Blot hybridization에 대해

소개

Blot hybridization에 대해..
- Western blot : 원하는 특정 단백질을 확인하는 방법
- Nothern blot : 원하는 특정 RNA를 확인하는 방법
- Southern blot : 원하는 특정 DNA를 확인하는 방법

으로 특정 DNA, RNA, 단백질을 검출할 수 있는 probe 및 antibody를 이용하여
blot (membrane)상에서의 특정 DNA, RNA, 단백질의 위치 또는 양을 확인하는 방법입니다.

목차

Blot hybridization에 대해

Western blot
정의및 방법
western blot과 immunostaining의 차이

northern blot
정의

Southern blot
정의
방법

출처

본문내용

Western blot
- 특수 단백질 검출 검사.


정의및 방법

- 웨스턴 블로팅은 어떤 단백질의 발현양을 그 단백질에 대한 항체를 이용해 알아보는 실험기법입니다.

실험 방법은 어떤 세포나 조직에서 단백질을 추출한 후 sample buffer 와 섞어 acrylamide로 만든 분자체(molecular sieve)에 올려놓고 전기를 흘려주면 sample buffe에 들어있던 SDS라는 물질이 단백질 전체에 (-)전기를 띠게 해서 (+) 전극쪽으로 단백질이 끌려가게 됩니다.

이때 분자체가 단백질의 진행을 막으므로 작은 분자는 빨리, 큰 분자는 느리게 이동합니다. 이렇게 크기에 따라 분리된 젤위에 멤브레인을 올려놓고 젤에서 멤브레인쪽으로 전기를 흘려주면 단백질은 분리된 상태 그대로 멤브레인으로 옮겨집니다. 여기에 보고자 하는 단백질에 대한 항체를 결합시키고 다시 그 항체에 특이적인 2차항체를 결합시킵니다. 이 2차 항체에는 발색 또는 형광을 나타낼 수 있는 효소가 결합되어 있어 이 효소에 대한 기질을 멤브레인에 뿌려주면 바로 발색 반응이 일어나거나 나타나는 형광반응을 X-ray film으로 이미지화할 수 있습니다. 이렇게 하면 1차로 사용한 항체에 대한 항원 단백질이 그 추출물내에 얼마나 존재하는 지를 알아볼 수 있는 것입니다.


western blot과 immunostaining의 차이

- western blot은 in vitro이고 immunostaining은 in vivo입니다.

참고자료

· - http://ddibo.hihome.com/southern%5B1%5D.html,
· - yonsei university college of medicine
· - 네이버 지식인
· - 네이버 사전