서강대학교 현대생물학실험4(현생실4) 1차 레포트(A)-cycloheximide chase assay

소개

"서강대학교 현대생물학실험4(현생실4) 1차 레포트(A)-cycloheximide chase assay"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. References

본문내용

1. Abstract
본 실험은 Cycloheximide chase assay를 통해 Cyclin D1의 half-life를 확인하는 데 그 목적이 있다. Cycloheximide는 진핵세포에서 단백질 번역 과정을 억제하여 단백질 합성을 막는 물질이다. 이러한 성질을 이용해 protein에 시간에 따라 Cycloheximide를 처리하고 분해 정도를 파악하는 방법을 Cycloheximide chase assay라고 한다. 단백질은 Ubiquitin-proteasome pathway와 Autophagy-Lysosome pathway를 통해 분해되며, 실험에 사용되는 Cyclin D1은 Cell cycle의 G1기에서 S기로의 진행에 관여하는 regulator이다. protein half-life는 protein이 초기 농도의 50%가 될 때까지 걸리는 시간을 의미하는데 이는 질병 특이적 protein degradation을 연구하는 데 중요하다. NCCIT cell에 Cycloheximide를 0, 15, 30, 60 min 마다 처리한 후 lysis 하고, bradford assay를 통해 농도를 측정한다. 이후 동일한 농도의 sample로 SDS PAGE, transfer, western blotting 한 후 얻은 band를 image J로 확인한다. 이때, α/β-tubulin의 band도 같이 구해 실험의 신뢰성을 높였다. 실험 결과 Cyclin D1의 half-life는 15-30 min으로 확인되었는데 이는 기존의 이론과 일치하는 결과이다.[1]

2. Introduction
Cell cycle은 핵과 세포질 모두에서 세포가 주기적으로 성장하고 분열하는 과정을 설명한다. 일반적으로 진핵 세포의 Cell cycle은 G1기, S기, G2기, M기(유사분열)의 네 단계를 거친다. G1기는 DNA 복제를 준비하는 시기로, 세포는 단백질과 RNA 합성을 통해 성장하며 DNA 함량에는 변화가 없다. S(Synthesis)기는 DNA가 복제되는 시기로, 세포 내의 DNA 함량이 가변적인 상태이다. G2기는 DNA 복제가 끝난 후 분열을 준비하는 시기로, 세포는 분열에 필요한 단백질을 추가적으로 합성한다. M기는 세포가 분열하는 시기로, 핵분열과 세포질분열이 모두 일어나서 2개의 딸세포가 생성된다. Cell cycle에는 추가적으로 G0기가 존재하는데, G0기는 세포가 휴지 상태에 들어가 더 이상 분열하지 않는 시기를 말한다.

참고자료

· Qie, S., & Diehl, J. A. (2016). Cyclin D1, cancer progression, and opportunities in cancer treatment.Springer-Verlag Berlin Heidelberg.
· Dal Col, J., & Dolcetti, R. (2008). GSK-3β inhibition: At the crossroad between Akt and mTOR constitutive activation to enhance cyclin D1 protein stability in mantle cell lymphoma.Cell Cycle, 7(20), 2813–2818.
· Kwak, Y. T., Li, R., Becerra, C. R., et al. (2005). IκB kinase regulates subcellular distribution and turnover of cyclin D1 by phosphorylation.Journal of Biological Chemistry, 280(40), 33945–33952.
· Bianco, C., Marshall, S., & Kelly, E. (2025). Freezing diluted bovine serum albumin standards does not significantly affect standard curves.Biotechniques, 77(3), 95–102.