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(실험동물 기술원 2급 전국1등 자료) 실험동물학 및 실습 요약 및 기출문제 / 실험동물기술원 자격증 기출문제

[ 실험동물기술원 시험 정리 ] 실기 : 장기, 동물실험법(방법들), 보정, 경구투여, 복강투여, 부검법 등 1. 실험동물의 해부와 생리- 실습/그림, 폐구조, 위구조, 그림보여주고 랫드마우스 폐 고르기, 부검그림 ..

시험자료| 2023.03.09| 33페이지| 40,000원| 조회(7,144)

실험동물학, 실험동물기술원, 실험동물학및실습

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2024 GMP기술인 2차시험 "2주만에 회사다니며 독학 후 합격한 기출문제요약본" / GMP기술인 자격증 2차 / 기출문제 바탕으로 만든 요약본 평가A+최고예요

ㆍ[제조부서 책임자] : 제조공정관리, 제조위생관리 및 보관관리를 담당하는 부서의 책임자(1) 제조관리를 적절히 하기 위하여 *** [제품표준서], [제조관리기준서], [제조위생관리기준서]에 성명을 적고 서명하여 승인을 받아 갖추어 두고 운영하여야 함. (2) [제조지시서]에 의하여 작업을 지시하고 [제조지시서]에 따라 제조되는지를 점검ㆍ확인하여야 하며, 일탈이 있는 경우에는 이를 조사하고 기록하여야 함. (3) 제조위생관리 및 보관관리가 규정대로 되고 있는지를 점검ㆍ확인하여야 함. (4) 품질(보증)부서 주관 하에 제조부서의 중요 기계ㆍ설비에 대한 적격성평가 및 공정에 대한 밸리데이션을 실시하고 이를 확인하여야 함. ㆍ제조지시서와 제조기록서를 따로 작성하지 않고 제조지시서의 빈 칸에 지시한 대로 실행한 내용을 기록하게 하는 [제조지시 및 기록서]로 작성할 수 있으며, 제조단위별로 작성하고 발행하며 작업 내용을 가능한 구체적으로 정확하게 작성하도록 관리할 책임이 있음. ㆍ[품질(보증)부서 책임자] : 원자재ㆍ반제품 및 완제품의 품질관리 및 품질보증을 담당하는 부서의 책임자 (1) 품질관리를 적절히 하기 위하여 [제품표준서] 및 [품질관리기준서]에 성명을 적고 서명하여 승인을 받아 갖추어 두고 운영하여야 함. (2) [시험지시서]에 의하여 시험을 지시하고 [시험지시서]에 따라 시험이 진행되는지를 점검ㆍ확인하여야 하며, 일탈 및 기준일탈이 있는 경우에는 이를 조사하고 기록하여야 함.(3) 모든 문서와 절차를 검토하고 승인하여야 함.(4) 환경관리에 관한 사항을 승인하고 주관하여야 함.(5) 밸리데이션에 관한 사항을 승인하고 주관하여야 함. 다만, 특별한 사유로 품질(보증)부서 책임자가 일부 밸리데이션 업무에 대하여 별도의 관리자를 지정하는 경우에는 그렇지 않음. (6) 안정성 시험을 하여야 함.(7) 제품품질평가를 하여야 함.(8) 시험성적서 및 제조단위별 제조기록서의 내용을 검토하고 제품의 출하를 승인하여야 함. (9) 시험 결과에 따라 원자재의 사용 여부, 제조공정의 진행 여부 또는 제품의 출하 여부를 결정하고 그 결과를 미리 정한 절차에 따라 관련 부서에 통지해야 함. (10) 부적합품이 규정된 절차대로 처리되고 있는지를 확인해야 함.(11) 불만처리 및 제품회수에 관한 사항을 주관해야 함.(12) 변경관리를 승인해야 함.(13) 자율점검을 계획하고 추진해야 함. (14) 제조 또는 시험의 수탁자와 주요 원자재의 제조업자를 평가해야 함.(15) 원료약품, 자재 및 완제품의 보관관리 담당자를 지정해야 함.

생산/제조/기계기능사| 2025.01.20| 64페이지| 20,000원| 조회(1,828)

GMP기술인, GMP기술인2급, GMP기술인요약본, GMP기술인기출문제, GMP..

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(2024) GMP & 밸리데이션 기술인 "회사다니면서 2주 독학 합격" 요약본 (1과목, 2과목) / 평가A좋아요

[2024 GMP 기술인 2급]1과목: 의약품 GMP / 2과목: GMP 실사기준■ (3개정판) ■1. 용어의 정의* 일탈: 제조 또는 품질관리 과정에서 미리 정해진 기준을 벗어나 이루어진 행위* 기준일탈: 시험의 결과가 미리 정하여진 시험기준을 벗어난 경우* 이론 생산량: 원료약품의 투입량으로부터 이론적으로 계산된 반제품 또는 완제품의 양* 자재: 포장과 표시 작업에 사용되는 용기, 표시재료, 첨부 문서, 포장 재료 등을 말함-관리번호: 제조단위를 부여할 수 없는 자재 등을 관리하기위하여 부여한 번호로 숫자,문자 또는 이들을 조합한 것-교정: 계측기, 시험기기 또는 기록계가 나타내는 값과 표준기기의 참값을 비교하여 오차가 허용 범위 내에 있음을 확인하고, 허용오차 범위를 벗어나는 경우 허용 범위 내에 들도록 조정하는 것-무균 구역: 무균 작업을 위한 무균 물질 또는 멸균 처리된 용기가 노출되는 장소, 무균제제를 채워 넣거나 밀봉하 는 작업을 하는 장소 및 무균 시험 등의 무균 조작을 하는 장소-반제품: 제조공정 단계에 있는 것으로서 필요한 제조공정을 더 거쳐야 완제품이 되는 것-밸리데이션: 특정한 공정, 방법, 기계설비 또는 시스템이 미리 설정되어 있는 판정 기준에 맞는 결과를 일관되게 도출한다는 것을 검증하고 이를 문서화하는 것-수율: 이론 생산량에 대한 실생산량의 백분율-수율관리기준: 제조 공정이 정상적으로 진행되었을 경우 얻어지는 제품별 연간 평균생산수율 범위-실생산량: 제조 공정에서 실제로 얻은 양-원생약: 동물, 식물 또는 광물에서 채취된 것으로서 한약 원료로 사용하기 위한 세척, 선별, 절단 등 가공을 하지않은 상태의 것-재가공: 기준일탈한 제조 공정 단계에 있는 반제품에 대하여 이미 설정된 생산 공정의 일부 공정을 반복하는 행위-적격성평가: 기계, 설비가 설계한 대로 제작, 설치되고 목적한 대로 작동하여 원하는 결과가 얻어진다는 것을 증명 하고 이를 문서화하는 것-제조: 포장 및 표시 작업을 포함하여 의약품을 생산하기 위하여 하는 모든 작업*** 함. (서명ㆍ승인ㆍ비치ㆍ운영)- 제품표준서 및 품질관리기준서의 필요 부분을 필요한 장소에서 활용할 수 있도록 관리해야 함.- 관련 기준 및 절차서는 최신 사항을 반영하여 유효한 것이어야 하며 개정 이전의 것이 활용되지 않도록 주의- 품질조직의 장: 출발물질, 포장자재, 반제품, 벌크 제품 및 최종 제품의 규격에 따라 승인 또는 부적합 판정: 배치기록서 평가: 모든 필요한 시험의 실시 여부 확인: 검체 채취 지시문서, 규격 문서, 시험 방법, 기타 QC 절차 문서 승인: 계약에 의거하여 실시하는 분석 업무의 승인 및 모니터: 부서, 시설, 설비의 유지 상태 점검: 관리 설비의 교정 및 분석 절차 밸리데이션을 포함한 밸리데이션의 수행: 품질 조직 작업원의 최초 교육 훈련 및 계속 교육 훈련 실시 및 필요에 맞춰 교육 훈련 내용 조정: 품질 시스템의 확립, 구축, 유지: 정기 내부 감사 또는 자체 실사의 감독: 외부 감사(벤더 감사) 참여: 밸리데이션 프로그램 참여2) 시험지시서에 의하여 시험을 지시하고 시험지시서에 따라 시험이 진행되는지를 점검ㆍ확인해야 하며, 일탈 및 기준일탈이 있는 경우에는 이를 조사하고 기록해야 함.- 품질(보증)부서 책임자는 시험지시에 시험대상 의약품(제조번호 또는 관리번호)을 지정하고 이후의 관리를 위하여 시험번호를 부여한 다음 시험항목과 시험방법 및 기준을 지정하고 지시자의 서명과 지시연월일을 기재한 후 시험을 지시하며, 시험이 시험지시서에 따라 진행되는지를 점검ㆍ확인해야 함.- 시험지시서는 “시험지시 및 성적서”에 포함하여 작성할 수 있으며, 일탈 및 기준일탈이 있는 경우 이를 조사하고 기록해야 함.3) 모든 문서와 절차를 검토하고 승인해야 함.4) 환경관리에 대한 사항을 승인하고 주관해야 함.- 방충방서를 외부 전문업체에 의뢰하여 관리할 수 있으며, 외부업체의 선정 시 그 적절성을 평가하여야 함.- 제조소는 외부업체에 의뢰한 작업 내용을 확인한 후 적절한 조치를 해야 함.5) 밸리데이션에 관한 사항을 승인하고 주관해야 함.다만, 특 등), 항목(ex. 멸균공정 등): 원료약품 및 그 분량, 기계, 설비, 공정흐름도, 상세한 공정 및 중요 공정의 변수 등: 검체채취에 관한 사항, 시험항목 및 허용 기준: 수행방법 및 판정기준: 수행 기간: 수행 담당자 확인: 기타 밸리데이션 실시 기준 근거 등 필요한 사항- ** 밸리데이션 결과보고서에 포함 되어야 하는 것: 개요 및 기술적 고려사항: 수행 결과: 계획서와 다른 사항이 있을 때 그에 대한 설명: 부적합에 대한 조치: 결론- 밸리데이션 책임자가 수행해야 하는 업무: 밸리데이션 종합계획서 및 실시계획서 작성ㆍ변경에 관한 사항: 밸리데이션 수행에 관한 사항: 밸리데이션 결과보고서 작성, 결과판정 및 평가에 관한 사항: 밸리데이션 문서의 보관에 관한 사항: 기타 밸리데이션 수행에 관한 사항** [공정밸리데이션]대상 공정을 사전에 설정한 공정 조건에 따라 수행하였을 때 기준 및 품질 특성에 부합하는 의약품이 재현성 있게 생산됨을 검증하고 문서화하는 절차.1) 의약품 제조공정이 미리 설정된 기준 및 품질 특성에 맞는 제품을 일관되게 제조한다는 것을 검증하고 문서화하는 공정밸리데이션을 실시하여야 함.- 공정밸리데이션을 수행하기 전에 주요 기계ㆍ설비ㆍ지원시스템에 대해 적절한 적격성평가를 완료해야 함.- 공정밸리데이션을 수행하기 전에 중요한 출발물질 및 포장자재의 공급업체들은 밸리데이션 제조단위(로트) 생산 전에 적격성평가가 완료되어 있어야 함.- 일반적으로 공정밸리데이션을 위해 제조되는 제조단위(로트)의 크기는 판매되는 제품의 제조 단위와 동일해야 하고, 다른 제조단위를 사용할 경우 그 사유가 정당화되거나 관련 규정에 명시되어 있어야 함.- 비무균제제로서 밸리데이션을 실시한 품목과 제형, 주성분, 제조공정 및 제조시설이 동일한 품목의 경우 공정밸리데이션 생략가능.2) 제품의 품질에 영향을 미치는 중요한 제조공정에 대해서는 *예측적 밸리데이션*을 실시하여야 하되, 부득이한 경우에는 *동시적 또는 회고적 밸리데이션*으로 갈음할 수 있음.- 최근 PIC/S에를 판정ㆍ이화학적 방법에 의한 품질평가: 한약의 화학 성분을 정성 및 정량적으로 시험하여 평가하는 것.ex. 정색반응법, 박층크로마토그래피(TLC), 가스크로마토그래피(GC), 고속액체 크로마토그래피(HPLC),이온교환 크로마토그래피(IC), 전기영동법 등 이용ㆍ생물학적 방법에 의한 품질평가: 동물 또는 미생물을 사용하는 생물검정법을 한약의 약효 평가에 적용하는 것으로서 ‘약리학적 품질평가’라고도 함.* [안정성 시험]의약품 등의 보관 조건 및 사용기간 등을 설정하기 위하여, 경시 변화에 따른 품질의 안정성을 평가하는 시험1) 안정성 시험은 계획을 수립하여야 하고, 그 결과에 따라 완제품의 유효기간 또는 사용기간, 포장 방법 및 저장 조건을 설정하여야 함.- 원료의약품 또는 완제의약품의 안정성 특성을 점검하기 위해 문서화된 안정성 시험 프로그램을 설계하여야 하며 그 결과를 적절한 보관 조건과 재시험기간 또는 사용(유효) 기간 확증에 사용해야 함.- 안정성 시험은 품목허가(신고)를 받은 제조소가 *품목별*로 실시하는 것이 원칙- 수탁자가 제조하는 품목과 위탁자가 제조 의뢰한 품목이 원료약품 및 그 분량, 제조방법(공정 변수 포함), 제조설비, 의약품과 직접 접촉하는 포장재료(1차 포장재료) 등 의약품 제조 관련 사항 일체가 동일한 경우에는 **위탁자**는 안정성 시험을 생략할 수 있음.2) 안정성 시험 계획서- 안정성 시험은 시판할 제품과 *동일한* 포장 용기를 사용- 시험 항목은 식품의약품안전처장이 허가(신고)한 기준 및 시험방법에 따라 *전 항목*을 원칙으로 함.3) 시판용으로 제조하는 최초 3개 제조단위에 대하여 장기보존시험을 해야 하며 시험 결과 제품의 품질에 영향을 미치는 경우에는 유효기간 또는 사용기간을 조정해야 함.- 허가(신고) 이후 최초의 판매용 3개 제조단위에 대해서 안정성 시험 계획서를 작성하여 이에 따라 실시해야 함.4) ** 시판 후 안정성 시험 **- 사용기간 또는 유효기간 동안 제품 품질이 유지되는 것을 확인하기 위해 시판 후 **장기어 있어야 함.ㆍ회수는 즉시 그리고 언제든지 시작할 수 있어야 함.ㆍ판매 기록은 회수책임자가 쉽게 활용할 수 있어야 하며, 수출된 제품 및 견본품을 포함하여 도매업자 및 직접 공급받은 자에 대한 충분한 정보(주소, 연락처, 운송된 제조단위, 수량)를 포함해야 함.ㆍ회수된 제품은 식별할 수 있어야 하고 그 처리가 결정될 때까지 출하되지 않도록 별도의 통제 구역에 격리 보관ㆍ회수절차의 진행과정을 기록하고 운송 및 회수된 제품의 수량 비교를 포함한 최종 보고서를 작성해야 함.12. 변경관리13. * 자율점검- 계획을 수립하여 자체적으로 제조 및 품질관리가 이 기준에 맞게 이루어지고 있는지를 정기적으로 자율점검해야 함. 다만, **기준일탈**이나 **제품회수**가 빈번하게 발생하는 등 특별한 경우에는 추가로 실시.- 자율점검을 실시할 수 있는 사람은 품질(보증)부서 책임자 또는 품질(보증)부서 책임자가 지정하는 사람으로서 이 기준에 대한 지식과 경험이 풍부한 사람이어야 하며, 필요한 경우에는 외부 전문가에게 의뢰하여 실시할 수O- 자율점검은 사전에 실시의 목적ㆍ범위 등을 정하여 실시하고, 자율점검 후에는 그 결과와 개선 요구사항 등이 포함된 보고서를 작성하여야 하며, 개선요구사항에 대해서는 기한을 정하여 개선해야 함.- GMP원칙 시행 및 준수 여부를 점검하고 필요한 시정조치를 제안하기 위하여 자율점검(자체실사)을 실시해야 함.- 자율점검(자체실사)은 회사 내부의 자격있는 작업원을 지정하여 독립적이고 상세한 방법으로 실시하여야 하며 GMP에 충분한 지식이 있는 외부전문가에 의한 독립적인 점검도 유용할 수 있음.14. 교육 및 훈련15. * 위탁제조 및 위탁시험 관리Q ex. 의약품 제조 및 시험을 위탁하는 경우 관련 GMP 업무가 적절하게 수행되도록 하기 위해 위탁자가 할 일?- 의약품 등 제조 또는 시험의 위탁자는 제조 또는 시험이 적절하게 이루어지도록 수탁자에 대한 관리ㆍ감독을 철저히 하고, 수탁자로부터 제조 및 품질관리의 기록에 관한 서류를 받아 **3년 이상*거나,

생산/제조/기계기능사| 2025.01.20| 54페이지| 15,000원| 조회(2,332)

GMP, GMP기술인, 밸리데이션기술인, 밸리데이션 기술인, GMP기술인요약본, GMP기술인기출문제

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CRISPR/Cas9 / 유전자 가위 / 분자생물학 레포트

유전자가위 CRISPR /Cas9 Genome Engineering00대학교0000전공00학번 000[ 목차 ]Ⅰ. 서론 ---------------------------------------------------------------Ⅱ. 유전자 가위기술 ---------------------------------------------------(1) 1세대 유전자 가위기술 ----------------------------------------------(2) 2세대 유전자 가위기술 ----------------------------------------------(3) 3세대 유전자 가위기술 ----------------------------------------------Ⅲ. CRISPR Cas9 system의 방법 및 사례 ---------------------------Ⅵ. CRISPR Cas9 system의 전망 -------------------------------------Ⅴ. 참고 문헌 ----------------------------------------------------------Ⅰ. 서론유전자 가위기술은 기존의 의학적 방법으로 치료가 어려운 다양한 난치성 질환에 대하여 문제가 되는 유전자를 제거하거나 정상적인 기능을 하도록 유전자를 편집 또는 삽입함으로써 근원적인 치료를 할 수 있는 기술이다. 유전자 가위기술은 유전질환 뿐만 아니라 암, 감염증, 대사이상 질환, 자가면역 질환 등의 치료에도 활용이 가능할 것으로 기대되고 있으며 유전자치료 뿐만아니라 농업, 공업 등 많은 분야에서 이용되고 있고 앞으로도 다양한 분야에 이용될 것이다. 이러한 유전자 가위기술은 1세대 ZFN (zinc finger nuclease), 2세대 TALEN (Transcriptor Activator-Like Effector Nuclease)을 거쳐 3세대 CRISPR (Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic R 구조를 가지는데서 유래한 명칭이다. ZFN의 핵심 기능 부위인 zinc-finger domain은 진핵생물에서 발견된 것으로 Cys2-His2구조를 가지고 30개의 아미노산으로 구성되며 ββα 입체 배열을 가진다. 이들 아미노산 중, a-helix 표면에 위치하는 아미노산들이 DNA 상의 3개의 뉴클레오타이드와 선택적인 결합을 함으로써 zinc-finger domain은 DNA서열을 인식하게 되는 특성을 이용하여, 임의의 3개의 뉴클레오타이드 서열을 인식하는 zinc-finger를 설계하고, 타겟 DNA서열과 상보적 결합을 이루는 특정 zinc-finger들을 연결하는 ‘modular assembly’를 통하여, DNA 서열 중 18 base pair를 특이적으로 인지할 수 있는 선택성을 가지도록 제작할 수 있다. 그러나 zinc-finger domain 자체로는 유전자에 결합은 할 수 있으나 절단하는 기능은 가지고 있지 않다. 제1세대 유전자 가위기술로 명명되는 ZFN을 이용한 특정 유전자 서열 절단 기술은 목적하는 서열의 DNA를 인지하는 zinc-finger domain의 아미노산 배열을 직접 설계하고 제작한다는 점에서 고비용이 필요하며 제작 기간이 긴 단점이 있다. 또한 zinc-finger domain은 5‘-GNN-3’, 형태의 서열을 인지하므로 타겟 유전자 선정의 유연성이 제한된다는 한계점을 가지고 있다.(2) 2세대 유전자 가위기술Transcription activator-like effector(TALE)는 식물 병원성 박테리아에서 발견된 DNA 결합단백질로 33-35개 아미노산이 반복되는 domain의 연속으로 이루어져있다. DNA와의 결합은그림 2. TALE nuclease의 구조 / 출처 : Gaj et al. 2016각 domain상의 repeat variable di-residues(RVD)라고 불리는 각각의 repeat가 한 개의 뉴클레오타이드와 선택성을 가진다. Zinc finger 단백질과 유사하게 TALE 단백질도 연속적으로 경우에도 세포 내 전달이 어려운 단점을 가진다.(3) 3세대 유전자 가위기술그림 3. CRISPR/Cas9의 구조출처 : Gaj et al. 2016 Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-Cas9(CRISPR-Cas9)는 세균의 면역반응에 관여하는 단백질에서 유래한 것으로 외부에서 침입한 바이러스 유전자를 절단함으로서 박테리아를 보호하는 기능을 가진다. 제1세대의 zinc finger domain이나 2세대의 TALE이 그 자체로는 유전자 절단 효소의 기능이 없어서 유전자 절단 효소를 fusion하여서 제작하는 어려움이 있는 반면, 3세대인 CRISPR/Cas9은 그 자체가 유전자 절단 효소의 기능이 있어 별도의 제한 효소와의 fusion 과정이 필요 없는 큰 차이점이 있다. 유전자를 절단할 수 있는 Cas9 단백질은 single guide RNA(sgRNA)와 complex를 이루고 있는 형태로서 sgRNA는 5’-NGG-3’로 이루어진 protospacer-adjacent motif(PAM) 서열을 포함하는 상보적 서열을 가지는 DNA에 결합함으로써, Cas9가 선택적 서열을 자를 수 있게 유도한다. 1세대 및 2세대 유전자 가위기술과 달리 3세대 기술에서는 유전자 서열의 특정 부위을 단백질 domain이 아닌 22개의 서열로 이루어진 sgRNA에 의해 이루어지므로 여러 장점을 가지며 zinc-finger domain 또는 TALE을 제조하는 단백질 설계 및 복잡한 제조 공정이 sgRNA로 대체됨으로서 일반 실험실이나 연구자들 수준에서도 목적에 따라 다양한 sgRNA를 제작할 수 있으므로 매우 간편하여 유전자 가위기술의 응용범위를 신약개발 뿐 아니라, 수의학, 농수산 분야 등으로 확장하는데 크게 활용되고 있다.Ⅲ. CRISPR Cas9 system의 방법 및 사례(1) 전달 방법유전자 가위의 효율적인 전달은 효율적인 유전자 교정과 직접적으로 영향이 있습니다. Cas9과 안내자 RNA는 일반바이러스 내에 염기서열을 결합시키기 위해서 복잡한 codon optimization,promoter selection 과정을 거쳐야 하고 면역 관련 안전성 이슈가 있습니다. 렌티바이러스는 상대적으로 많은 염기서열을 포함할 수 있어서 다수의 안내자 RNA를 포함할 수 있고, transfection이 어려운 세포에도 유전자 가위 성분을 효율적으로 전달할 수 있는 장점이 있으나, 암을 유발할 수 있거나 off-target effect가 생길 수 있다는 것이 단점으로 꼽힙니다. 아데노바이러스는 host genome에 직접적으로 integration이 일어나지 않아서 렌티바이러스보다 상대적으로 안전하다는 장점이 있지만, 면역반응에서 완전히 자유로울 수가 없고, 대량생산이 비싼 것이 단점입니다. 가장 많이 사용되고 있는 것이 상대적으로 독성이 약한 아데노 부속 바이러스(Adeno-associate virus; AAV) 입니다. 실제로 AAV를 이용하여 근육 유전병인 Duchenne Muscular 동물 모델에서 결핍되었던 dystrophin 이 다시 발현하는 효능을 보였으나 AAV는 탑재시킬 수 있는 염기서열의 크기가 4.7 kb 미만으로 제한되어 있어, 4.2 kb의 크기인 Cas9을 탑재하고 나면 안내자 RNA나 공여 DNA를 한 바이러스 내에서 전달하기가 쉽지 않습니다.비바이러스 기반 전달 방법으로는 천공법(electroporation), 지질 인자(lipid particle) 등이 사용되고 있습니다. 전류를 흘려보내 세포막에 구멍을 뚫는 방법인 천공법은 줄기세포를 이용한 연구에 많이 사용되었습니다. 하지만, 이 방법은 생체 내(in vivo)에서 적용시키기는 다소 어려운 점이 있습니다. 지질(lipid) 인자 기반 전달 방법은 전통적으로 유전자 전달에 많이 사용되고 있는 방법입니다. 양성을 띠는 Cas9 단백질과 강한 음이온을 띠는 안내자 RNA가 서로 결합하여 음이온을 띠는 Cas9 단백질-RNA 복합(Ribonucleoprotein: RNP)를 만들며, 이는 염되었고 438,000명이 말라리아로 사망했습니다.(WHO [The world Malaria report 2015]) CRISPR / Cas9의 사용으로 2015년에 모기에 말라리아 저항성을 부여하여 사람에게 말라리아를 옮기지 못하게 제어를 성공하여 모기 자체가 말라리아 원충을 갖지 못하니 사람으로부터 흡혈을 해도 말라리아를 전염시킬 수 없게 되었습니다. (Gantz, Jasinskiene et al. 2015)2) 돼지는 RERV(Porcine Endogenous Retrovirus)를 유전자내에 가지고 있습니다. 그래서 돼지를 아무리 깨끗하게 키워도 바이러스를 제거할 수 없어 돼지 장기의 인간 이식을 가로막는 요인 중 하나인 PERV 바이러스가 가장 큰 걸림돌이 되고 있었습니다. 하지만 2015년에 CRISPR / Cas9을 사용하여 돼지의 유래 세포의 염색체 내에 산제되어 있던 PERV 유전자 62개를 모두 불활성화 하는데 성공했습니다.3) 2016년에는 CD163을 제거하여 PRRS 바이러스에 감염되지 않는 돼지의 생산 성공하였습니다. (Whitworth, Rowland et al. 2016)그림 4. CRISPR-Cas9 의 응용 현황 / 출처 : History and market impact on CRISPR RNA-guided nucleases, ScienceDirect (2015) 4) 2016년 6월 22일 ‘사이언스’ 지에 따르면 미국 국립보건원(NIH) 자문위원회는 암 환자를 치료하는데 ‘크리스퍼(CRISPR)-Cas9′ 유전자가위 기술을 적용하겠다는 미국 펜실베이니아 대 연구팀의 제안을 21일(미 현지시간) 승인했습니다. 위원회는 그동안 정부 등 공공자금 지원을 통해 수행되는 유전자 치료 임상실험의 안전성과 도덕성을 심의해왔습니다, 그리고 ‘크리스퍼’를 이용한 임상실험이 안전성과 도덕성 측면에서 문제될 것이 없다는 결론에 도달한 것으로 알려졌습니다.Ⅵ. CRISPR Cas9 system의 전망사용의 편리성과 높은 잠재력, 빠른 산업화로 유.

자연과학| 2023.06.22| 6페이지| 2,500원| 조회(93)

분자생물학, CRISPR/Cas9, 유전자가위, CRISPR Cas9

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Human intestinal B cells in inflammatory diseases / 혈액학 레포트

Human intestinal B cells in inflammatory diseases혈액학000 교수님 과제00000 연구실000장 내강에서는 병원체의 침입에 대하여 능동적으로 보호하기 위해 복잡한 균형을 이루고 있다. 장은 병원체에 대해 즉각적이고 효과적인 면역을 제공하지만 자신의 항원에는 반응하지 않는다. B cell은 장에서 이러한 보호를 위한 핵심적인 세포이다. B cell의 활성과 성숙은 신체에서 가장 큰 plasma cell 집단을 생성하는 등 여러 역할을 수행한다. 이 리뷰 논문에서는 항상성의 상실로 인해 장 및 전신 염증성 질환이 발생할 때 장내 B cell의 역할에 대해 논의한다.key points? Gut B cell 반응은 조직화된 gut-associated lymphoid tissues(GALT)에서 시작된다.? GALT에서 생성된 Antibody-secreting plasma cell과 전구체는 lamina propria를 확산시키기 위해 광범위하게 퍼진다.? GALT에서 IgG를 발현하는 memory B cell은 드물지 않지만, IgG를 분비하는 intestinal plasma cell은 흔하다.? Gut IgG plasma cell은 염증성 장 질환에서 장 염증의 주요 원인이다.? 미생물군은 IgA 반응의 특이성을 결정하는 것부터 regulatory B cell의 기능을 주도하는 것까지 장내 B cell 반응의 여러 측면을 형성한다.1. B cell responses in the human gut[ GALT에서 intestinal B cell 반응 부위와 lamina propria에서 발현 부위 ]microbiota에서 유래한 미립자 물질을 포함한 gut lumen의 항원은 follicle-associated epitheliup(FAE)의 M cell에 의해 샘플링 된다. Subepithelial dome(SED)에서의 세포 상호작용은 림프구 활성화와 증식 등을 매게할 수 있는 chemokine 수용체와 integrin을 초래한 샘플링된 항원에 만성적으로 반응하는 부위이다. 반면에, lamina propria는 형질세포와 전구체 및 T cell을 포함하는 장 면역 반응의 발현 부위이다. GALT는 CD20을 발현하는 다양한 B cell subtypes들을 포함하는 반면, lamina propria의 B lineage cell들은 대부분 CD20을 발현하지 않는다.GALT는 장 면역 반응의 유도 부위이다. 1) 항원은 subepithelial dome 위에 있는 특수화된 follicle-associated epithelium 내의 micro fold cell에 의해 능동적으로 샘플링 된다. 2) T cell 의존적 및 독립적 반응은 샘플링된 항원에 의해 구동되는 SED에서 시작된다. 3) T cell 의존적 반응에서 활성화된 B cell은 이후에 germinal centres로 들어간다. 4) 활성화된 cell은 림프관을 통해 혈액으로 배출된다. 5) 활성화 된 세포는 혈액을 통해 전파되고 혈관 내강 내에서 장 부위를 식별하고 유출한다. 6) gut lamina propria에서 effector cell이 되기 위해 말단 분화를 겪는다. 7) B cell 반응의 effector cell인 plasma cell은 능동적으로 IgA antibody를 분비하고 미생물 군집 구성을 조절하는 데 중요한 역할을 한다.[ GALT 내의 B세포 ]항원이 FAE에 의해 흡수되면 항원이 처음 만나는 B 세포 영역은 기억 B세포와 marginal B 세포가 풍부하다. FAE는 기억 B세포, marginal zone B세포, CD4+, CD8+ T세포와 dendritic cell에 의해 침윤된다. 이 면역 세포 침윤은 거의 T세포가 독점하고, 주로 CD8+이다. 항원에 의해 활성화된 B세포는 germinal centre에서 증식한다. 빠르게 분열하는 centroblast는 FAE에서 가장 먼 곳에 위치한다. Centroblast는 덜 증식하는 centrocyte로 성숙한다.Germinal centre 주변M, IgA, IgG를 발현할 수 있다. IgA-expressing memory와 germinal-centre B cell은 GALT에 존재한다. 마우스 data는 활성화된 세포가 germinal centres에 들어가기 전에 IgA class 전환이 발생할 수 있음을 보여준다. 인간 GALT에서는 germinal centres에 들어가서 나중에 전환이 발생한다.2. Sampling lymphoid tissue in the human gut인간의 GALT를 출생 전부터 노년까지 연구한 결과 출생 전에는 GALT가 구성적으로 존재하고 난포가 시간에 따라 점차적으로 감소하기 전에 12~18세까지 빈도가 증가하는 것을 보여주었다. 인간 GALT와 lamina propria에서 인간 B세포를 별도로 샘플링 하는 것은 어렵다.[ 인간 장 관련 림프 조직의 IgG 발현 memory B cell ]- GALT의 memory B cell은 IgD 발현이 부족하다.- GALT의 기억 Bcell은 IgM, IgA, IgG를 발현할 수 있다.- GALT에서 IgG를 발현하는 B cell은 GALT에서 germinal centre 반응에 참여할 수 있고, IgA를 발현하는 B cell처럼 표면 면역 글로불린을 발현한다.- 검은색 : germline sequence / 회색 : intermediate- 빨간색 : Peyer’s patch / 파란색 : 중추 / 노란색 : 결장 난포3. Sites of induction and expression of B cell responses : implications for the study of blood항원이 들어오는 장내 환경은 결장에 있는 일부 여포들을 제외하고 GALT B세포 여포 내에 germinal centre의 ubiquitous 형성을 초래한다. Efferent lymph로 항원이 만나고 빠져나가는 사이에 어떤 지점에서 기억 B세포, 형질 세포 전구체 및 활성화된 T세포는 chemokine 수용체로 각인된다. 림프관에 GALT를 수 있는 틈새를 제공 ]a. 상피는 E-cadherin(ECAD) : 흰색 / B 세포는 CD20 : 파란색 / T 세포는 CD3 : 빨간색 /분열 세포는 Ki67 : 노란색a, b, c. Germinal centre의 경계는 흰색 점선.b, c, d. T follicultar helper cell은 PD1 : 빨간색 / 강조표시 : 빨간색 화살표T 세포 전사인자 FOXP3 : 청록색FOXP3를 발현하는 대부분의 regulatory T cell은 난포 주변의 germinal centre 외부에 존재하고, FOXP3를 발현하는 PD1 cell은 germinal centre 내부에 존재한다는 것을 알 수 있다.B세포와 T세포가 별개의 영역으로 분리되고 B세포 여포에서 형성되는 GALT의 subsequent organization은 점막 및 전신 질환과 관련될 수 있는 T세포의 특정 하위집합의 발달을 초래한다. T세포의 특정 하위 집단은 T follicular helper cell과 T follicular regulatory cell이다.T follicular helper cell과 T follicular regulatory cell은 모두 CXXR5를 발현할 때 germinal centre로 들어가는 경향이 있고, 이는 B cell follicle에 follicular dendritic cell에 의해 생성된 CXCL13에 그것들을 유인하지만, CCR7이 부족하다.T follicular helper cell은 CD40L, PD1, ICOS와 같은 상향 조절된 co-stimulatory 분자를 통해 B 세포 반응에 대한 도움을 제공하고, FOXP3를 발현하는 IL-21, T follicular regulatory cell을 포함한 cytokine의 생성과 관련되어 T follicultar helper cell을 negative하게 조절한다.5. Lymphoid structures in Inflammatory Bowel Disease(IBD)장의 면역 세포 구성은 말초혈액은 건강한 혈액과 비교했을 때, 다른 모든 이소형을 발현하는 CD27-IgD- memory B cell이 고갈된다. 이러한 발견은 CD27-memory B cell이 염증이 있는 점막으로 모이게 하여 혈액에서 개체군을 고갈시킨다는 것을 알 수 있다. CD27-B cell이 주로 T cell 독립적인 방식으로 형성될 수 있으므로 기억 B cell과 T cell 증식을 하는 림프성 응집체는 점막에서 빈도가 증가하는 경향이 있다.궤양성 대장염의 염증 점막에 있는 CD4+T cell은 IFNγ를 포함하여 T helper(TH)17과 TH1 effector cytokine을 생성한다. 관련된 T follicular helper-like 주변 helper T cell의 하위 집합들은 비정상적인 IgG 반응을 유도하기도 한다.6. Repertoire of intestinal plasma cells건강에 있어서 장내 점막을 보호하는 IgA plasma cell 집단은 체내에서 가장 큰 형질 세포 집단이다. 소화관에 있는 대부분의 IgA 항체는 결합(J) 사슬에 의해 함께 고정된 2개의 단량체를 포함하는 이량체이다. IgA에는 IgA1과 IgA2 두 가지가 있다. IgA 이량체는 장세포의 기저측 표면에 있는 고분자 면역 글로불린 수용체(PIgR)에 결합하고 고유층에서 장내강으로 IgA의 수송을 매개한다. 소화관 내강으로 방출될 때 IgA는 PIgR의 단편을 유지하고 분비 IgA(SIgA)가 된다.IgA 형질 세포는 출생 후 첫 날부터 GALT 배아 센터에서 빠르게 생성되며 레퍼토리 에 상당한 다양성을 도입하는 면역글로불린 가변 영역 유전자에 매우 높은 부하의 체세포 돌연변이를 점진적으로 축적한다. 대부분의 인간 장내 IgA는 여러 박테리아 분류군에 의해 발현될 수 있는 에피토프에 특이적이며, 공유 에피토프에 매우 특이적임에도 불구하고 다중 특이성을 나타낸다. 근위부 결장의 형질 세포와 비교하여 원위부 결장의 형질 세포는 더 큰 돌연변이 부하와 클론 확장을 갖고 더 큰한다.

의/약학| 2023.06.16| 6페이지| 5,000원| 조회(104)

혈액학, B세포, B cell, Inflammatory disease, 장내 B..

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(실험동물 기술원 2급 전국1등 자료) 실험동물학 및 실습 요약 및 기출문제 / 실험동물기술원 자격증 기출문제 평가A좋아요

[ 실험동물기술원 시험 정리 ] 실기 : 장기, 동물실험법(방법들), 보정, 경구투여, 복강투여, 부검법 등 1. 실험동물의 해부와 생리- 실습/그림, 폐구조, 위구조, 그림보여주고 랫드마우스 폐 고르기, 부검그림 대사(Metabolism) : 동물은 생명을 유지하기 위하여 외부로부터 산소, 영양분, 수분 등 필요한 물질을 체내로 받아들여 자신에 적합한 물질로 변화시키고, 에너지를 합성하며, 불필요한 이산화탄소나 노폐물을 체외로 배출함. 시간의 흐름에 따라 성장(Growth)곡선은 S자형을 나타냄. 항상성(Homeostasis): 동물이 체외의 환경 변화에 대하여 생체 내부가 일정한 상태를 유지하려는 현상 횡격막(가로막)은 포유류에만 있고 조류는 횡격막(가로막)이 없음 가슴안(흉강) : 심장, 허파(폐), 가슴샘(흉선) 배안(복강) : 위, 창자(장), 간, 이자(췌장), 지라(비장), 콩팥(신장), 부신, 방광, 자궁, 난소 등 * 피부의 기능 1) 체온조절 : 땀샘(한선), 털세움근 2) 분비 및 배설 : 기름샘(피지샘), 땀샘 3) 감각 수용 : 촉각, 통증 4) 피부 호흡 : 개구리, 도롱뇽(30%), 포유류(1%) 피부는 혈압을 조절하지 않는다. 랫드, 고양이, 개 등은 땀샘발달이 미약하다. * 화상 표피만 손상 : 1도 화상 - 재생 O 진피 일부까지 손상 : 2도 화상 - 재생 X 피하지방까지 손상 : 3도 화상 -재생 X * 골격계의 기능 1) 동물의 일정한 형태를 유지 2) 운동의 축 : 근육의 지렛대 3) 장기를 보호 4) 혈구 생산 포유동물의 경추는 7개이다. 적색골수 :어린동물에서 적혈구나 백혈구를 생산 황색골수 :성숙동물에서 나이가 증가함에 따라서 지방세포로 대체 * 앞다리 뼈 (영어, 한글) Humerus 상완골 Radius 요골 Ulna 척골 * 뒷다리 뼈 (영어, 한글) Femur 대퇴골 Tibia 경골 Fibula 비골 * 근육의 기능 1) 동물체를 지탱 2) 사지, 심장 및 소화관 등의 운동 또는 체열의 발생원 3) 동물체의 체교환을 수행 Q. 체순환으로 온 몸을 돌고 심장의 어디로 들어오는가? A. 우심방 Q. 대정맥에서부터 대동맥에 이르기까지의 심장 내 혈액흐름의 방향은? A. 대정맥 - 우심방 - 우심실 - 폐동맥 - 폐 - 폐정맥 - 좌심방 - 좌심실 - 대동맥 혈장(plasma) 성분의 90%는 수분이다. 혈장(plasma)에서 혈장단백질인 fibrinogen을 뺀 것이 혈청(serum)이다. 적혈구에 핵 X : 포유류(성숙한 포유류) 적혈구에 핵 O : 포유류의 태아, 조류, 파충류, 양서류, 어류, 미성숙한 상태의 적혈구 * 적혈구 태아시기 : 간장, 비장, 난황주머니에서도 생성 생후 : 골수에서만 생성(적골수) 노화 적혈구 : 간장, 비장에서 파괴 * 적혈구 수명 개, 사람 : 약 120일 (4달) 토끼 : 50-70일 (2달) 랫드 : 50-60일 마우스 : 30일 (1달) * 혈액순환의 기능 1) 체온 조절 2) 영양 성분 전달 3) 산소, 이산화탄소 같은 가스 운반 4) 외부 병원체로부터 방어 5) 혈당 분해를 위한 인슐린 분비 (X) 백혈구의 종류(5가지)로는 호중백혈구, 호염기백혈구, 호산백혈구, 단핵구, 림프구 백혈구 수는 전염병이나 백혈병에서 증가 * 혈소판 혈전세포(thrombocyte)는 조류, 파충류, 어류에서는 핵이 존재한다. * 비장의 기능 1) 림프구 생성 2) 노화 적혈구 파괴 3) 미생물 등 이물의 여과와 파괴 4) 혈액을 저장하여 체내를 순환하는 혈액량의 조절 작용 가슴선은 3-6주령 이후 지방조직으로 퇴화한다. * 콩팥의 기능 1) 혈중의 불용산물 및 유해물 제거 2) 혈액의 삼투압 조절 3) 세포외액량 조절 4) 혈액의 pH 조절 5) 혈장 조성의 조절 콩팥은 배안(복강)의 등쪽에 좌우 한 쌍 존재 콩팥은 오른쪽이 왼쪽보다 약간 앞쪽 또는 위쪽. 혈액 저장 및 적혈구를 파괴하는 것은 콩팥이 아니라 비장의 기능이다. 요관 : 콩팥(신장)에서 방관 사이의 관 방광 : 오줌을 일시적으로 저장 요도 : 방광의 오줌을 체외로 배출 * 순서 : 요성 지방산, 산화나 부패 잘 발생 녹는 점 낮아 상온에서 액체 상태 혈액 내 콜레스테롤 낮춤, 심장병 예방 효과 * 필수 지방산 : 동물 체내에서 합성되지 않으므로 사료로부터 반드시 공급되어야 하는 지방산 EX. linoleic acid, linolenic acid, arachidonic acid 모두 불포화 지방산이다. * 탄수화물 C H O 1) 단당류 : 포도당, 과당, 만나당 2) 이당류 : 맥아당 (포도당 + 포도당) 설탕 (포도당 + 과당) 젖당 (포도당 + galactose) 3) 다당류 : 녹말, 전분 - 포도당의 α 결합 (식물) 글리코겐 - 포도당의 α 결합 (근육, 간조직 내) 섬유소(cellulose) - 포도당의 β 결합 단당류의 형태만 소장에서 흡수 가능하다. * 탄수화물의 기능 - 에 지 뇌 체 체 가 C H O 1) 에 너지 주요 공급원(4Kcal/g) 2) 지 방 및 단백질의 합성 원료 3) 뇌 와 신경 조직의 구성 성분 (뇌와 신경의 유일한 에너지원) 4) 체 내에서 칼슘 흡수 촉진 5) 체 내에서 전분 소화에 의해 maltose로전환 6) 가 열하면 고온에서 흑갈색으로 변성되어 고형사료를 고압멸균하면 강한 냄새 + 갈색 * 비타민의 기능 1) 지용성 비타민 (A,D,E,K) A : 시각색소 생성유도 D : 결핍시 구루병 E : tocopherol : 활성산소 중화하는 항산화물질 K : 혈액 응고 조절 2) 수용성 비타민 (B,C) C는 대부분의 동물에서 체내 합성되지만, 유인원(사람)과 기니픽은 반드시 사료를 통해 급여필요 토끼, 설치류는 식분증이 있어 분의 일부를 섭취하여 비타민 B군 섭취 가능 비타민 종류 체내 주요기능 결핍증 비타민 B1 에너지 대사 각기병 비타민 B2 조효소 구성 눈병 비타민 C 콜라겐 합성 괴혈병, 근육쇠약 * 광물질의 기능 - 골 연 효 체 체 에 생 1) 골 격의 주 성분 : Ca, P 2) 연 조직의 구성 성분 3) 효 소의 구성 성분 4) 체 액의 구성 성분 5) 체 액의 산, 염기 평형 상태 을 통해 흡수 가능한 영양소? A.아미노산, trypsin, glucose, galactose, fructose 펩시노겐은 위산에 의해 펩신으로활성화된다(O) 3. 실험동물의 복지와 윤리 각 Chepter 당 약 1문제 총 7-8문제 출제예정 Chepter1. 동물실험의 역사 1) Hippocrates (그리스) - 서양의학의 선구자 : 동물을 해부하여 생식이나 유전 지식 전개 : 의학, 생물학의 기초 2) Aristoteles (그리스) : 동물을 해부하여 동물별로 내부장기가 틀리다. : 비교해부학, 발생학 연구 3) Galen (그리스) - 의사 : 돼지와 원숭이를 해부 : “실험에 의한 것만이 과학을 발전시킨다”라고 실험과학 원칙을 주장 4) William Harvey (영국) - 생리학자 : 돼지의 혈액과 심장의 움직임에 대한 업적 : 심장박동으로 혈액순환 주장 5) Magendie와 Bernard (프랑스) - 생리학자 : 근대적인 동물실험이 시작 6) Louis Pasteur (프랑스) : 동물실험을 발전시키는 기초가 됨 Society for the Prevention of Cruelty to Animals (SPCA) 는 영국에서 시작. : 동물 애호 시초 19C말-20C초 마우스의 실험동물화 본격화 2차 세계대전 후 본격적 실험동물학 기본 마련. * 실험동물과 관련된 학회나 모임들 1) AALAS : American Association for Laboratory Animal Science Animal Care Panel (ACP) 로 시작 1967년 ACP 는 AALAS로 바뀌었고 최근 학회지명이 Comparative Medicine로 바귐 한국실험동물학회 (KALAS, 1985) 실험동물기술원 (KALAT, www.kalat.or.kr , 2000) 한국실험동물수의사회 (KCLAM, 2006) Korean College of Laboratory Animal Medicine 미국실험동물전문의 (ACLAM, 1957) Chepter2. 동물실험의EU 내용 - 실험동물범위 - 사육 및 번식환경 또는 실험과정에서 고통, 스 트레스를 최소화하도록 조치 - 영장류 사용제한 - 치사를 종료시점으로 하는 실험 지양, 수 및 고통 최소화 - 신경근 차단 약물은 마취, 진정과정 없이 사용 안됨 - 실험동물 장기, 조직을 최대한 공유 - 불필요한 중복 동물실험 지양 * 미국 Animal Welfare Act 최초 제정된 법령 : 3R 원칙 준수 구분 농림축산식품부 식품의약품안전처 (보건복지부) 법률명 동물보호법 실험동물에 관한 법률 목적 모든 동물이 대상 (반려동물, 농장동물, 실험동물) 실험동물 및 동물실험의 적절한 관리. 실험동물이 대상 책무 실험동물의 생산사용, 관리, 공급자 등록 실험원칙 3R준수, 동물실험계획서사전승인 위원회 동물실험윤리위원회 구성 : 3-15인 수의사, 민간단체추천자 실험동물운영위원회 구성 : 4-15인 수의사, 동물실험분야박사, 비영리민간단체추천자 Chepter5. 동물실험관련법안(국내) 실험동물에 관한 법률은 관리와 등록을 중요시. * 동물실험의 기본원칙 - 5 freedom 1) 동물이 본래의 습성과 신체의 원형을 유지하면서 정상적으로 살 수 있도록 할 것 2) 동물이 갈증 및 굶주림을 겪거나 영양이 결핍되지 아니하도록 할 것 3) 동물이 정상적인 행동을 표현할 수 있고 불편함을 겪지 아니하도록 할 것 4) 동물이 고통, 상해 및 질병으로부터 자유롭도록 할 것 5) 동물이 공포와 스트레스를 받지 아니하도록 할 것 Q. 5 freedom에 속하지 않는 것은 ? Chepter6. IACUC와 동물실험계획서 * 동물실험윤리위원회 IACUC Institutional Animal Care and Use Committee 농림부 동물보호법 - 동물실험윤리위원회 보건복지부 실험동물에 관한 법률 - 실험동물운영위원회 * IACUC의 기능 1) 실험동물시설의 실사 2) 신청된 연구, 시험, 교육용 동물실험계획의 검토 및 심의 3) 기관 행정 책임자에게 동물실험에 관한 보고서 제출 4) 동물관리와 사용

학교| 2023.03.09| 33페이지| 40,000원| 조회(7,144)

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