생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 9. 단백질 정량

소개

생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 9. 단백질 정량 괸련 리포트입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 재료 및 기구

3. 방법

4. 실험 결과

5. 실험 원리(배경) 및 실험 고찰
가. 실험원리(배경)

나. 실험 고찰

6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
단백질의 양을 정량하기 위해서 단백질 뿐만 아니라 시료 안에 포함되어 있는 다른 성분들의 본질, 정량 분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라서 적절한 방법을 선택하여야 한다.
단백질 정량법들에 대해 학습하고 각각의 장단점을 숙지한 후, 단백질의 종류와 특성에 따라 적합한 방법을 선택하여 실험한다.

2. 실험 재료 및 기구
ELISA 기기, e-tube, RIPA buffer, BSA standard, BCA protein assay reagent (A, B), 96-well plate, Micropipette & Tip, 10주차에 분리한 단백질 샘플 (LNCaP에서 분리)

<중 략>

3. 방법
① BCA kit를 준비한다.
② BCA solution (standard curve)용 e-tube를 5개 (1000, 500, 250, 125, 0) 준비한다.
③ BSA standard (2mg/ml) 용액을 ‘1000, 500, 250, 125, 0’ (mg/µl)으로 RIPA buffer로 희석한 뒤, 각각 e-tube에 30µl씩 넣는다.
④ BCA protein assay reagent A:B=50:1을 계산한다.
(12개의 well에 200µl씩 mixture를 넣을 것이므로, 총 2400µl의 mixture가 필요하다. 여분을 생각하여, A 2500µl + B 50µl으로 mixture를 제작한다.)
⑤ 계산한대로 A 2500µl와 B 50µl를 혼합하여, A, B mixture를 만든다.
96-well plate에 단백질 샘플을 포함해 각 샘플 당 10µl씩 duplicate loading한다. (총 12개의 well)

참고자료

· 김미리,최보희,김현정,조은비,최현아,and 홍정일. "단백질 정량 발색반응에 미치는 Zinc Protoporphyrin의 영향." 자연과학연구논문집 24.- (2012): 57-64.
· 조영호. "BCA 정색반응을 이용한 새로운 세포독성 분석법 개발과 항암제 탐색을 위한 그 이용." 국내석사학위논문 建國大學校 大學院, 1992. 서울