HPLC - 내부표준물법에 의한 정량_예비보고서 (2)

소개

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목차

1. 실험 일자
2. 실험 제목
3. 실험 목적
4. 시약 및 기구
5. 실험 방법
6. 실험 원리
7. 참고문헌

본문내용

실험 목적
HPLC로 미지의 시료 중 성분을 확인하고 내부표준 방법을 이용하여 한 성분의 농도 결정

시약 및 기구
SYrige, MeOH, ammonium acetate, Methyl orange, TimolBlue, Fluorescin stock solution, 메스 실린더

실험 방법
UV/VIS detector는 시료의 농도에 따라 감응하여 농도에 비례하는 신호를 내기 때문에 여러 농도의 표준용액을 사용하여 calibration curve를 만들고 미지시료의 농도를 알아보도록 한다.

-시료(원액)
조교가 만들어 놓은 MethylOrange, TimolBlue, Fluorescin stock solution을 이용한다 (세 개의 원 용액, 각 20 ug/mL 농도).

-Calibration curve용 표준용액
1. MO, TB, F (각 2.0μg/ml): 위 각 용액을 2.0 mL씩(피펫) 취하여 한데 모으고 이동상으로 전체적으로 20mL로 묽힘 (메스 실린더 사용)
2. MO, TB, F (각 3.0μg/ml): 위 각 용액을 3.0 mL씩 취하여 전체적으로 20mL로 묽힘
3. MO, TB, F (각 4.0μg/ml): 위 각 용액을 4.0 mL씩 취하여 전체적으로 20mL로 묽힘
4. 미지시료
-각 성분의 머무름 시간을 보기 위하여 세 단일 성분 원액을 적당히 묽혀 만든 한-성분 시료들을 사용한다. (1.0- 10ug/mL).
- Parameter
이동상: 80/20 (v/v) methanol/ammonium acetate
flow rate: 0.5mL/min.
column: C18-실리카
Vis detector: 파장 460nm

-Process
①Syringe에 메탄올을 넣고 injector를 몇 번 washing 한다.

참고자료

· 기기분석의 원리, Donglas A Skoog, 자유아카데미, 1994, p.360~372
· 기기분석의 이해, 박기채 외 6인, 사이플러스, 2008, p.182-188
· https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Kromatografia.png
· https://www.shimadzu.com/an/service-support/technical-support/analysis-basics/basic/what_is_hplc.html
· https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/small-molecule-hplc/hplc-troubleshooting-guide
· https://m.blog.naver.com/rpis52yer/220128589575