[화공생물공학단위조작실험1 A+ 예비레포트] Enzyme Kinetic assay Horseradish Peroxidase

목차

Ⅰ. 실험 목표
Ⅱ. 실험 원리
Ⅲ. 시약 & 실험 기구 및 방법
Ⅳ. 실험 시 주의사항
Ⅴ. 참고 문헌

본문내용

Ⅰ. 실험 목표
본 실험에서는 spectrophotometer를 이용하여 HRP(horseradish peroxidase)에 의한 기질의 변화를 측정하여, 효소 반응속도론의 기본이 되는 Michaelis–Menten 방정식을 이해한다.

Ⅱ. 실험 원리
1. Michaelis–Menten 방정식
Michaelis–Menten kinetics는 생화학분야에서 가장 잘 알려진 효소와 반응속도론에 관한 모델 중 하나이다.

2. 효소 반응속도론 (enzyme reaction kinetics)
단일 기질-효소 촉매반응의 속도식은 Michaelis-Menten 속도식을 기본으로 한다. 생물계 에서는 다기질-다효소 반응과 같은 보다 복잡한 효소-기질간 상호작용이 일어날 수 있다.
효소는 기질과 결합할 수 있는 활성부위의 숫자가 일정하기 때문에 높은 기질농도에서는 활성 부위 모두가 기질과 결합하여 효소가 포화되는 상태가 된다.
효소 반응속도론은 다음과 같이 효소(E) - 기질(S)의 복합체[ES] 형성단계의 가역반응과 ES 복합체의 비가역 해리단계의 2단계의 반응체계로부터 구할 수 있다.

위 반응체계는 ES 복합체가 다소 빠른 속도로 형성되고 두 번째 단계의 역반응속도를 무시한다는 가정을 전제로 한다. 두번째 반응의 비가역과정은 반응초기에 생성물의 축적을 무시할 때 성립된다.
위의 2단계 반응체계로부터 효소 반응속도식(즉, Michaelis-Menten kinetics)을 유도하기 위해서 다음의 두 가지 가정 중에 한 가지를 사용한다.
1) 빠른 평형(rapid equilibrium approach) 가정
2) 유사 정상상태(quasi-steady-state approach) 가정
유사 정상상태 또는 빠른 평형을 가정하여 효소 반응속도식을 유도할 때 초기 단계는 두 경우가 동일하다. 반응속도 v는 생성물의 생성속도 또는 기질의 소모 속도로서 moles/L∙s의 단위를 갖는다.

참고자료

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