생명과학실험1 A+ Protein electro transfer 와 Western blot 을 이용한 단백질 분석 보고서

소개

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목차

1. Introduction
2. Methods
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

Western blot 은 biological sample 을 gel 에서 membrane 으로 옮겨 membrane 표면에서 검출하는 단백질 분석 방법이다. Western blot 은 다음과 같은 순서로 진행된다. (1) Protein mixture 을 SDS-PAGE 를 이용해 크기대로 분리한다. (2) 단백질을 nitrocellulose 또는 polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane 에 옮긴다. (3) Membrane 표면에 antibody 의 unwanted binding 을 방지하기 위해 blocking 과정을 거친다. 이때 주로 skim milk in TBST 나 BSA(bovine serum albumin) solution 을 이용해 blocking 한다. (4) Membrane 의 특정 단백질과 결합하는 antibody 를 반응시킨다. (5) 이때 antibody 에는 enzyme 이 결합되어 있기에 antigen-antibody 반응 이후 substrate 를 넣어주면 enzyme 이 있는 곳에서만 enzyme-substrate 반응이 일어난다. (6) 색을 발하거나 형광을 발하는 침전물을 membrane 표면에 침전 시켜 해당 substrate 반응을 검출한다. 대표적으로 활용되는 것은 chemiluminescent substrate 이 내는 빛을 film, CCD camera, phosphor imager 로 검출하는 방법이다.
Western blot 의 검출 방법은 크게 indirect detection 과 direct detection 이 있다. Direct detection 은antigen 을 인식할 수 있는 primary antibody 에 검출에 사용되는 enzyme 이나 fluorescence dye 를 달아 인식하는 방식이다.

참고자료

· David L. Nelson, Michael M. Cox, Lehninger Principles of Biochemistry 6th Edition, New York: W. H Freeman and Company, 2016, pp. 175, 176
· Cell signaling technology, “Milk or BSA? Choosing blocking protein for Western Blot” , 2018.06.25., https://blog.cellsignal.com/tech-tips-video-milk-or-bsa-choosing-a-blocking-protein-for-western-blot , 접속일 2022.04.24.
· Gbiosciences, “A Discussion of Protein Research: PVDF or Nirocellulose-which membrane is best?”, 2014.11.12,https://info.gbiosciences.com/blog/bid/203026/pvdf-or-nitrocellulose-which-membrane-is-best , 접속일 2022.04.24.
· Market Data Forecast, “Global Antibodies Market Size, Share, Trends, COVID-19 Impact & Growth Analysis Report – Segmented By Product Type, Indication, End User, Application and Region - Industry Forecast (2022 to 2027)”, 2022.01., https://www.marketdataforecast.com/market-reports/antibodies-market , 접속일 2022.04.26
· Tahrin Mahmood, Ping-Chang Yang (2012). Western Blot: Technique, Theory, and Trouble Shooting. North American Journal of Medical Sciences Vol.4 , 429-434.
· Thermo Fisher scientific, “Western Blotting Transfer Methods”, 2020., https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/western-blot-transfer-methods.html , 접속일 2022.04.24.