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유전학, 생명공학, 세포배양 리포트 (유전자 클로닝과 DNA 분석)

실험보고서Experiment Report교과목명유전학실험제목세포의 배양제출월일담당교수제출자성명:학과:학년:학번:Ⅰ. 실험목적대장균(E. coli)과 플라스미드의 기본 개념을 이해하고, 대장균 배양 방법을 학습한다. 또한 분광 광도계를 이용하여 배양된 대장균의 흡광도를 측정하고 생장곡선을 작성함으로써 대장균의 성장 특성과 세포 증식 과정을 이해한다.Ⅱ. 배경지식1. LB Media(g/L) 구성 및 역할성분역할Bacto-tryptone 10gCasein(우유)이 단백질 분해효소 trypsin에 의해 분해된 peptide → 세균 단백질 공급원Bacto-yeast extract 5 g미생물과 세포에 비타민, 미량 원소, 성장인자, 아미노산 등 필수 영양소 공급NaCl 5 g배양 세포가 삼투에 의해 터지지 않도록 삼투압을 조절* Agar-plate + 1.5% agar 15g우뭇가사리의 점장을 동결 건조한 물질로 온도에 따라 액체와 고체의 상태를 가지는 특성을 이용하여 고체 plate 제작 시 이용2. 항생제 선택 배양 (Antibiotic Selection)플라스미드에 항생제 저항성 유전자 존재→ 해당 플라스미드를 가진 세균만 생존, 나머지는 사멸플라스미드항생제의미pUC19Ampicillinβ-lactamase 생산 → Amp 분해pAc-p6.9v-EGFPGentamicinGM 저항성 유전자 보유3. E. coli가 클로닝에 자주 사용되는 이유가장 많이 연구된 모델 미생물 → 정보와 프로토콜이 풍부빠른 증식 속도 → 실험 시간 단축형질전환 효율 높음 → DNA 조작 쉬움→ 유전자 클로닝, 단백질 발현 실험에 최적4. 플라스미드 (Plasmid)세균의 염색체 DNA와 독립된 환형(super-coiled) DNA세균 생존에 필수는 아니지만 기능적 이점 제공다른 세포로 전달 가능(수평전달)- Vector로 사용되는 이유선택 마커(항생제 저항성) 존재 → 형질전환 세포 선별Ori (origin of replication) → 세포 내에서 복제 가능크기가 작아 조작 및 추출 쉬움복제 수 많아 DNA 확보 용이세포 내로 잘 들어감 (전기천공/heat-shock 등)5. 기구-분광 광도계 (spectrophotometer)시료용액을 통과한 후 흡수되는 빛의 세기를 측정하는 기구특정 물질에 따라 흡수를 할 수 있는 빛의 파장이 다르기 때문에 특정 파장을 이용하여 물질의 양을 결정 가능, 600nm에서의 OD값 측정-Optical Density (OD)용액에 의해 흡수된 빛이 일정 세기로 유지될 때의 양을 수치화한 값으로 이를 통해 농도 표기가 가능-원심분리기원심력을 이용하여 시료 내 입자(세포, 세포 소기관, 고형물 등)를 크기와 밀도 차이에 따라 분리하는 기구회전하면서 발생하는 원심력(F = m·ω²·r)을 이용하여 입자를 침전시킴.m: 입자 질량 ω: 각속도(rad/s) r: 회전 반지름세포, 세포 소기관, 단백질, DNA 등 분리, 상등액(supernatant)과 침전물(pellet) 분리, 배양액에서 세포 수거 등에 쓰임.- Shaking incubator세균 배양 시 일정한 온도 조건을 유지하며, 진탕(Shaking)을 통해 배양액을 지속적으로 혼합하는 장비.배양액을 흔들어 산소가 균일하게 공급되도록 하여 호기성 세균(E. coli)의 증식을 촉진함.온도 및 진동 속도를 조절할 수 있어 최적의 생장 환경을 제공하며, 세포가 침전되지 않고 균일하게 분산된 상태로 배양하도록 돕고, 세포 성장 속도 향상, 생장곡선 실험, 플라스미드 생산용 배양 등에 필수적으로 사용됨.6. 생장곡선1. 유도기 (Lag phase)세포 수의 뚜렷한 증가가 나타나지 않는 단계새로운 배양조건에 적응하며 필요한 효소나 대사물질을 합성하는 과정으로 세포는 활발히 생리활동을 하고 있지만 분열은 거의 없음배양조건, 접종량, 세포 상태에 따라 길이가 달라짐2. 대수증식기 (Log/Exponential phase)세포가 일정한 속도로 빠르게 증식하는 단계세포 분열이 지수적으로 증가 → 생장률 최댓값생리적으로 가장 활발하고 안정된 상태항생제 효과 실험, 생리·생화학적 연구에 주로 사용광학밀도(OD600) 측정 시 이 구간에서 직선적으로 증가함3. 정체기 (Stationary phase)영양분 고갈, 노폐물 축적, 공간 제한 등으로 세포 성장과 사멸이 균형총 세포 수는 일정하게 유지대사활동 감소, 생존전략(내생 포자 형성, 항생물질 생산 등) 활성화될 수 있음4. 사멸기 (Death/Decline phase)세포 사멸이 신생 세포 수보다 많아 총 세포 수 감소환경 스트레스 증가, 영양 고갈 및 독성물질 축적Ⅲ. 실험1. 실험재료1. 배지LB (Luria-Bertani) 배지Bacto-tryptone 10 g/LBacto-yeast extract 5 g/LNaCl 5 g/LAgar-plateLB 배지 + Agar 1.5% (15 g/L)2. 항생제-Gentamicin->pAC-p6.9v-EGFP 플라스미드 보유 E. coli 선택-Ampicillin->pUC19 플라스미드 보유 E. coli 선택3. 미생물E. coli (Escherichia coli)4. 플라스미드 (Plasmid)pAC-p6.9v-EGFPpUC195. 기구셰이킹 인큐베이터(Shaking incubator)분광광도계(Spectrophotometer, OD600 측정용)원심분리기50 mL conical tube, 마이크로 피펫, 큐벳2. 실험방법1. LB + Amp에 pUC19 플라스미드를 가지고 있는 대장균을 배양한다.LB + Gm에 pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드를 가진 대장균을 배양한다.(각 샘플을 100μL씩 각각의 항생제 배지에 접종을 해준다.)2. 각 배양액을 36도의 shaking incubator에서 대장균을 키운다.3. 배양 시작 후 1시간 간격으로 3시간 동안 spectrophotometer를 사용하여 600nm에서 흡광도를 측정하여 기록한다.4. 배양하여 대수증식기에 도달한 E. coli 50 ml를 tube에 5mL씩 분주하고, 원심분리기를 이용하여 원심분리 (4,000rpm, 5min)한 뒤 상층액을 제거한 후 다음 실험을 하기까지 침전물은 4℃에서 보관한다.Ⅳ. 결과I. 초기pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드 가진 대장균을 GM배지에 접종한 결과pUC19플라스미드 가진 대장균을 amp배지에 접종한 결과ll. 1시간 후pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드 가진 대장균을 GM배지에 접종한 결과pUC19플라스미드 가진 대장균을 amp배지에 접종한 결과Time (h)pAc-p6.9v-EGFPpUC1900.11900.122310.55750.5528lll. 원래 적정량의 대장균을 접종했을 때 흡광도의 증가율시간pAc-p6.9v-EGFPpUC190시간0.0150.0401시간0.0950.1282시간0.4430.4023시간0.8290.859OD600 측정 결과, 배양 2~3시간 사이에 대수증식기에 도달한다.Ⅴ. 고찰본 실험에서는 세균의 성장 정도 및 배양액 내 성분 분석을 위해 NanoDrop 기기를 사용하였다. NanoDrop은 소량의 시료(약 1~2 µL)만으로도 흡광도를 측정할 수 있어 간편하고 빠른 분석이 가능하다는 장점이 있는데 특히 배양액의 농도 측정 시 시료 소모가 적어, 여러 번 반복 측정이 필요한 미생물 실험에 유용하다고 한다. 다만 NanoDrop은 시료 내 부유물이나 기포, 배지 성분에 의해 측정값이 영향을 받을 수 있다는 한계가 있다. 또한 세포 수를 직접 계수하는 방식이 아닌 흡광도 기반 간접 측정이므로, 세포의 생사 여부와 상관없이 흡광도에 영향을 줄 수 있다. 따라서 이번 실험에서 진행했듯이 영점을 잡는 과정을 진행해야 한다. 대장균이 들어가 있지 않은 기본적인 LB배지를 1ml 수거해 큐벳에 놓고 투명한 면이 앞을 보게 하고 blank 보정을 하였다. 또한 동일 조건에서 반복 측정을 수행하는 것이 중요하고 필요 시 추가적인 생균 수 분석 방법들과 병행하면 정확도를 높일 수 있다고 하지만 이번 실험에선 진행하지 않았다.실험 결과를 보면, 배양 초기임에도 불구하고 pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드를 가진 대장균을 GM배지에 각각 100μL 접종한 결과는 0.1190, pUC19 플라스미드를 가진 대장균을 amp배지에 접종한 결과는 0.1223의 결과가 나왔다. 대수 증식기는 OD600 값이 0.4-0.8 정도인데 이를 바탕으로 생각한다면 배양 접종량이 좀 많았던 것으로 보인다. 보통 대수증식기에 도달하려면 3시간 정도 걸리지만 1시간 후의 결과값이 각각 0.5575, 0.5528로 대수증식기에 진입했다는 사실을 알 수 있었다. 이를 통해서 또한 접종량이 많았다는 것을 추측할 수 있을 것이다. 두 샘플(pAc-p6.9v-EGFP/GM, pUC19/Amp)은 둘 다 비슷한 결과값을 나타낸 것으로 보아 유사한 성장 패턴을 보여서, 플라스미드 종류에 따른 초기 성장률 차이는 크지 않았다고 판단했다.이번 실험을 통해, 배양 초기 세포 수와 배양 조건이 세포 성장 속도에 큰 영향을 미친다는 점을 확인할 수 있었다. OD600 측정을 통해 세포 농도를 실시간으로 모니터링함으로써 세포가 어느 시점에서 대수증식기에 도달하는지를 파악할 수 있었지만, 초기 접종량이 많아 1시간 만에 대수증식기 도달을 확인했기에 유도기를 확인하지 못한 것이 아쉬운 점이다. 다음에 같은 실험을 진행한다면 점차 대수증식기에 도달하는 과정을 확인하는 것에 초점을 맞추어 진행해 볼 것이다. 접종량과 배양 시간 조절, 주기적인 OD 측정을 통해 보다 정밀한 성장곡선 확인과 세포 증식 관리가 필요하고 이러한 과정이 뒤의 실험에서 이어질 유전자 클로닝 실험의 기초가 되며 성공적인 클로닝을 위한 중요한 과정임을 깨닫게 되었다.

공학/기술| 2025.12.18| 8페이지| 2,500원| 조회(55)

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유전학, 유전공학, 생명공학, cloning 실험 리포트 (유전자 클로닝과 DNA 분석))

실험보고서Experiment Report교과목명유전학실험제목cloning제출월일담당교수제출자성명:학과:학년:학번:Ⅰ. 실험목적제한효소 처리를 통한 DNA의 절단을 수행하고, buffer change 및 gel extraction을 통해 절단된 DNA 절편을 회수(elution)한다. 이후 Ligation 반응을 통해 목적 DNA 절편과 벡터 DNA를 접합하며, 형질전환(transformation)을 통해 재조합 DNA를 대장균 내로 합입하고, 항생제 배지 도말 및 blue/white screening을 이용하여 성공적으로 재조합 된 클론을 선별하는 것을 목표로 한다.Ⅱ. 배경지식제한효소(Restriction enzyme)4-8개의 nucleotides로 구성된 회문구조(palindrome)을 인식하여 DNA를 절단하는 효소1 Unit: 1시간 동안 최적조건에서 50μL 반응혼합물에 들어있는 1μg의 박테리오파지 λ DNA를 절단하는데 필요한 제한효소의 양잘린 DNA 단편이 갖는 형태점착성(Sticky end) 또는 비점착성(Blunt end) 말단을 형성Blunt end: Sticky end와 다르게 DNA 서열이 서로 상보적으로 결합해 있지 않은 상황Sticky end: 연결하고자 하는 부위에 DNA 서열이 서로 상보적으로 노출되어 있지만 인산디에스테르 결합이 존재하지 않아 떨어질 수 있는 상황제한효소 처리 시 고려해야 할 요인제한효소 Unit처리 시간효소 -> 단백질 -> Ph ->buffer-> 염-> 온도 -> 처리 온도-Ligation이란Ligase가 인산다이에스터 결합이 끊어진 부분을 인식하여 인산과 hydroxy 부분을 연결하는 과정Vector와 insert DNA를 특정 비율로 혼합하여 ligase 처리해주는 과정※ ligation 효율Sticky end > Blunt endSticky end의 경우 상보적인 염기 서열이 수소결합을 통해 염기쌍을 형성DNA의 일시적인 안정화Ligase에 의해 DNA 골격이 형성될 확률이 Blunt end에 비해 cell정의: 정상 bacteria 세포에 화학적 처리를 통하여 DNA가 쉽게 들어갈 수 있도록 만든 cell을 의미DH5a 및 DH108: Cloning 또는 plasmid의 대량생산을 위해 사용되는 recA- 균주 유사 염기서열을 인지해서 recombination을 유도하는 효소인 recA의 탈락을 통해 처음 넣어준 plasmid만의 준비가 가능BL21(DE3)Cloning된 유전자의 발현을 위한 inducible promoter가 존재발현된 단백질이 degradation되는 것을 방지하도록 하는 변형된 protease 유전자를 보유-형성된 colony -> Amp저항성을 가진 plasmid가 형질 전환된 E. coil• Blue colony - EGFP가 들어가지 않은 plasmid• White colony - EGFP가 들어간 target plasmidⅢ. 실험1. 실험재료2-1 DNA의 절단 2-2 절단된 DNA의 회수(Elution) 2-3 LigationPlasmid DNA 칼 DNA Ligation might mix kit제한 효소 Gel extraction kit 제한효소로 절단된 vector3’D.W Heat block 제한효소로 절단된 DNAIncubator Water bath2-4 형질전환(transformation)Competent. cellLigation된 DNAIceLB-Amp+ agar 배지2. 실험방법2-1. DNA의 절단1. 1.7 mL tube에 micropipette으로 다음과 같이 처리*buffer를 넣은 후 제한효소를 넣는다.Total volume50 µLTotal volume50 µLpUC191 µgpAc-p6.9v-EGFP3 µgT buffer (10×)5 µLT buffer (10×)5 µLBSA buffer (10×)5 µLBSA buffer (10×)5 µLSma I2 µLSma I2 µL3' D.Wup to 50 µL3' D.Wup to 50 µL기포가 생기지 않게 주의하면서 tapping약 3~5 sec 원심 제한효소를 넣는다.Total volume20 µLTotal volume20 µL3’ D.W13 µL3’ D.W16 µLM buffer (10×)2 µLM buffer (10×)2 µLHind III (15 Unit)2 µLHind III (15 Unit)2 µL기포가 생기지 않게 주의하면서 tapping약 3~5 sec 원심분리37°C incubator에서 4h동안 반응시켜 DNA의 충분한 절단을 유도Agarose gel 전기 영동을 통해 결과를 확인2-2. 절단된 DNA의 회수 (Elution)절단된 DNA가 충분히 구분될 때까지 전기 영동 수행BIuPAD 위에서 날카로운 칼을 이용하여 DNA band를 최소한으로 잘라 microtube에 담고 무게를 측정무게의 3배만큼 agarose lysis buffer (GB)를 첨가50-55 C heat block에 tube를 넣고 2-3분마다 inverting하여 5-10분 동안 gel을 완전히 용해Micropipette으로 spin column에 위 용액을 처리한 뒤 13,000 rpm에서 1min 30 sec 원심분리Column을 통과한 용액을 버리고 750 µL wash buffer (NW)를 처리한 뒤 원심분리통과한 용액을 버리고 다시 원심분리 하여 용액을 완전히 제거새 1.7 mL tube에 column만을 설치하고 20-50 µL elution buffer (EB)를 처리한 뒤 실온에 1분 정치.원심분리 하여 DNA를 회수Agarose gel 전기 영동을 통해 결과를 확인2-3. LigationVector 및 insert를 준비해서 ice에 ligation mix와 함께 보관vector와 insert의 몰 비율이 1:1이 될 수 있도록 계산volume이 많은 순으로 넣어주고(insert 넣고 vector 넘기), 마지막으로 ligation mix를 넣어줌. (2X)tapping 후 spin downtube 전용 스펀지에 끼워서 16°c water bath에서 반응(30 min~ overnight)※ Li후 LB Amp+ plate를 clean bench에서 습기를 말려주고, 도말봉 또한 화염 소독회복 시작 45 min 후 X-gal과 IPTG를 50 µL씩 도말회복 종료 후 4,000rpm, 5 min 원심분리 후 상층액을 일부 제거한 후 tapping하여 pellet을 풀어주어 도말을 준비LB Amp+ plate에 sample 전체를 도말한 후 37c incubator에서 overnight형성된 colony를 관찰Ⅳ. 결과1. vector로 사용할 Puc19에 Sma l, Hind III 처리 후 전기 영동의 결과이론상으로는 2653 bp와 33 bp의 두 절편이 생성된다.전기 영동에서 2653 bp 밴드는 명확히 관찰되었으나,33 bp 절편은 겔에서 매우 빠르게 이동하고염색 감도가 낮아 시각적으로 검출되지 않았다.따라서 가시적으로 확인된 단일 밴드는기대한 대형 절편에 해당하며, 절단은 성공한 것으로판단된다.2. insert로 사용할 pAc-p6.9v-EGFP에 Sma l, Hind III 처리 후 전기 영동의 결과4640 bp의 원형 플라스미드가 예상대로 3873 bp와767 bp의 두 절편으로 절단되었다. 전기영동 결과에서도두 밴드가 분리되어 나타났으며, 이는 제한효소 절단이정상적으로 이루어졌음을 보여준다.3. gel extaction 후 vector와 insert 전기 영동의 결과자르기 전 Puc19(vector): 2686bp자른 후 Puc19(vector): 2653bp+33bp사용할 Puc19(vector): 2653bp자르기 전 pAc-p6.9v-EGFP (insert): 4640bp자른 후 pAc-p6.9v-EGFP (insert): 767bp+3873bp사용할 후 pAc-p6.9v-EGFP (insert): 767bp4. 도말한 후 플레이트에 뜬 white colony 와 blue colony도말한 Amp/X-gal/IPTG 배지에서 blue colony와 white colony가 각각 관찰되었다.blue colony는 lacZ 유전자가 온료가 붙어 손실되는 것을 방지하기 위함이다. 또한 제한효소는 고농도의 버퍼나 다른 조성물과 직접 접촉할 경우 활성이 저하될 수 있기 때문에 DW가 먼저 존재하는 희석된 환경에서 다른 시약들이 순차적으로 섞이는 것이 효소 안정성 측면에서도 유리하다고 한다. 즉 각각 계산을 하여 Puc19에는 33µL의 D.W, pAc-p6.9v-EGFP에는 26µL D.W를 먼저 넣어줬고, 이후 Sma I 2µL 처리를 진행했다. 에탄올 침전법을 진행할 때 에탄올 침전에서 70% 에탄올을 사용하는 이유는 이 농도가 DNA의 용해도를 가장 낮추면서도 염·단백질 같은 불순물은 잘 용해시키는 최적 조건이기 때문이다. 100% 에탄올은 DNA는 빠르게 탈수시키지만 염까지 함께 굳게 침전시키는 문제가 있어 정제가 어려운 반면 70% 에탄올은 DNA 펠렛은 유지하면서 불순물만 효과적으로 씻어내므로 깨끗한 DNA 회수에 가장 적합하다고 한다. Total volume을 20 µL로하고, 3’ D.W, M buffer, Hind III를 가해줄 때, 물론 아까 Sma I 또한 해당되는 이야기 이겠지만 제한효소의 양 보다 buffer의 양이 무조건적으로 같거나 많아야 한다. 버퍼가 효소 활성에 필요한 pH·이온농도·Mg²⁺ 조건을 정확히 유지하는 역할을 하기 때문에 버퍼가 부족하면 반응 환경이 변해 효소 활성이 떨어지거나 비 특이적 절단이 일어날 수 있다. 또한 제한효소는 저장용액(글리세롤)에 포함되어 있어 이를 많이 넣으면 반응 조건이 왜곡되므로, 효소는 소량만 사용하고 버퍼를 충분히 넣는 것이 원칙이다. 전기 영동을 진행한 결과(결과1,2) 정상적으로 이루어졌지만, 이 과정에서 유의해야 할 점은 크게 두 부분이 있었다. 첫째로, 젤의 홈의 크기가 다양하며 너무 많은 양을 로딩 할 경우 병목현상처럼 DNA가 끌리는 현상이 발생할 수 있으므로 나눠서 두 개의 홈에 로딩을 했고, 둘째로 전기 영동 시간이 너무 길어진다면 밴드 굵기가 연해서 분리가 어렵기에 먼저 gel extraction 후 다시 었다.

공학/기술| 2025.12.18| 13페이지| 2,500원| 조회(46)

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유전학, 생명공학, PCR 리포트 (유전자 클로닝과 DNA 분석)

실험보고서Experiment Report교과목명유전학실험제목중합효소연쇄반응(PCR)제출월일담당교수제출자Ⅰ. 실험목적PCR의 이해를 바탕으로 목적 유전자가 포함된 대장균을 선발하는 것이다. 이를 위해 PCR의 기본 원리와 polymerase의 특성을 이해하고, PCR 반응이 이루어지는 원리를 탐구한다. 이후 colony picking 및 colony PCR을 수행하여 목적 유전자를 가진 재조합 대장균을 확인하고, PCR 결과를 통해 목적 재조합체를 선발한다.Ⅱ. 배경지식PCR의 원리DNA 내 특정 부분의 유전자를 Taq 중합효소(Taq polymerase)를 이용하여 대량으로 중폭시킬 수 있는 기술Taq 중합효소호열성 고세균인 Thermus aquaticus에서 발견한 중합효소중합효소가 내열성이기 때문에 높은 온도에서 진행하는 PCR에서 안정성을 가질 수 있어 사용하는 중합효소PCR 단계-Pre-Denaturation염기 쌍 사이의 수소결합을 파괴하여 이중 가닥인 template DNA를 단일 가닥으로 변성시키는 단계-Denaturation이중 가닥인 일부 template DNA를 단일 가닥으로 분리시키는 단계-AnnealingPrimer에 적합한 온도 (Tm)에서 primer가 template DNA의 상보적인 부분에 결합 Primer: DNA 신장과 합성을 위한 출발점으로 작용하는 oligomer-ExtensionDNA polymerase가 DNA을 합성-Final extensionExtension 과정에서 합성이 일어나지 못한 DNA 가닥 합성 마무리 단계PCR의 목적Colony 내 cloning된 EGFP 유전자가 존재하는지 확인하기 위해 PCR 진행Lac Z 유전자 앞뒤에서 annealing되어 중복을 유도하는 M13-F, M13-R primer를 이용Colony PCR원칙적으로는 추출된 DNA를 template으로 사용하여야 하나 시간 질감을 위해 E. coil 자체를 template으로 이용하는 PCR.Colony PCR과 PCR의 비교구분Colony PCR일반 PCRtemplateE. coli 내에 존재하는 DNA추출된 DNA정확도상대적으로 낮음상대적으로 높음편의성DNA 추출 과정이 생략되어 시간 절감상대적으로 많은 시간 소요Ⅲ. 실험1. 실험재료PCR premixture2가지의 primerTemplate DNAPCR machineDNA polymerase: Taq PolymerasedNTPs: Polymerase에 의해 새로운 DNA가닥이 합성될 때 필요한 물질PCR Buffers: 반응의 안정화를 위한 완충용액과 Polymerase의 작동을 돕는 Mg2+ 등의 2가 양이온 포함.2. 실험방법Colony picking1. 1.7 mL tube에 LB Amp+ 배지를 20µL씩 분주2. Blue-white screening이 끝났다고 판단되면, plate에서 blue colony와 white colony를 1개씩 선발3. 선발된 colony를 멸균된 이쑤시개로 살짝 찍어 1.7 mL 1ube 내 배지 안으로 넣어줌.4. Colony가 풀어질 수 있도록 충분히 vortexing반응액 제조 ->8 tube 사용하기에 충분한 양인 9개의 양으로 제조함.Reagent1 Tube (20 µL)9 Tubes (×9)PCR master mix (5×)4 µL36 µLForward primer (10 pmol/µL)1 µL9 µLReverse primer (10 pmol/µL)1 µL9 µLTemplate colony2 µL18 µL3' D.W12 µL108 µLTotal volume20 µL180 µLPCR 조건30-cycles온도(℃)시간Pre-denaturation95℃3 minDenaturation95℃10 secAnnealing44.2℃10 secExtension (20 sec/kb)72℃30 secFinal extension72℃0End4℃∞PCR settingInitial denaturation: 95 °C, 3 minStep< 1 kbp1–10 kbpDenature95 °C, 5 sec95 °C, 10 secAnnealTm − 4 °C, 5 secTm − 4 °C, 10 secExtend72 °C, 5 sec72 °C, 20 sec/kbp* Set 25-35 PCR cycles for effective amplification.* You can also use two step cycle amplification. (Denaturation at95°C and annealing / extension at 68°C)Ⅳ. 결과PCR 후 전기영동 결과PCR 산물을 전기 영동 한 결과,약 1000 bp 크기의 밴드는 EGFP가 삽입된 샘플에서 관찰되었으며, 약 100–200 bp 크기의 밴드는 EGFP가 삽입되지 않은 샘플에서 관찰되었다. Blue colony에서는 약 100–200 bp 밴드만 나타났다.White colony 중 1번 샘플에서는 약 1000 bp와 100–200 bp 밴드가 동시에 확인되었다. White colony 2번과 3번 샘플에서는 약 1000 bp 밴드만 관찰되었다. 반면 White colony 4, 5, 6번 샘플에서는 약 100–200 bp 크기의 밴드만 나타났다.Ⅴ. 고찰본 실험에서는 blue-white screening과 colony PCR을 활용하여 EGFP insert의 삽입 여부를 확인하였다. 나의 샘플인 White colony 3번은 약 1000 bp의 단일 밴드가 명확하게 확인되었으며, 이는 목적 insert(EGFP)가 성공적으로 vector에 삽입되었다고 볼 수 있다. 밴드의 크기와 선명도가 기준에 부합했기 때문에 cloning이 성공적으로 수행된 샘플로 판단할 수 있다. 하지만 다른 샘플들은 몇 가지 특징적인 문제들이 나타났다. 우선 White colony 1번의 경우 1000 bp와 100–200 bp 밴드가 동시에 관찰되어 단일 colony를 picking하지 못하여 주변의 blue colony가 함께 섞여 들어간 것으로 판단된다. 이는 colony picking 과정에서 white colony와 blue colony의 경계가 명확하지 않았기 때문으로 보인다. 또한 White colony라 생각했던 4, 5, 6번은 EGFP가 삽입되지 않은 밴드만 나타났으며, 실제로는 매우 연하게 보이는 blue colony였을 가능성이 있다고 생각된다. blue colony는 반드시 진하게 파란색으로만 나타나는 것이 아니기 때문에, 일반적으로는 picking 전에 light box나 lightboard를 활용하여 colony 색을 정확히 확인하는 것이 권장된다. 본 실험에서는 편의성을 위해 바로 picking을 진행했기 때문에 이러한 오차가 발생한 것으로 보인다.결과적으로, colony PCR은 insert 유무를 빠르게 확인할 수 있는 효과적인 방법임을 확인할 수 있었다. 나의 3번 샘플은 기대한 밴드의 형태를 보였고 cloning이 성공적이었으며, 다른 샘플들의 결과는 colony picking 과정에서의 정확성, 특히 blue-white colony의 색상 판별과 단일 colony 확보의 중요성을 보여주는 사례였다고 생각 할 수 있다.우리가 사용한 Taq polymerase에 대해 찾아보니, 이 효소는 원래 정확도가 높지 않고 말단에 A를 붙이는 특성이 있어 final extension 단계를 넣는 경우가 많다고 한다. 하지만 이번 실험처럼 단편이 작고 사이클 내에서 이미 충분히 합성이 되면 final extension이 크게 필요하지 않을 수도 있다고 해서 final extension 단계를 제외한 것이 이해가 되었다. 또 Taq은 proofreading 기능이 없어서 cloning PCR에서 가끔 비특이적 밴드나 오류가 생길 수 있다는 내용도 확인했고, 이런 점 때문에 조건 설정이 더 중요하다는 것을 알게 되었다. “또 조교님께서는 템플릿 DNA 양이 너무 많으면 밴드가 지저분하게 나올 수 있다고 설명해 주셨다. 이에 원래 3 µL이던 템플릿을 2 µL로 줄여 진행했는데, 이후 자료를 찾아보니 템플릿 과량은 실제로 비특이적 결합을 증가시키고 프라이머가 비의도적 서열에 붙어 여러 밴드를 형성하기 쉽다는 점을 확인할 수 있었다. 이런 PCR을 해보면서, 같은 방법이라도 시약 양이나 조건이 조금만 달라져도 결과가 확 달라질 수 있다는 걸 느꼈고, 다음에 유전학 관련 실험을 하게 된다면 이런 작은 부분들도 더 신경 써야겠다고 생각하게 되었다.

공학/기술| 2025.12.18| 8페이지| 2,500원| 조회(45)

유전공학, 생명공학, 유전학, 플라스미드, 리포트, 유전자 클로닝, DNA클로닝, P..

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유전학, 생명공학, 세균 DNA의 분리 리포트 (유전자 클로닝과 DNA 분석)

실험보고서Experiment Report교과목명유전학실험제목세균 DNA의 분리제출월일담당교수제출자성명:학과:학년:학번:Ⅰ. 실험목적대장균으로부터 플라스미드를 직접 분리·정제하고, 그 원리와 절차를 이해하는 것이다. 알칼리 용해(alkaline lysis) 기반의 플라스미드 추출 방법과 그 작동 원리를 학습하며, 분광 광도계를 이용하여 추출된 플라스미드 DNA의 농도 및 순도를 측정한다. 또한 전기 영동을 수행하여 분리된 플라스미드 DNA의 존재를 확인하고, 전기 영동의 원리 및 결과 해석 방법을 익힌다.Ⅱ. 배경지식Plasmid prepDNA 추출은, 단백질이나 RNA를 제거하고 ethanol precipitation을 통해 DNA를 얻어내는 과정이다.plasmid prep의 경우, chromosomal DNA를 분리하여 plasmid만 추출하는 기법이 요구된다.Plasmid와 chromosome의 분리 방법Size에 의한 분리bacterial Chromosome은 cell envelope에 부착되어 존재chromosomal DNA detergent 처리 시 Chromosome에 약간의 파괴를 유도이 상태에서 원심분리를 진행할 경우,Lysis 과정에서 발생한 cell debris와 절단된 bacterial DNA는 pallet 형성이때 상층액에는 비교적 크기가 작은 (동시에 가벼운) plasmid만 존재 가능Conformation에 의한 분리cell 내부의 plasmid는 대부분 Super-coiled 형태로 존재Alkaline 처리 시, circular plasmid에 비해 비교적 안정적인 형태의 super-coiled plasmid의 경우 변성이 일어나지 않음.Bacterial DNA 역시 alkaline 조건에서 변성되고 이후 중화 과정에서 불규칙한 형태로 결합.원심 분리 과장을 통해 Bacterial DNA를 pellet화 시켜 상층액에는 plasmid가 존재Plasmid mini prep kitSolution lRNase A: E. coil 내 RNA 분해Solution IlSDS: 인지질 2중층인 세포막을 파괴하여 용균 유도NaOH: pH 10 이상의 강염기로 단백질을 파괴Chromosome에 비해 안정적인 형태인 plasmid는 강염기 조건에서 일부의 수소결합만 파괴Solution IllPotassium salt: sodium ion이 potassium ion으로 대체되면서 불순물들이 서로 응집하는 것을 유도Acetic acid: 산성 용액으로 염기성 반응물에 처리 시 중화반응이 발생하여 plasmid의 염기 사이 수소 결합 유도PW bufferEthanol: wash 과정을 통해 불순몰을 제거하는 역할분광 광도계 이용법Elution 시 사용한 용액을 cuvette 50μL 넣은 후 Blank 설정측정하고자 하는 DNA를 희석하여 흡광도를 측정260nm->A260: DNA289nm->A280: 단백질농도: A260순도: A260/ A280적정 순도:1.8~2.0순도 2.0의 경우, 단백질 또는 페놀에 의한 오염전기 영동DNA의 전하 차이를 이용하여 분자를 분리하는 기술을 의미DNA의 경우 전하를 띄고 있기 때문에 전기장 내에서 양전하 쪽으로 이동이러한 특성을 이용하여 DNA의 분자량에 따라 분리하는 것이 가능-전기 영동에 영향을 미치는 요인전하-분자량 비율: 대부분의 DNA 분자는 비슷한 전하-분자량 비율을 가지기 때문에 DVA의 크기가 전기 영동 이동속도 영향을 주는 유일한 요인Gel의 농도: 복잡한 다공성 구조로 구성되어 있기 때문에 DNA의 분자 크기가 작을수록 빠르게 이동Agarose gel-Agarose다당류 기반 겔로, DNA가 이동할 수 있는 기공(pore) 구조를 형성.겔의 농도에 따라 DNA 분리 능력이 달라짐.-TBE BufferTris: 강염기로 Borate와 함께 완충용액으로 작용Borate: 강산으로 Tris와 함께 완충용액으로 작용EDTA: 금속 이온(특히 Mg²⁺)을 킬레이트(chelate)하여→ DNA 분해효소(DNase)의 활성을 억제, DNA 분자량에 따른 (-)전하 부여-Ecodye: 전기 영동 시 DNA 시료에 섞어 사용하는 로딩 다이로, 시료가 well에 가라앉도록 하고 색으로 이동 경로를 확인할 수 있게 함.전기 영동의 확인DNA 염기 사이에 삽입되어 결합하는 특성을 가지는 EtBr을 이용하여 DNA를 염색해준 후, UV를 이용하여 DNA의 이동을 시각적으로 관찰가능Ⅲ. 실험1. 실험재료Plasmid를 가지고 있는 E. coilSpin ColumnCell Resuspension Solution (Sol I)Cell Lysis Solution (Sol Il)Neutralization Solution (Sol III)Wash BufferElution Buffer1.7ml tube분광 광도계, Agarose gel, TBE buffer, DNA 전기 영동 장치2. 실험방법배양액을 5분간 4000rpm 원심분리한 후, 가능한 상층 액 제거S1 buffer 250μl로 resuspension 후, 2.0mL tube에 옮긴다.S2 buffer 250μl를 넣고 tube를 4번 inverting, (최대 5분간 배양)S3 buffer 350μl를 넣고 4~6번 inverting13000rpm, 4℃, 10min 원심분리원심분리 후 상층액을 SV column(노란색)에 넣고 13000rpm, 30sec 원심분리, collection 튜브에 있는 용액 제거 후 재결합PW buffer 700μl를 SV column애 넣고 13000rpm, 1min 30sec 원심분리Column에 아무 buffer도 넣지 않은 채로 다시 13000rpm, 1min 30sec 원심분리SV column을 새 1.5ml tube에 옮긴 후 Elution buffer 또는 멸균된 3차 증류수를 100μl 넣고 1분간 정지13000rpm, 1min 원심분리, elution된 DNA를 확인한다.Ⅳ. 결과1. 플라스미드 DNA 정량 결과추출한 pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드 DNA의 농도 및 순도는 다음과 같다.측정 항목결과DNA 농도 (ng/μl)99.7 ng/μlA260/A2802.15A260/A2302.082. 전기영동 결과전기 영동 결과, pAc-p6.9v-EGFP 대조군과 추출한 플라스미드 샘플에서 상단부에 선명한 밴드가 확인되었다. 두 밴드는 거의 동일한 위치(크기 영역)에 형성되었다.Ⅴ. 고찰본 실험에서는 대장균으로부터 pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드를 추출하고, Nano Drop을 이용하여 DNA 농도 및 순도를 측정한 뒤 전기 영동으로 추출된 플라스미드의 존재 여부를 확인하였다. 플라스미드 추출은 알칼리 분해(alkaline lysis) 방식과 실리카 칼럼 정제 과정을 통해 진행되었고, 이는 세포막 파괴 및 단백질과 염류 제거를 통해 플라스미드 DNA만을 선택적으로 분리하는 방법이다. Solution l에는 RNase A가 들어있고, 단백질 효소이기 때문에 실온에서 장시간 두면 효소 활성이 유지되면서 RNA 분해가 일어날 수 있기에 RNase A의 활성을 보존하기 위해 냉장 온도에서 보관한 용액을 사용했다는 것을 실험 이후에 추가 조사를 통해 알게 되었다. 또한 냉장 상태의 용액은 낮은 온도로 인해 점도와 표면장력이 증가하는 특성이 있어 더 많은 양이 딸려오기 때문에 1step으로 용액을 왔다 갔다 하는 피펫팅을 진행해야 한다는 사실도 알게 되었다. Solution Il는 강염기이고, 아무리 supercoiled플라스미드가 안정적이라고 해도 장시간 노출 시 파괴될 수 있기에 천천히 섞어주는 과정이 매우 중요한 과정이다. 그리고 냉장 원심분리 전에 pellet을 가볍게 툭 치는 과정이 추가적으로 들어갔는데 이는 공식적인 항목은 아니며 실험 효율을 높이기 위해 흔히 사용되는 실험 팁이라는 것도 알게 되었다. 아마 Supercoiled DNA pellet은 초기 형성 시 튜브 벽면에 덩어리 형태로 붙어 있을 수 있기에 작은 입자로 분산시켜주면 표면적이 증가하여 침전이 보다 완전하게 바닥으로 모이게 되기 때문일 것이다. NanoDrop 측정에서 추출된 pAc-p6.9v-EGFP 플라스미드의 농도는 99.7 ng/µL였으며, A260/A280은 2.15, A260/A230은 2.08로 측정되었다. A260은 핵산(염기)이 강하게 흡수하는 파장(260 nm)이고, A280은 주로 단백질의 방향족 아미노산이 흡수하는 파장(280 nm), A230은 guanidine, phenol, 일부 버퍼 성분 등이 흡수하는 파장이라고 한다. 일반적으로 순수한 dsDNA는 A260/A280 ≈ 1.8 및 A260/A230 ≈ ≥2.0로 평가되므로, 본 시료의 A260/A230(2.08)은 화학적 오염이 적은 편임을 예상할 수 있다. 반면 A260/A280이 2.15로 다소 높은 값으로 나온 것은 RNA 혼입이 되어 나타난 것으로 예상된다. 아마 실험 과정의 6번에서 pipette을 사용할 때 천천히 했어야 했는데 용액에 기포가 딸려 들어가서 다시 용량을 맞추려고 하는 과정에서 오류가 낫던 듯하다. 향후에는 좀더 부드럽게 시료를 취급하여서 순도를 높일 것이다. 이를 해결하기 위해 RNase 처리 후 재측정을 하게 되면 이 오차를 줄일 수 있을 것이다. 전기 영동 결과에서도 플라스미드 밴드가 명확히 드러났고, 대조군으로 사용된 pAc-p6.9v-EGFP 샘플과 거의 동일한 위치에서 밴드가 존재했기 때문에 플라스미드 추출은 성공적으로 수행되었다고 볼 수 있다. 이번 실험은 이후에 진행될 성공적인 Cloning을 위해 필수적으로 갖춰져야 하는 중요한 실험이었다.

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피부와 생활건강 2025 기말 족보(새로운 문제 다거 출현)

8 주차 안면홍조 발생 원인에 따른 홍조의 분류에서 흔한 원인이 아닌 것은 ? 1. carcinoid 2. temperature 3. emotion 4. food 5. fever 2 번 Gustatory flushing 은 Chili pepper 와 같은 spicy 한 음식을 먹고 난 후 나타나는 땀 , 콧물 , 침을 동반한 일측성 안명홍조로 삼차신경의 autonomic neurons 에 의한 nerve reflex 에 의한다 . 답 : X 3 번 다음 중 홍조를 일으키는 약물이 아닌 것은 ? 1. nicotinamide 2. tamoxifen3. nitroglycerin 4. diltiazem5. morphine 8. 주사의 가장 흔한 subtype 은 ? ① subtype 4 ② 차이가 없다 ③ subtype 2 ④ subtype 3 ⑤ subtype 1 21. chinese restaurant syndrome 의 원인이 되는 물질은 ? ① sulfites ② nitrite ③ histamine ④ capsaicin ⑤ MSG 24. 주사치료에 사용되는 국소치료제가 아닌 것은 ? ① Ivermectin ② Azelaic acid ③ Brimonidine ④ Metronidazole ⑤ Doxycycline9 주차 백반증 및 기미 1 번 멜라닌 소체에서 멜라닌이 나타나는 것은 stage2 단계이다 . 답 : O 2 번 백반증 분절형의 특징으로 맞는 것은 ? 1. 초기에는 빠르게 커지나 곧 안정됨 2. 초발연령이 높다 3. 가족력이 많다 4. 새 병소가 잘 생긴다 5. 다른 질환과 동반되는 경우가 많다 3 번 백반증 치료의 외과적 적응증이 아닌 것은 ? 1. 병변부 피부가 태선화 된 경우 2. 흰 털이 동반된 안정성 분절형 3. 일정기간 안정된 경우 4. 내과적 치료에 효과가 없는 경우 5. mini-grafting test 에서 활동성이 없는 경우 3. 멜라닌 소체 내의 멜라닌 생합성 과정에 관여하는 가장 중요한 효소는 tyrosinase 이며 이 는 529제 3 번 출생 후 수일 내에 발생하며 , 주로 얼굴에 일시적인 구진과 고름물집으로 나타났다가 수일에서 수 주 내에 저절로 호전되는 여드름은 ? 1. 신생아 여드름 2. 청소년 여드름 3. 성인 여드름 4. 아동기 여드름 5. 영아기 여드름 4 번 여드름에서 관찰되는 특징적인 병변은 ? 답 : 면포 5 번 응괴 여드름에 대한 설명으로 틀린 것은 ? 답 : 항생제 치료에 잘 반응한다 . 6 번 보통 여드름의 유발 또는 화학요인이 아닌 것은 ? 답 : 생리 후 약화 9 . 성인 여드름과 청소년기 여드름의 차이점이 아닌 것은 ? ① 성인 여드름은 염증 후 색소침착이 더 잘 생긴다 . ② 성인 여드름은 생리전 악화되는 경우가 적다 . ③ 성인 여드름은 스트레스 후에 심해지는 경우가 많다 . ④ 성인 여드름은 입 주위 , 턱 , 목 등에 호발한다 . ⑤ 성인 여드름은 면포의 발생이 적다 . 18. 전격여드름은 전신증상을 동반하는 심한 낭종여드름의 드문형태로 가슴과 등에 갑자기 압통과 통증을 동반하는 염증결절과 판이 광범위하게 발생하고 화농변성이 빠른 속도로 진행되면서 궤양을 형성한다 . 주로 10 대 소녀 에서 발생하며 면포의 수는 매우 적고 , 얼 굴과 목은 잘 침범하지 않는다 . 동반되는 전신증상으로는 열 , 다발성 관절통 , 체중감소 , 식욕부진 , 피로 , 구역 , 근육통 , 결절홍반 등이 있다 . ① O ② X 25. 여드름 발생에 가장 덜 중요한 병인은 ? ① 염증 반응 ② 여드름 균의 집락 형성 ③ 피지분비 증가 ④ 털집 과다각질화 ⑤ 유전적 요인11 주차 탈모증 4 번 다음 중 저 농도의 안드로겐에 의해 촉진되는 부위의 털은 ? 1. 얼굴 2. 두피의 모발 3. 치부와 액와부 4. 몸통 5. 팔 , 다리의 밑단부위 5 번 휴지기 탈모에서 모발 당김 검사를 시행하였다 . 100 개의 모발을 당겼을 때 몇 개 이상 빠지면 휴지기 탈모증으로 진단하는가 ? 2 개 2. 4 개 3. 6 개 4. 8 개 5. 10 개 6 번 안드로겐 탈모증은 남녀간의 발생빈도에는 FDA 승인을 획득한 약은 ? ① Ketoconazole 샴푸 ② 두타스테라이드 - 20 ③ Tretinoin 용액 ④ 미녹시딜 국소도포제 ⑤ 피나스테라이드 11. 안드로겐 탈모증의 유전방식은 ? ① 상염색체 우성 ② X-linked 우성 ③ 상염색체 열성 ④ X-linked 열성 ⑤ 돌연변이 12. 사람모발의 일반적 특성 중 틀린 것은 ? ① 머리카락은 대략 10 만 정도이고 - 21 ② 머리카락은 하루 0.35mm 정도 자람 ③ 모발 성장은 염색이나 탈색의 영향을 받는다 . ④ 일생동안 성장과 탈락을 반복함 ⑤ 출생 후 새로운 모낭의 형성은 없다 .12 주차 아토피 피부염 4 번 아토피 피부염 치료에서 보조적인 치료에 해당하는 것은 ? 1. 보습과 보습제의 사용 2. 항히스타민제의 사용 3. 약화요인의 분석 및 제거 4. 광선 치료 5. 국소 스테로이드의 사용 5 번 아토피 피부염에서 부모 중 한쪽이 아토피일 때 자녀에서 아토피 피부염 발생 가능성은 ? 10%2. 20%3. 30%4. 40% 5. 50% 6 번 일반적으로 아토피 피부염환자의 옷감으로 가장 적절한 것은 ? 1. 실크 2. 합성섬유 3. 나이론 4. 모직 5. 면 4. 아토피에서 눈꺼풀의 피부염 때문에 부종이 발생하면 눈아래 주름이 생기는데 이를 무엇 이라 하는가 ? ① Hertoghe sign ② Killing 주름 ③ Koebner sign ④ Auspitz sign ⑤ Dennie-Morgan 주름 7. 내인성 아토피 피부염의 정의 중 틀린 것은 ? ① 총 혈청 IgE 의 수치가 높으며 ② 흡입 , 음식물 항원에 대한 특이 IgE 항체가 나타나지 않는 경우 ③ 천식이나 비염 같은 아토피 질환이 없으며 ④ 흡입 , 음식물 항원에 대한 피부단자 실험에서 음성이고 ⑤ 아토피 피부염의 진단기준에 맞는 임상증상이 있고 19. 아토피 환자뿐 아니라 아토피가 아닌 사람에게서도 각종 음식물 , 흡입제 , 약물 등에 포 함된 여러 가지 종류의 항원에 반응하는 IgE 항체에 의해서 알레르기성 두드러기가 나콜레스테롤 25% 및 긴사슬유리지방산 10-25% 로 구성되어 여러층의 층판 을 형성하는데 , 이층판은 투과장벽의 기능을 정상적으로 유지하기 위해 필수적이다 . ① X ② O13 주차 접촉 피부염 1 번 접촉부위에 따른 원인물질의 추정이 중요한데 립스틱 , 치약 , 의치에 의해 피부염이 잘 생기는 부위는 ? 1. 안면 2. 항문부위 3. 겨드랑이 4. 입술 5. 눈꺼풀 2 번 시멘트를 취급하는 사람이 직업적으로 가장 많이 감작되는 금속은 ? 1. 구리 2. 크롬 3. 수은 4. 니켈 5. 코발트 3 번 원인물질이 밝혀지면 추후 접촉을 피해야 하며 , 동일 물질 뿐만 아니라 그 물질과 교차 반응을 일으키는 물질도 함께 피해야 한다 . 예를 들어 benzocaine 은 procaine, sulfonamides, hairdye , textile dye, 일광차단제와 교차반응이 가능하다 . 따라서 환자에게는 노출 가능한 물질의 성분을 살피도록 교육하여 원인물질에 노출되는 것을 피하도록 하며 , 때때로 성분이 표시되지 않거나 간혹 성분을 표시한 항목이 빠져 있을 수 있다는 것도 함께 주지시켜야 한다 . 답 : O 4 번 머리염색약에 의한 알레르기 접촉 피부염의 가장 흔한 향원은 ? 답 : Paraphenylenediamine 5 번 자극 접촉피부염은 일정한 농도 이상의 자극을 주면 거의 모든 사람에게 피부염을 일으킬 수 있는 피부염을 말한다 . 답 : O 6 번 chlorinated hydrocarbon 을 다루는 사람에서 특징적으로 생기는 작업 피부병은 ? 답 : 여드름 2. 고무장갑을 사용 중 알레르기 접촉피부염이 발생하였다 . 다음 중 가능성이 있는 항원을 모두 고르시오 . ① Thiuram 군 ② Mercapto 군 ③ Carbamate 군 ④ Naphthyl 군 ⑤ PPD 군 5. 아토피 피부염 치료에서 기본 치료에 해당하는 것은 ? ① 국소 스테로이드의 사용 ② 보습과 보습제의 사용 ③ 광선 치료 ④ 국소 칼시뉴린 억제제 사용 ⑤ 항히스타민제의 사용 15. 얼굴과 사지에 호발하고 , 특히 눈 주위나 입술이 꽈리처럼 부풀어 오르는 특징이 있다 . 위장관을 침투하면 구토 , 복톡 , 설사등이 나타나고 후두부를 침벙하면 호흡곤란 , 쉰 소리 등이 나타나고 생명이 위험할 수도 있다 . 답 : O 4 번 두드러기는 몸의 어느 부위에나 생길 수 있고 전신에 퍼질 수도 있지만 , 개개의 병변은 일과성으로 수 시간 정도 지속하다가 소실되며 12-24 시간 이상 지속되는 경우는 매우 드물다 . 반면에 두드러기성 혈관염에서는 팽진이 24-48 시간 이상 지속되는 특징이 있으며 , 팽진의 변화가 별로 없고 , 가려움증보다는 통증을 더 호소한다 . 그리고 자반이나 색소침착을 남기며 소실된다 . 답 : O 5 번 구진상 두드러기의 가장 흔한 원인은 ? 1. 스트레스 2. 음식 3. 감염 4. 곤충자상 5. 약물 6 번 물리 두드러기는 주위 환경의 다양한 물리적 , 외적 자극에 대한 특이한 반응으로 나타나는 질환 군으로 , 개별 유발 검사에 의해 진단이 가능하여 세밀한 검사실 검사를 필요로 하지 않는다 . 주로 젊은 성인에서 발생하며 , 마찰 , 압박 , 한랭 , 열 , 운동 , 물 , 일광 , 온도변화 , 진동 및 다른 환경적 자극에 의해 유발될 수 있고 , 여러 형태의 물리 두드러기가 한 환자에서 함께 발생할 수 있다 . 물리 두드러기가 전형적인 두드러기와 구별되는 특징은 , 개개 병변이 전형적인 두드러기에서는 수 시간 이상 지속되지만 물리 두드러기에서는 대부분 30-60 분 정도로 짧게 지속된다는 점이다 . 답 : O 13. 두드러기는 벌레에 물렸을 때 부풀어 오르는 것과 같은 몹시 가려운 팽진 , 이러한 팽진 은 혈관반응으로 인하여 피부의 진피에 나타나는 일시적인 부종에 의한 것으로 , 부종이 진피 상부에 국한될 때에는 임상적으로 맥관부종 이 나타나며 , 부종이 심부진피 , 피아 또 는 점막하조직에 침범하면 두드러기로 나타나게 된다 . 팽진주위로 발적으로 둘러싸이는 것도 특징이다 . ① O ② X 17. 두드러기 발생에서 보체가 ow}

학교| 2025.12.18| 7페이지| 2,000원| 조회(73)

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