper towe|ing, S=sand or soi|; ed petri dishes, C=creped cellulose paper, RB=blotters with raised covers; TC=on top of creped cellulose paper without a blotter3. 생화학적 검사1) tetrazolium test- 죽은 종자와 산 종자를 확인하면서 수개월씩 걸리는 발아검사보다 種子의 발아능 을 빨리 알 수 있는 방법으로 quick test라 부르기도 한다. 이 방법은 발아능의 변화과정을 추적하는 기술 및 발아 불량의 원인을 추정하는 방법으로도 가치가 있 다.① 원 리- tetrazolium(TZ) 검사는 함수상태에 있는 종자의 호흡 여부로 배의 살아있는 조 직과 죽은 조직을 구별하는 것- 호흡할 때 탈수소효소(dehydrogenase)의 활성을 추정- 탈수소효소가 활성일 경우 환월상태의 탈수소효소로부터 수소이온이 산화상태의 tetrazolium과 결합하여 무색인 TZ가 붉은 색의 formazan으로 변하다. 이때 착 색형태와 정도에 따라 효소의 활성을 추정하며 따라서 발아능을 추정한다.② 방법- 약 16-18 시간 흡습 --> cutting or pilling --> TZ 용액에 담금 --> 35℃ 항온기에 2-6 시간 둠 --> 착색 조사③ 평가- 착색정도를 보아 평가하는데 종자의 발아능을 추정하는데는 많은 경험을 요한 다.④ tetrazolium test의 장단점- 장점= 발아능을 빨리 검사= 휴면종자의 비율을 알 수 있다- 단점= 방법이 어렵고, = 결과해석에 경험이 필요하다, = 파괴적인 검사임2) 전기전도율 검사① 원리- 죽은 종자의 세포막이 파괴되어 물의 투과가 쉽고 아울러 세포의 내용물이 물에 많이 용출되어 결과적으로 물에서 전기전도율을 증가한다. 따라서 전기전도율을 측정하여 전도율이 높은 것이 퇴화된 종자로 평가한다② 장단점- 일반적으로 종자를 집단으로 평가하여 개개의 발아능을 모른다- 재현성이 어렵다3) 종자의 누출물질에 의한 검정- 누출물질: sinapine 및 amino 로 선별하는 기술- 파종하지 않고 비파괴적으로 종자의 활력을 검정하는 새로운 개념의 종자선별 방법② 원리- 종자가 퇴화를 시작하면 제일 먼저 일어나는 생리현상으로 종자의 세포막이 퇴 화한다.- 종자가 수분을 흡수하면 퇴화된 세포막으로부터 여러 가지의 수용성 종자함유 물질이 세포 밖으로 누출되는데 그 중에는 당, 아미노산, 페놀(sinapine) 등이 포함된다.- 종자에서 아미노산이나 sinapine이 누출되는 원리를 이용하여 종자활력을 검정 하며, 누출되는 종자는 활력이 없는 종자이고 누출되지 않는 종자는 건전종자로 분류할 수 있다.③ 방법- sinapine 누출에 의한 것은 종자를 cellulose powder로 coating 하여 건조한 후 암실에서 UV 광에서 보면 sinapine이 누출된 종자는 형광색을 나타낸다- amino acid 누출에 의한 종자선별은 cellulose powder로 coating 하여 건조된 종자에 0.5% ninhydrin을 산포하여 35-40℃의 항온기에 두면 누출된 종자에서 보라색으로 발색된다.④ 장담점- 장점= 개개의 종자 단위로 선별이 가능하다= 비파괴적인 선별이므로 선별후 사용이 가능하다= 기계적으로 자동 선별로 개발이 가능하다- 새로운 기술로 앞으로 많은 연구가 더 필요하다§2. 종자세종자세(seed vigor)의 개념- 종자의 발아와 유묘의 출현 중에 보이는 활성과 능력의 정도를 결정하는 총체척인 종자의 성질① 효소반응 빛 호흡 등의 생화학적 과정과 반응② 발아 및 유묘생장의 속도와 균일성③ 포장에서의 유묘의 출현 및 생육속도와 균일성④ 불량 환경에서의 유묘의 출현능력 등이 포함- AOSA의 종자세 정의?광범위한 포장조건 하에서 신속하고 균일하게 출현하여 정상의 묘로 자랄 수 있는 능력을 결정짓는 종자의 성질?- 室內發芽率은 포장출현율보다 높게 나타난다, 이는o 실내발아검사는 발아지?수분?온도?광과 발아기간 등이 최적 조건o 포장상태에서는 발아하기에 어느정도 불량한 환경- 종자의 퇴화에 따른 발아능과 종자세와의 관계그림)

자연과학| 2005.03.26| 14페이지| 1,000원| 조회(1,203)

형질전환, 식물, 배양, 형질전환식물

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