조직학 1. 현미경의 종류 및 특징 광학현미경 빛을 광원으로 활용하거나 측정하는 현미경을 의미하는 것, 광학현미경의 분해능은 대물렌즈가 근접한 두 개의 점을 각각의 점으로 인식할 수 있는 최소한의 거리로, 렌즈와 슬라이드가 가까우면 가까울수록 분해능이 좋아진다. 투과전자현미경(TEM) 전자빔으로 표본을 투과시켜 내부 구조를 관찰하는 방식. 투과전자현미경은 광학 현미경보다 좋은 해상도로 영상을 촬영해서 분해 가능한 물체보다 훨씬 작은 세부적인 것까지 관찰이 가능하다. 주사전자현미경(SEM) 주사전자현미경은 진공상태에 전자빔을 쏘아 반사된 전자를 관측하는 장비, 10nm의 아주 좁은 전자선이 방출되며, 각 지점에서 표본의 원자에 부딪히면서 반사 전자, X-선 및 낮은 에너지의 이차전자를 생성한다. 암시야현미경 투명 샘플을 관찰하는 데 자주 사용되며 어두운 배경에서 밝게 조명된 시료만 볼 수 있는 장치이다. 물체의 표면적 특성만을 볼 수 있기에 미세한 구조는 구별할 수 없다. 위상차현미경 무색의 투명한 시료의 내부 구조를 뚜렷하게 관찰이 가능한 현미경으로 표본을 염색하지 않고 살아있는 채로 볼 수 있다. 또, 물체의 명암이나 빛깔의 다름을 이용하여 관찰한다. 편광현미경 여러 가지 물질이 혼합된 상태의 시료에 빛의 진동하는 방향이 다른 점을 이용하는 방식으로 편광자를 대물렌즈와 접안렌즈 사이에 검광자를 높고 편광에 의해 관찰하는 현미경이다. 공초점현미경 광원으로 사용하는 레이저와 검출기로 사용되는 카메라가 동시에 바라보는 한 점이 존재한다. 초점이 맞는 곳에 레이저를 쐬서 빛을 발생시켜 관찰한다. 형광현미경 염색된 세포의 형광물질이 파장이 짧은 자외선을 흡수하여 빛을 방출함으로써 이미지를 볼 수 있는 장치이다. 또, 높은 광원을 부착했을 때 차단필터를 통해 보통 현미경보다 2배 선명도가 좋은 상을 볼 수 있다. 2. 각 기관의 현미경적 구조 간(Liver) - 간은 육각형 모양의 고전적 소엽을 가지고 있는데, 고전적 소엽의 중심에는 중심정맥이 위치하고 있어서 간을 통산소와 이산화탄소의 확산이 용이함. 신장(Kidney) - 신장의 단면은 겉질과 속질로 구분하는데, 겉질에 콩팥소체, 곱슬세관, 세로줄무늬의 속질부챗살이 있음. - 콩팥소체는 토리와 토리주머니로 구성되어 있다. -토리쪽곱슬세관의 세포질에는 긴 미토콘드리아가 많으며 단층입방상피, 단층원주상피로 구성됨. 갑상샘(Thyroid) - 갑상샘은 치밀결합조직으로 섬유피막이 둘러싸여 있음. - 갑상샘의 소포는 단층입방형의 소포상피로 구성되며 T 갑상샘세포로 이루어져 있음. - 이 세포는 뚜렷한 핵소체와 바닥막에 있는 원형의 핵을 가짐. - 세포질에는 긴 미토콘드리아, 과립세포질내그물, 다수의 자유리보솜, 소수의 용해소체 등의 세포소기관들이 발달되어있음. 피부(Skin) - 피부는 박리층, 각질층, 투명층, 과립층, 가시층, 바닥층으로 뚜렷이 구별됨. - 표피는 각질중층편평상피로 구성되며 바닥층은 진피와 표피가 맞닿아 있는 부위로 낮은 원주세포 또는 입방세포로 구성되어 있음. 기관지(Bronchi) - 기관지 및 세기관지는 상피층에 거짓중층섬모원주상피로 덮여 있으며, 점액을 분비하는점액과 섬모운동을 통해 이물질을 제거하며 세기관지 말단에서는 상피가 단층입방상피로 변화함. 방광(Urinary Bladder) - 방광은 이행상피로 덮여 있으며, 치밀불규칙결합조직 고유판으로 민무늬근육세포와 점막고유판으로 구성됨. - 방광점막은 수많은 주름을 가지고 있으며, 방광의 고유판은 섬유성 결합조직이 밀집된 상태이며 탄력섬유들과 림프조직이 있음. 자궁(Uterus) - 자궁에서 자궁목은 자궁의 아래쪽에 위치하며, 내부에는 점액을 분비하는 단층원주상피 그리고 바깥면에는 중층편평상피로 덮여있음. - 단층원주상피는 섬모세포와 분비세포들이 있음. 3. 상피조직(Epithelial tissue) - 상피조직은 우리 몸의 기간과 체강의 표면을 덮고 있어서 세포의 1차적 부위 를 구성하거나, 샘선을 형성한다. - 보호, 흡수, 분비 기능을 담당하는 특수한 조직이다. 1) 단층상피 ① 단층편평상피 : 편피 : 키가 큰 원주상 세포가 한층 : 담낭도관, 소화관 점막 소화관 : 위 ~ 직장 ... ④ 단층섬모원주상피 : 단층원주상피가 섬모를 가지는 것 ? 세기관지 상피, 자궁과 난관의 상피 자궁, 난관, 기관지, 코점막, 부비동, 척수의 중심관 ⑤ 위중층원주상피 : 비교적 큰 기관의 도관에서 관찰 ? 비강점막상피, 이관상피 2) 중층상피 ⑥ 비각질중층편평상피 : 구강, 식도, 결막, 각막, 질 ⑦ 각질중층편평상피 : 표피, 경구개, 잇몸 건조한 바깥면 ? 각질화된 가장 상층, 케라틴이 많고, 핵이 없다. 젖은 안쪽면 ? 비각질화된 내면세포, 케라틴이 적고, 핵이 많다. ⑧ 중층입방상피 : 성장중의 난포상피, 땀샘의 분비관 ⑨ 중층원주상피 : 표층은 원주, 심층은 입방 ? 큰 기관의 분비샘, 요도의 일부, 연구 개의 상면 ⑩ 거짓중층원주상피 : 남성요도 ⑪ 이행상피 : 요도에서 관찰되는 상피로 기능에 따라 상피의 모양이 바뀐다. - 신우, 방광, 요관, 콩팥깔대기, 요도 3) 외분비샘 샘은 내분비샘과 외분비샘 두가지로 구별되는데, 내분비샘은 샘세포의 분비물이 모세 혈관으로 분비되어서 혈관을 통해 운송되는 것이며 외분비샘은 분비물이 도관을 통해 직접 배출되는 역할을 한다. 세포의 전체로 분비되는 것은 전분비, 세포의 부분으로 분비되는 것은 부분분비, 그 리고 외포작용으로 분비되는 것은 샘분비라고 한다. 4. 결합조직(Connective tissue) - 조직과 조직 연결, 기관과 기관사이의 빈 공간을 채워 기관의 형태 유지 & 지지 - 결합조직은 동물체를 구성하는 4가지 기본조직의 하나로 세포성분과 세포바깥바탕질 로 이루어진다. 1) 세포성분 ? 고정세포 : 섬유모세포, 지방세포, 큰포식세포, 비만세포 → 정상적으로 결합조직 내에서 발달하고 남아 상주하는 세포. ? 이주세포 : 호중구, 림프구, 호산구, 호염기구, 단핵구, 형질세포 등. → 혈류(말초혈액)에 순환, 면역 반응 부위의 결합조직으로 이동하는 백혈구 2) 결합조직 섬유 ? 아교섬유 ? 아교질로 구성, 섬- 그물은 기관의 룰을 형성, 지지하는 역할 3) 결합조직 분류 ? 고유결합조직은 세포, 무형질, 섬유성분으로 구성된 조직으로 성긴결합조직, 치밀결합조직, 그물조직, 지방조직으로 구분한 다. ? 성긴결합조직은 세포성분이 많고, 섬유성분이 적은 조직이며 치밀결합조직은 세 포성분이 적고, 섬유성분이 많은 조직으로 주로 인대, 힘줄 등이 있다. 5. 근육조직(Muscular tissue) → 근육은 근막이라는 결합조직의 막으로 싸여 있으며, 수축의 효과를 높이기 위해 긴 원기둥 모양의 구조로 특수하게 분화된 근 섬유들이 모여 다발로 형 성한다. → 근원섬유는 두종류의 수축단백질인 액틴과 마이오신의 미끌어짐 운동에 의해 수축운동이 일어난다. 1) 뼈대근육(골격근, skeletal muscle) : 뼈보단 조직 및 다른 뼈대근육에 붙어서 작용. ① 가로무늬근육(횡문근) : 수축단백질이 규칙적으로 배열(수축·이완) ② 맘대로근육(수의근) : 운동신경 ③ 운동신경 지배 2) 심장근육(심근, cardiac muscle) ① 가로무늬근육(횡문근) : 수축단백질이 규칙적으로 배열(수축·이완) ② 자동능 : 스스로 주기적으로 수축, 이완하는 특성을 가짐. ③ 자율신경 교감신경, 부교감신경에 의해 3) 민무늬근육(평활근, smooth muscle) ① 혈관과 내장의 관장 장기 벽을 만들고, 수축단백질이 있지만 가로무늬가 보이지 않음 ② 제대로근육(불수의근)은 의지와 관계없이 수축 6. 신경조직(Nervous Tissue) 세포체 신경세포의 중앙부분으로, 핵은 퍼진염색질을, 핵소체는 뚜렷하게 관찰된다. 세포체 내에는 신경원섬유와 니슬소체가 존재하며 활발한 단백질 합성을 하는데 도움을 준다. 수상돌기 수상돌기는 외부로부터 오는 신호를 수용하고 처리하는데 도움을 주며, 가느다란 가지 형태로 뻗어나 여러 방향으로 확장되어 다양한 자극들을 수용한다. 이때 연령이 증가하거나 어떤 상황을 가질 때 가지돌기의 수가 감소할 수 있다. 축삭 축삭은 전기적 신호를 빠르게 전달하는데 도움을 주며, 일반, 이를 뇌혈관장벽이라한다. 뇌혈관 속의 여러 가지 물질이 뇌조직 쪽으로 들어가지 못하도록 한다. 희소돌기아교세포 희소돌기아교세포는 중추신경계통의 말이집 형성에 관여한다. 이것은 축삭을 통해 전달되는 신경충동의 전도속도를 증가시킨다. 미세아교세포 미세아교세포는 신경아교세포 중 가장 작은 것으로 중배엽에서 발생한다. 외상이나 허혈로 인해 질병이 발생할 경우 미세아교세포 수가 증가한다. 그리고, 포식작용을 하며 물질 운반과 파괴, 제거 및 병적 대사물 청소 등의 기능을 한다. 뇌실막세포 뇌실막세포는 뇌의 뇌실과 척수의 중심관을 덮고 있는 세포들로 뇌척수액과 직접 접촉을 이룬다. 뇌실막세포는 미세융모와 섬모를 가지고 있어서 이 섬모운동을 통해 뇌척수액의 순환과 흡수를 돕는데 중요한 역할을 하기도 한다. 7. 기관별 조직학적 특징 위 위벽 ? 안쪽부터 점막, 점막하층, 근육층, 장막 점막 : 많은 주름이 있고, 위액을 분비하는 위샘을 구성. 점막하층 : 혈관, 림프관 근육층 : 속빗근육, 중간돌림근육, 바깥세로근육3층 장막 : 작은굽이에서는 작은그물막, 큰굽이에서는 큰 그물막 위샘에서 으뜸세포(펩시노겐, 리파아제 분비), 벽세포(염산분비), 덧세포(점액 분비)가 존재한다. 작은창자 작은창자는 샘창자(십이지장), 빈창자(공장) 및 회장으로 나뉜다. 상피세포 표면에는 창자융모, 미세융모가 있으며 이는 흡수면적을 증가시킨다. 빈창자에는 점막의 표면에 장융모가 형성되어 있으며, 흡수면적을 늘리기 위해 가장 특징적인 돌림주름이 있다. 간 간은 간동맥, 간문맥, 담관 등의 결합조직에 의해 싸여 나타나는 구조이다. 담즙은 담낭과 소장의 세뇨관으로 담관을 통해 운반한다. 담관에는 상피 세포가 내장되어 있어 지방의 소화와 흡수에 중요한 역할을 한다. 허파 가스가 교환되는 허파는 그물섬유와 탄력섬유에 의해 지지되며, 기관, 기관지, 세기관지를 거쳐서 폐포까지 이동하게 된다. 기관, 기관지는 거짓중층섬모원주상피와 술잔세포(점액을 분비해 이물질 제거)가 발견되고, 이후에 세기관지과정에서
미생물학 과제 1. 미생물 배지 1) 배지(BAP, MAC, Chocolate) 액체 배지 ? 배지 내에 agar 성분이 들어있지 않고 혼탁이나 침전 형태로 생장이 확인된다. 고체 배지 ? agar 성분이 1.3~1.5% 함유된 배지이다. 주로 4종류의 배지가 있다. 평판배지 (페트리접시) 사면배지 고층배지 반사면배지 감별배지 ? MAC ① BAP BAP 배지는 용혈을 구별하는 배지로 그람양성균과 그람음성균이 자란다. α-용혈은 불완전 용혈, 녹색 용혈대 β-용혈은 완전 용혈, 투명 용혈대 그리고 γ-용혈은 비용혈, 용혈대를 생성하지 않는다. +) 주로 미생물 검사할 때 C.albicans가 많이 관찰됨. (가시 형성, 혈청 이용) ② MAC MAC 배지의 성분은 Lactose, Neutral red, Bile salt, 펩틴, Crystal violet이 구성되어 있다. Neutral red와 Bile salt는 그람양성 세균의 성장을 억제하며 그람음성균의 선택배지이다. Lactose 분해균은 E.coli 등으로 pink colony가 관찰되고 Lactose 비분해 균은 Salmonella spp. 등으로 colorless colony가 관찰된다. MAC 배지에서 자라는 비병원성 그람음성균은 Enterobacter, E.coli, Klebsiella, Citrobacter가 있다. ③ Chocolate 배지 Chocolate 배지는 혈액 한천 배지에서 자라지 않는 특수영양요구도가 높은 병원성균을 배양한다. 이 배지는 80℃로 15분 가열하며 50℃ 정도가 될 때까지 식히며 특징적으로 X 인자, V인 자가 있다. 주요 병원성균은 Haemophilus, Neisseria 가 있다 BAP MAC 2) Gram stain crystal → iodine → acetone alcoho(탈색제) → safranin O(대조염색) D.W D.W D.W +) - 그람양성은 세포벽이 두꺼우기에 crystal violet, 보라색으로 염색된다. ex) Staphylococcus, 효모, 곰팡이 등이 잘 자라는 특성을 가지고 있으며 호기성 미생물 배양 배지이다. 미생물의 산소 요구성을 관찰하는 데 유용하다. (절대 혐기성, 미 혐기성, 통성호기성) 2. 미생물 배양 1) 소변배양(urine culture) 이 검사는 주로 요로감염, 사구체신염 등 여러 종의 검사를 진단 내리기 위해 검사를 한다. 배양은 37℃에서 24시간 뒤엔 중간보고를 내리고, 48시간까지 최종보고를 내리며 진행된다. 48시간 동안 특정 형태의 집락들을 관찰하고 어떤 종류의 균이 자라나는지 파악한다. ? 소변도말법 ① 백금이를 불꽃에 완전히 소독한 뒤 식을 때까지 기다린다. ② 그동안 환자 검체와 바코드 이름이 일치한 지 확인한다. ③ 소변이 가라앉을 수도 있으니 mixing을 해주고 백금이 귀에 소량의 소변을 묻혀서 접종한다. ④ 이때 소변 샘플을 백금이를 사용하여 BAP, MAC 순으로 도말하며, BAP, MAC 배지의 중간에 점을 찍고 일자로 그은 다음 균일하게 도말한다. ⑤ 사이사이에 백금이 멸균을 해주며, 다 되었으면 뚜껑을 덮고 바코드를 붙인다. ? 증식 정도(CFU/ml) 1개 → 10^3 3개 → 3×10^3 25개 → 10^5 2) 혈액배양(blood culture) 이 검사는 패혈증 또는 균혈증 등 원인균을 진단하기 위해 blood에서 세균과 진균을 배양하는 검사이다. ? 합성수지(레진) 배양 병에 사용되는 합성수지(레진)는 내구성이 뛰어나며 유리병보다 가벼워서 실험실에서 자주 사용한다. 미생물의 산소 유무 환경에 따라 호기성일 땐 산소가 잘 자라도록 돕고, 혐기성일 땐 무산소 환경을 제공하며 효율적인 배양을 돕는 중요한 역할을 해 혈액 내 감염을 빠르게 진단할 수 있게 된다. ? SPS(Sodium PolyanetholSulfonate) 혈액배양 병에서 사용되는 SPS 항응고제는 혈액 응고를 방지하며 미생물의 생존율을 높이는 중요한 역할을 한다. SPS의 농도가 미생물의 성장이 방해되지 않도록 너무 높거나 낮지 않게 유지하며 적정량이 첨가된다. 에 나온 것으로 간주된다. ? 증식 정도 Slight Moderate Heavy M S H 4) 대변배양(stool culture) 이 검사는 장관 감염증이나 영양 흡수 장애를 진단하는 검사이다. 중성지방이나 지방산의 분석은 대변에서 지방의 양이나 형태를 측정하면, 지방의 소화 및 흡수에 문제가 있는지를 확인함으로써 진단하는 데 중요한 역할을 한다. 주로 Salmonella, Shigella, E. coli, Y. enterocolitica 등의 병원성균을 관찰할 수 있다. 그리고 세균의 lactose 분해능을 관찰할 수 있는 배지는 선택성이 낮은 MacConkey, EMB, Endo 이 있으며 선택성이 높은 DCA가 있다. ? 분변잠혈검사 분변잠혈검사는 대변에 숨어있는 미세한 혈액 성분을 검출하는 검사이다. 이 검사는 조기에 출혈이 발생해서 추가적인 검사를 통해 주로 대장암, 위장관 출혈 등 진단을 내리는 중요한 검사이다. ? 지방의 염색 중성지방(Triglycerides) - Sudan III (빨) 지방산(Fatty acids) - Sudan III (빨) + Acetic acid +가열 3. 결핵 검사(Mycobacterium tuberculosis, TB) 결핵은 공기감염인 전염성 질환으로, 대부분 폐결핵이 발생하는 경우가 많다. 폐 감염 시 심한 기침, 고열, 객혈 등으로 객담은 누렇고 끈적이는 점액성이 관찰된다. 폐 결핵균을 검사하기 위해서는 침이 아닌 객담으로 검체를 배양해야 정확한 결과를 얻을 수 있으며 아침 첫 객담으로 5mL 정도 채취한다. 최종보고까지 37℃에서 4~8주 정도 걸쳐 진단을 내린다. 1) 형광염색법 형광염색법은 결핵균을 형광현미경으로 관찰해 쉽게 관찰할 수 있다. 주염색시약은 Auramine O와 Rhodamine이다. 이 시약 때문에 형광현미경에서 주황색 또는 형광 노란색으로 관찰된다. ? 주염색 : Auramine O와 Rhodamine 용액을 사용하여 염색하며 15~20분 소요 ? 탈 색 : HCI-alcohol 용액을제공할 수 있어 빠른 치료가 가능해졌다. 방법: ① BAP, MAC 배지에 백금이를 이용해 여러 형태를 그리면서 표면 전체로 획선을 그으며 집락이 형성할 수 있게 하루 뒤에 관찰한다. → 배지는 총 2일에 걸쳐 최종보고를 한다. ② 번호에 맞게 MALDI plate 위에 이쑤시개로 균을 따서 접종한다. ③ 그 위에 IVD matrix material라고 불리는 작은 분자량의 유기화합물과 섞는다. 1μL을 떨어뜨려 동정한다. → MALDI plate는 샘플이 적용될 수 있도록 작은 홈이 배열되어 있다. 이 홈에 샘플과 매트릭스 물질을 혼합하여 적용되며, 강한 레이저를 사용해 이온화 과정이 진행된다. 2) 항균제 감수성 검사 항균제 감수성 검사는 미생물이 주어진 항균제에 대해 어떤 반응을 보이는지 확인하는 검사로, 이를 통해 미생물의 내성을 평가하고, 최적의 항균제를 선택하여 치료의 효과를 높일 수 있다. 현재 MIC, 최소농도억제법을 가장 많이 사용하고 있으며, 미생물이 특정 항균제에 대해 성장 억제를 나타내는 측정법이다. 그리고 BD Phoenix 자동화 시스템을 사용하는데 이 기기는 미생물을 접종한 후 자동으로 MIC 값을 측정하고 결과를 보고하며, 정확하고 신속하게 결과를 제공하는 강력한 진단 시스템이다. 방법: ① 단일 균의 순수집락을 요구하며, 균 농도를 표준화하며 검체를 준비한다. ② 식염수와 균을 혼합시킨 후 교반기를 이용하여 완전히 mixing 해준다. ③ BD Phoenix의 장비를 이용해 탁도 0.25를 맞춘 뒤 감수성 시험을 진행한다 ④ GNB, GPB 키트에 탁도를 맞춘 AST 시약(파란색 시약)을 각각 넣는다. ⑤ 마지막으로 비색법 등을 알아내는 방법으로 물질의 농도를 측정하기 위해 BD Phoenix M50 장비를 사용한다. → 주로 ESBL, MRSA, VRE, CRE 등 내성균에 대해 검사를 한다. 결과: 균이 밝혀졌을 때 검출된 균에 맞는 적절한 항균제를 적용하기 위해 항균제 감수성 테스트를 진행한다. 결과를 보고 의사는 환자에게 있고, 혈액 배양기 내에선 상하 운동은 일정한 흔들림을 제공하여 혈액이 균일하게 혼합되고 응고되지 않도록 유지한다. 때문에, 미생물의 성장이 촉진되고 미생물 배양과 감염 진단을 빠르고 정확하게 진행될 수 있도록 돕는다. NS-prime NS-prime기기는 분별 잠혈 검사를 할 때 사용하는 기기로, 검체 분별에서부터 측정에 이르기까지 금 클로이드 응집 반응 즉 라텍스 응집 반응을 포함하고 있다. 세균 농도나 균의 성장 정도를 확인하여 감염의 정도를 파악하고, 적절한 치료 방법을 결정할 수 있다. Reach In CO₂ incubator 세포 배양 및 미생물 배양에 최적화된 기기로, 정밀한 환경 제어 기능을 제공하여 연구와 실험에서 신뢰할 수 있는 결과를 도출하는 데 필수적인 기기이다. - 35℃, CO₂ : 5~10% - 42℃, 48시간 ex) C.jejuni(팩을 넣어 보관) 건열멸균기 170℃, 2시간 정도 멸균을 하며 고온의 건조한 열을 이용하여 미생물을 사멸시키는 멸균 기기로, 습기에 민감한 물질을 멸균하는 데 매우 유용하다. 내부 공기 순환 시스템이 있어 열이 고르게 분포되도록 돕는다. 고압증기 멸균기 121°C에서 15psi, 15분 동안 멸균하며 멸균이 완료된 후에는 증기를 배출하고, 장비 내부의 온도를 차가운 상태로 낮추어 멸균된 것을 꺼낸다. - 화학 indicate : 테이프를 넣어서 검은 줄 3개가 생긴다. / 3~4시간 - 생물학 indicate : 균이 자라는지, 안 자라는지 관찰하며 안 자라면 멸균이 되었다는 뜻이다. / G.stearothermophilus AT-2000Z 이 기기는 슬라이드에 객담을 도말 및 고착한 후 염색기의 회전판에 올려놓으면 그 위치에서 항산성 균 염색이 자동으로 이루어지도록 하여 색깔 및 형태로서 항산성 균을 진단한다. 각종 균을 색깔로 분류 및 동정하기 위해 염색할 목적으로 사용하는 기기이다. PREVI COLOR GRAM 그람 염색을 통한 세균의 분류와 판독을 자동화하여, 빠르고 정확한 결과를 제공하는
중요한 부분을 표시해둔 정리본이라 보시기 편한 자료입니다. 현미경부터 조직 종류 및 특징 현미경적 구조로 세세하게 정리되어있으니 많이 퍼가시기 바랍니다
