*민* 스토어

*민*

개인

팔로워0 팔로우

소개

등록된 소개글이 없습니다.

전문분야 등록된 전문분야가 없습니다.

판매자 정보

학교정보

입력된 정보가 없습니다.

직장정보

입력된 정보가 없습니다.

자격증

입력된 정보가 없습니다.

판매지수

판매중 자료수

3개
전체 판매량

5개
최근 3개월 판매량

0개
자료후기 점수

-
자료문의 응답률

-

전체자료 3개

Metabolic regulation of sodium-calcium exchange by intracellular acyl CoAs

Sodium-calcium exchanger(NCX) : is a critical mediator of calcium homeostasis. : The plasma membrane NCX plays a role in regulation of intracellular. Ca+ concentration via the forward mode or the reverse mode. Forward mode : Ca2+ efflux Reverse mode : Ca2+ inffluxNCX1 predominantly operates in forward mode to extrude Ca2+ but, reverse-mode NCX1 activity during ischemia/reperfusion(IR) contrIbutes to Ca2+ loading and electrical and contractile dysfu-nction.forward mode to extrude one Ca2+ ion for 3-4 Na+ ions and inward Na+ current.

자연과학| 2007.11.14| 13페이지| 2,500원| 조회(248)

CoAs, Metabolic, regulation, acyl, intracell..

미리보기

닫기
Structural basis of lipid biosynthesis regulation in Gram-positive bacteria

Structural basis of lipid biosynthesis regulation in Gram-positive bacteriaI ntroduction Here we demonstrate a new role for malonyl-coA as a global regulator of lipid homeostasis in Gram-positive bacteria.Malonyl - CoA Essential intermediate in fatty acid synthesis in all living cells. Malonyl-CoA is specific inducer of Bacill us subtilis FapR A major question is whether malonyl-CoA directly regulates FapR activity or acts as a building block Acetyl - CoA Acetyl- CoA carboxylase Malonyl - CoATwo transcriptional regulators 1)activator FadR 2) repressor FabR → regulate the expression of the fabA and fabB genes .Malonyl-CoA is a direct and specific regulator of FapR activity Effect of malonyl - CoA and short-chain acyl-CoA thioesters on FapR -mediated repression. In vitro transcription was performed with a PfapR promoter fragment (6.4 nM ) as the template in the presence of FapR (120 nM ) and different concentrations of malonyl - CoA (upper panel) or malonyl - CoA analogs (lower panel).Malonyl-CoA binds FapR and modulates the repressor-operator interaction we produced two deletion mutants of FapR (FapR 43 and FapR 67 ) that contain the TLD domain but lack the DBD( A ) Isothermal calorimetric titrations of FapR with malonyl-CoA . The top panel shows the raw heat signal for 10 l injections of 240 M malonyl-CoA into solutions of 16 M FapR , 20 M FapR 43 , and 20 M FapR 67 , respectively, at 298 K (curves have been offset by 0.3 cal/s for clarity). The bottom panel shows the transition curves of the three proteins ( FapR , K d =2.40.2 M; FapR 43 , K d =7.10.9 M). The inset shows the enthalpy changes for the above reactions as a function of temperature ( FapR , H °=-1.80.2 kcal mol -1 , C p =-103.00.3 cal mol -1 K -1 ; FapR 43 , H °=-4.80.3 kcal mol -1 , C p =-31.91.1 cal mol -1 K -1 ). FapR 67 displays a flat binding isotherm at all tested temperatures between 288 and 308 K.( C ) Fluorescence anisotropy changes on addition of FapR WT to 9.5 nM 34 bp F- dsDNA (black circles); on addition of FapR WT to a mixture of 9.5 nM 34 bp F- dsDNA and 307.7 M malonyl-CoA (black triangles); and on addition of malonyl-CoA (white triangles), acetyl- CoA (white circles) or malonic acid (gray squares) to the previously formed F- dsDNA / FapR WT complex.Structural basis of malonyl-CoAbinding specificity Overall structure of the FapR 43 –malonyl-CoA complex . Ribbon model with secondary structure elements (-strands 1–6 the linker helix L and central helix C ) indicated for one monomer.Malonyl-CoA binding to FapR induces significant conformational changes ( A ) Molecular surface of the binding site in the ligand -free (left) and ligand -bound (right) FapR structures. Malonyl-CoA (in red) is shown for reference in the ligand -free structure.( B ) Formation of the tunnel involves the structuring of three protein loops (A–C) and the C-terminal end of the protein, which are highly mobile or disordered in ligand -free FapRA model of action for FapR Proposed model of action of FapR . The figure shows the repressed (operator-bound, left) and derepressed ( malonyl - CoA -bound, right) states of FapR . In each case, molecular surfaces represent the experimental X-ray structures. The DBDs (gray cylinders) are modeled on the Mec I / Bla I repressor family (Garcia- Castellanos et al , 2003). The proposed L – L interaction for the repressed state is indeed observed between neighboring dimers in the crystal structure of the FapR 43 –malonyl-CoA complex.Disruption of the malonyl-CoA-FapR interaction is deleterious for cell growth ( A ) Fluorescence anisotropy changes upon addition of FapR R106A to 9.5 nM 34 bp F- dsDNA (black circles); on addition of FapR G107V,L128W to 9.5 nM 34 bp F- dsDNA (white circles); on addition of malonyl-CoA to the previously formed F- dsDNA / FapR WT complex (gray triangles); on addition of malonyl-CoA to the previously formed F- dsDNA /FapR R106A complex (black triangles); and on addition of malonyl-CoA to the previously formed F- dsDNA /FapR G107V,L128W complex (white triangles).In conclusion… malonyl-CoA was known to serve a dual function as a general intermediate in fatty acid synthesis and as a regulatory effector .감사합니다 - ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ●Question…? Gram positive bacteria 에서 지질 생합성 과정에대해서 설명하시오 . 답 : Repressor 인 FapR 에 Malony-CoA 가 결합하여 FapR 과 DNA 의 결합을 막아서 지질이 생합성된다 .{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2007.11.14| 16페이지| 2,000원| 조회(293)

bacteria, Gram-positive, biosynthesis regu..

미리보기

닫기
ELISA

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent assay)개 요 ● ELISA 는 항체에 효소를 결합시켜 항원 - 항체 반응을 확인하는 방법으로 그 방법이 간단하고 비용이 많이 들지 않으며 다량 분석이 가능하여 현재 가장 널리 쓰이고 있는 항원 - 항체 분석법의 하나가 되고 있다 . 특히 이 방법은 방사능 면역 실험법 과 같이 매우 민감한 반응이면서도 RIA 에서처럼 방사능을 사용하지 않는다는 이로운 점이 있어서 그 사용이 증가되고 있는 방법이다 .종 류 ● Direct ELISA : 환자의 검체로부터 항원을 검출하기 위해 흔히 단일 클론 항체인 효소결합항체를 이용 ● Indirect ELISA : 환자의 혈청으로부터 특이항원과 결합하는 항체를 확인하고자 효소결합 항체를 이용Direct E E S S 5 분후 …Indirect E E S S 5 분후 …ELISA 의 장단점 장점 ELISA 는 민감하고 표준 곡선과 연관하여 사용될 때 양을 잴 수 있다 . 단점 모든 항체를 기초로 하는 방법과 비슷하고 교차반응성이 비특이적 신호 생성과 관련이 있다 . 매우 낮은 농도의 항원의 탐지에 부적절 하다 . 그래서 견쟁적 ELISA 가 보완해 준다 .(2-IgG) 0.226 0.152 0.114 0.118 0.100 0.049 0.233 0.098 0.067 0.133 0.083 0.026 0.125 0.068 0.060 0.158 0.070 0.035 0.109 0.090 0.026 0.157 0.055 0.043 0.428 0.267 0.111 0.536 0.425 0.302 0.302 0.264 0.129 0.390 0.393 0.345 (3-IgM) 0.055 0.034 0.029 0.206 0.111 0.079 0.061 0.028 0.038 0.167 0.144 0.071 0.105 0.078 0.055 0.208 0.130 0.069 0.095 0.070 0.055 0.176 0.116 0.095 0.154 0.100 0.096 0.231 0.192 0.095 0.211 0.160 0.109 0.287 0.234 0.142 1 차면역 2 차면역 PBS BSA BSA+CFA BSA+IFA PBS BSA BSA+CFA BSA+IFA1 = PBS 2 = BSA 3 = ( 왼 ) BSA+CFA , ( 오 )BSA+IFA이번 학기에 실험한 ELISA 방법은 IgM 과 IgG 항체의 존재 유무 및 양을 O.D 값 측정을 통하여 알아보는 실험이었다 . 실험과정 ① ELISA plate 에 BSA(bovine Serum antigen) 로 coating 한다 . ② plate 를 PBST 로 3 회 washing 후 37 ℃ 1 시간 방치 ③ PBST 로 3 회 세척 ④ sample 을 넣고 37[ 도 ] 1 시간 방치 ⑤ PBST 3 회 세척 ⑥ HRPO conjugated Q- IgG , IgM 넣고 37[ 도 ] 1 시간 방치 ⑦ PBST 로 3 회 세척 ⑧ ABTS substrate 가하고 실온에 5 분간 방치 Peroxidase 2H 2 O 2 ━━━━ → 2H 2 O + O 2 O 2 + ABTS Substrate ━━━━ → Color change ⑨ 405[ 나노 ] 파장에서 O.D 를 읽는다ELISA 실험은 HIV 감염징후에 대한 혈액의 일상적인 선별작업에 사용된다 . 비록 AIDS 는 인체 면역계를 심하게 해치는 질병이지만 HIV 초기감염에는 몇가지 HIV 항원 , 특히 HIV 의 피막항원에 대한 항체 생산을 유도한다 . 이를 이용하여 ELISA 실험을 다음과 같이 할 수 있다 . 임상에 유용한 ELISA 검사법방법 ① Well 에 HIV 입자를 파괴시킨 재료를 입히고 잠시 동안 보온시킨다 . ② 희석된 피검 혈청을 첨가하고 어떤 특이 항체가 HIV 항원에 결합할 수 있게 한다 . ③ 항원 - 항체 결합체의 존재를 검출하기 위해 2 차 항체를 첨가한다 . 2 차항 체는 효소가 표지된 α -human- IgG 이다 . α -human- IgG 는 HIV 항원에 이미 결합되어 있는 HIV 특이 IgG 항체에 결 합할 것이다 . ④ 효소 분석시 발색은 결합된 α -human- IgG 항체의 양에 비례하여 나타난 다 .결과 2 차 항체의 결합은 환자 형청으로부터 항체가 HIV 항원을 인지한다는 것과 그 환자가 HIV 에 대한 항체를 가지고 있음을 알 수 있다 . 이는 그 환자가 HIV 에 감염되어 있음을 암시한다 .■ 발표자 ■ 안 형태 ■ 조 원 ■ 송승용 최진휘 홍민선 성지희 탁세연 이혜영 Thank you!{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2007.11.14| 13페이지| 2,000원| 조회(2,611)

direct, ELISA, 실험방법, indirect

미리보기

닫기