표면 오염도 검사 - 일반세균수실험일: 2023. 3. 10. 금학번: -이름: -제출일: 2023. 3. 15. 수실험조: 2조1. 실험원리표면 오염도 검사는 100cm{} ^{2}의 면적이 필요하며 도마, 작업대, 앞치마, 위생복 등 면적에 대한 검사 시 사용한다. 일반세균은 표준한천배지를 사용해 35~37°C에서 24±2시간 배양했을 때 배지에 집락을 형성하는 모든 세균을 총칭하며 식품 및 의약품의 제조·가공·운반·저장 등의 과정이 식품 공전 기준에 맞게 위생적이었는지를 판단할 수 있는 지표로서 사용한다. 일반세균수 측정에는 표준평판배지를 사용하는데 이는 특정 세균의 배양을 위해 특정한 영양소로 만들어진 배지가 아닌 모든 세균에게서 요구되는 영양소를 넣어 여러 세균의 성장이 가능하도록 만든 배지이다. 그래서 일반세균수 측정 외 다른 여러 세균의 확인 시험 시에도 사용한다.-> 검사하고자 하는 고체의 표면을 Pipette swap을 이용하여 일반세균을 채취한다. 그 다음에 이를 세균이 살 수 있는 환경을 제공해주는 배지에 분주하여 배양기에 넣은 뒤 얼마나 많은 세균이 있는지 확인하여 위생적인지 아닌지에 대한 여부를 파악하는 것이다.2. 실험재료Plate Count Agar(PCA), 70% 에탄올, 시료채취틀, Petri dish, Pipette swap* Pipette, Pipette tip은 Pipette swap으로 1ml 분주가 가능하여 따로 사용하지 않음* 알코올램프를 사용하여 화염멸균을 해야 하지만 안전상의 이유로 생략함3. 실험방법(1) 배지 제조 : 200ml 제조1. PCA배지통 옆에 있는 제조방법에서 1L 당 몇 g이 필요한지 확인 후 이를 200ml로 계산한다.2. 메스실린더를 이용해 삼각플라스크에 증류수 200ml를 넣는다.3. 전자저울 위에 weighing dish를 올리고 영점을 맞춘다.4. 4.7g만큼 시약스푼을 이용해 Weighing Dish에 담아 잰다.5. 배지가 담긴 Weighing Dish의 모서리를 오므려 삼각플라스크에 넣는다.6. 삼각플라스크의 입구를 호일로 잘 감싸 덮어준 뒤 조심스래 튀지 않게 돌려 흔들어 섞는다.7. 터짐을 방지하기 위해 호일을 약간 열어 Autoclave에 넣는다.8. 121°C에서 15분간 멸균한다.9. 멸균이 된 배지는 약 40~50°C까지 식힌 후 사용한다.(2) 표면틀을 이용한 시료 채취 (배지를 멸균 시키는 동안 진행함)1. 손과 채취틀을 70% 에탄올로 소독한다.2. 원하는 고체 표면에 채취틀을 올린다.3. Pipette swap을 이용해 채취틀 내의 100cm{} ^{2}의 면적을 고르게 잘 swap하여 채취한다. (스왑봉을 돌려가며 골고루 채취할 것)(3) 접종1. 손과 테이블을 70% 에탄올로 소독한다.2. 멸균된 배지를 45~50°C 정도로 냉각 시킨다.* 시간관계 상 배지를 찬물에 담가 식힘3. Petri dish의 뒷면에 라벨링을 한다. (날짜, 시료명, 실험자 이름, #1 또는 #2)4. Petri dish의 뚜껑을 조금 열어 시험용액 1ml를 분주하고 Petri dish의 반 정도가 되게 배지를 붓는다. (기포가 생기지 않도록 주의)5. 뚜껑을 닫은 후 8자로 조심스럽게 섞어 굳을 때까지 실온에 방치한다.6. 완전히 굳은 후 Petri dish를 뒤집어 배양기에 넣어 배양한다.* 뚜껑에 응축수가 생성되는 것을 방지하고자 뒤집음4. 실험결과식 : 검출된 균수 (Colony) X 10 (10ml pipette swab) X 10^ 희석배수 / 100cm{} ^{2}(면적) = ------CFU/cm{} ^{2}계산- #1 월요일 확인 : 1X10^1/100cm{} ^{2}= 0.1CFU- #2 토요일 확인 : 0X10^1/100cm{} ^{2}= 0CFU평균은 0.05 즉, 0.005X10CFU/cm{} ^{2}5. 고찰검사결과를 보면 많지 않은 세균이 나왔다. 핸드폰은 변기보다 더럽다고 하는데 생각보다 적게 나와 놀랐다. 나의 핸드폰이 깨끗했을 수도 있지만 실험이 잘 못 되었을 수도 있다고 생각한다. 그 이유로 세 가지 생각해보았다.
