이번 실험의 목적은 배지 제작 및 정성적, 정량적으로 미생물의 활성을 측정하는 것이다. 또한 활성 측정 과정을 통해 미생물에서 발현되는 다양한 유용 생리 활성의 종류와 중요성을 이해하고 미생물의 산업적 이용 가능성을 예측하는 것이다. 배지란 균이나 세포 배양을 위해 생물의 생존, 증식을 위한 염류, 탄소워, 질소원 등을 혼합한 인공환경이다. 탄소원은 배양하게 될 균의 에너지 공급과 세포를 구성하는 유기 분자 형성의 기능을 한다. 주로 glucose가 사용되지만 이번 실험에서는 탄소원으로 starch를 넣은 starch 배지를 제작한다. 배지 제조 시 주의상으로는 배지의 종류에 efk 제조방법이 다를 수 있으므로 배지별로 보관, 제조, 멸균에 대한 사전 확인이 필요하다. 오염으로 인한 실험오류를 방지하기 위해 화염 멸균을 통한 무균 상태를 유지한다.
1. 원핵세포의 염색체원핵세포는 핵막이 없고 히스톤 단백질이 결합되지 않은 하나의 염색체만을 가진다. 원핵세포의 염색체는 주로 원형모형이다. 원핵세포에서는 염색체와 별개로 플라스미드라는 항생제 저항 유전자가 있는 원형의 물질이 있으나 이는 염색체가 아닌 별개의 물질이다.2. 진핵세포의 염색체2.1 염색체진핵세포에서 유전정보의 전달자로서 긴 선형의 형태로 세포의 핵 속에 들어있다. 핵질은 60%의 단백질, 35% DNA, 5%의 RNA로 구성된 복합물질이며, 인과 염색질로 구성된다. DNA는 유전 정보를 담고 있는 역할이고 단백질은 염색체의 구조를 유지하고 유전자의 활성을 조절한다.2.2 염색질염색질은 DNA와 단백질의 복합체이며 염색사의 주성분이다. 세포가 분열하지 않을 때 염색체가 응축되지 않은 형태인 염색질로 존재한다. 세포분열 시기에 DNA와 히스톤단백질이 결합하여 염색사를 형성하며, 염색사는 더욱 응축하여 염색체가 된다. 이 과정을 다시 자세히 설명한다면 이러하다. 음전하를 띤 염색질의 DNA분자와 양전기를 띤 히스톤단백질 4종류 (H2A, H2B, H3, H4)가 모여 ......<중 략>
5.1 실험 재료 (Materials)- 양파, 1% 요오드 용액, 글리세린수, 면도칼, 핀셋 - 페트리디쉬, 슬라이드글라스. 커버글라스. 휴지 - 스포이드, 광학현미경5.2 실험 방법 (Methods)① 4개의 슬라이드글라스에 각각 양파 안쪽 표피 염색○, 염색╳ / 양파 바깥쪽 표피 염색○, 염색╳를 표시한다.② 양파의 안쪽, 바깥쪽에서 표피 2장씩을 편도칼을 이용하여 채취하여 슬라이드 글라스에 올린다.③ 표피 위에 무을 떨어트리고, 접힌 부분이 없도록 펴준다.④ 휴지를 이용해 표피 주변의 물기를 제거한다.⑤ 안쪽 염색╳ 슬라이드글라스와 바깥쪽 염색╳ 슬라이드글라스에 글리세린수 한 방울을 떨어트린다.⑥ 안쪽 염색╳ 슬라이드글라스와 바깥쪽 염색╳ 슬라이드글라스의 표피 주변 물기를 휴지를 이용해 제거한다.※ ⑦~⑩은 안쪽 염색○, 바깥쪽 염색○의 슬라이드글라스에 해당하는 내용이다.⑦ 양파 표피 위에 1% 요오드 용액을 떨어트려 2분간 염색한다.⑧ 휴지로 여분의 염색약을 제거하고, 양파 표피가 떨어지지 않게 스포이드를 이용하여 물을 1~2 방울 표피 주변에 뿌린 후 흔들어 씻어낸다.
1. 그람염색1.1 그람염색의 배경지식Ÿ 가장 널리 쓰이는 세균 감별 염색법이다. Ÿ 1884년 덴마크의 의사인 Christain Gram이 고안한 세균 감별 염색법이다. Ÿ 염색 성질에 따라 세균을 크게 두 그룹으로 나눈다. Ÿ 감염 질환의 조기 진단에 이용된다. 1.2 그람염색의 원리① 염색 (Crystal violet)Crystal violet (염기성 색소) 으로 염색하면 그람양성균과 그람음성균 모두 자주색으로 염색된다. ② 착염 (매염)①단계에서 염색된 세균에 요오드 용액을 처리하면 Crystal violet과 요오드가 반응한다. 이로 인해 세포 내의 불용성 복합체인 Crystal violet – 요오드 복합체 ( CV-I ) 형성된다. ③ 탈색착색된 세균에 탈색제인 95% Ethyl alchol 시약 처리하면 착색된 CV- I 복합체가 용해된다. 이 과정을처리하면 그람음성균은 탈색되어 백색으로 보인다.
Ⅰ. 크로마토그래피1. 크로마토그래피란?크로마토그래피는 혼합물을 흡착제에 대한 친화도의 차 즉, 분별 흡착 현상을 이용하여 분리, 정제, 정성, 및 정량분석을 할 수 있는 방법이다. 성질이 비슷한 물질이 섞여있거나 그 섞여있는 양이 적을 때에효과적으로 분리할 수 있다. 조작이 간단하고 소요 기간이 짧은 실험 방법이다. 크래마토그래피는 여러 가지 종류가 있으나 고정된 흡착제의 한 끝에 시료를 넣고 용매 또는 기체를 연속적으로 흐르게 하는 원리는 똑같다. 2. 크로마토그래피의 원리크로마토그래피는 이동상1)과 고정상2)으로 이루어져있다. 크로마토그래피의 원리는 용매에 물질들이 녹아 고정상을 통과할 때 물질에 따라 고정상에 흡착되는 속도가 다른 성질을 이용한다. 흡착되는 속도가 다른 이유는 고정상과 용매(=혼합물) 사이의 결합이 다양하기 때문이다. 또한, 고정상에 의한 흡착력이 큰 성분은 움직임이 크지 않아 이동 속도가 느리고, 반대로 흡착력이 약한 성분의 이동 속도는 빠르다. 고정상을 통과할 때 다른 물질의 이동 속도에 따라 혼합물은 분리된다. 3. 크로마토그래피의 이용크로마토그래피의 적용 방법이 다양하게 개발되어 연구실이나 산업 현장에서 널리 활용되고 있다. 아미노산, 지방, 금속이온, 혈액, 소화효소, 비타민, 당분 등 많은 종류의 물질을 분리하거나 확인할 때 이용된다. Ⅱ. 크로마토그래피의 종류