* 그람염색 (Gram stain)1. 목적그람염색법에 의해 세균감별 염색 방법을 익히고 세균의 그람염색에 따른 분류와 그람염색의 원리를 익힌다.2. 실험기구 및 실험방법1) 실험기구slide glass, 현미경, 백금이, 알코올램프,균주 (Enterobacter sakazakil, Staphylococcus aureus)2) 시약crystal violet, iodine용액, 에탄올, safranin3) 실험방법①②① 깨끗한 slide glass 위에 원을 그리고 ①또는 ②라고 표시를 한다.(두 가지 균을 비교하기 위함)② 백금이를 알코올램프에 소독한다.③ 배양된 균액을 잘 흔든 후 백금이로 균을 채취한 후 원 위에 넓게 펴서 도말한다.(Enterobacter sakazakil는 ①번 slide glass에 도말하고,Staphylococcus aureus는 ②번 slide glass에 도말한다.)④ 건조하고 고정시킨다.⑤ crystal violet을 도말 표본위에 가하여 1분간 염색한다.⑥ slide glass를 뒤집어서 약하게 흐르는 수돗물로 수세한 후 iodine용액으로 1분간착색한다.⑦ 수세 후, 에탄올로 20초간 탈색한다.⑧ 수세 후, safranin으로 20초간 대비염색한다.⑨ 수세 후, 건조시켜 현미경으로 관찰한다.3. 결과Gram염색은 세균을 분류하는데 중요한 지표가 되고 있다. Gram염색을 하고 난 뒤 탈색되지 않고 청색 혹은 청자색으로 염색되어 있는 것이 Gram 양성균이고 탈색되어 safranin에 의해 대비염색 되어 적색으로 염색되는 것이 Gram 음성균이다.우리가 실험을 한 결과 ①번의 Enterobacter sakazakil는 간균으로 적색을 나타내어 Gram음성균이었고 또 다른 하나 ②번의 Staphylococcus aureus는 구균으로 남색을 나타내어 Gram 양성균으로 분류 되었다.탈색균 색균주그람양성×청색Staphylococcus aureus그람음성○적색Enterobacter sakazakil4. 고찰덴마크의 세균학자 Christian Gram은 1884년 Gram염색법에 의하여 세균을 크게 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류했다. 그람염색의 주된 원리는 근본적으로 세포벽 구조가 다르기 때문이다. 세균의 세포벽은 크기와 형태를 유지하고 삼투압에 의한 세포 파열을 방지하는 역할을 한다. 이러한 세포벽에는 peptidoglycan층이 있어서 단단한 것이다.그람양성균의 세포벽은 peptidoglycan층이 두껍게 감싸고 있는데 세포벽의 약 80~90%가 peptidoglycan층이다. 반면 그람음성균의 세포벽은 peptidoglycan층이 매우 얇으며 세포벽의 10~20%만이 peptidoglycan층이다.이런 세포벽차이에 의해서 탈색과정 시, 그람양성균은 peptidoglycan층이 두꺼워 CV-I복합체가 세포 밖으로 빠져나오지 못한다. 그러나 그람음성균의 경우 대부분 인지질로 구성된 외막과 세포막이 쉽게 용해되며, 얇은 peptidoglycan층은 CV-I복합체를 막기 곤란하기 때문에 쉽게 탈색된다.