면역세포의 염색 및 조직 슬라이드 제작 예비레포트(A+)

소개

"면역세포의 염색 및 조직 슬라이드 제작 예비레포트(A+)"에 대한 내용입니다.

목차

1. 이론
1) 조직의 고정법
2) 슬라이드 제작과정
3) H&E 염색
4) 면역항체 검출법

2. 재료

3. 과정

본문내용

1. )조직의 고정법
고정은 세포를 살아있는 상태와 같이 보존하는 것으로 크게 열고정과 화학고정이 있다. 주로 열고정은 세균에서 화학고정은 진핵에서 사용된다. 화학적 고정에도 침수고정, 관류고정, 증기고정,주입고정의 방식이 있다.
이번 실험에서는 화학고정을 사용하며, 이는 고정액을 처리하여 염색약이 세포막을 쉽게 통과하게 도와주고, 세포내 단백질이나 핵산의 교차결합시키는 방법이다.
조직내에 인접한 분자의 아미노기간에 비가역적인 교차결합으로 연결하는 방식인데, 이 공유결합은 처리과정동안 발생하는 손상을 최소화하는 불용성의 안정한 분자로 변환시킨다.
고정액의 양은 조직용적의 10-20배정도 사용하며 고정액에 담가놓는 시간은 용액마다 차이가 있을 수는 있으나 주로 저온에서 5시간정도를 평균으로 잡는다.
이때 중요한 것은 시료채취과정에서 시간을 지체할 경우 리소좀의 가수분해효소에 의해 세포소기관이 분해될 수 있다. 따라서 빠르게 용액에 넣어야한다.
과거에는 용액으로 아세트산이나 에탄올, 메탄올과 같은 유기용매를 사용하였으나 최근에는 포름알데히드, 글루타린알데히드를 사용한다. 이번 실험에서는 포르말린(포름알데히드) 용액을 사용한다. 다만, 고정액은 인체 세포에도 영향을 미치므로 실험시에 주의해야한다.
특히 포르말린 용액은 공기중의 산소나 빛에 의해 포름산이 발생할 수 있기 떄문에 산화방지제를 사용해야한다.

1. )슬라이드 제작과정
슬라이드 제작시 앞서 알아보았던 고정을 포함하여, 고정, 탈수, 투명화, 파라핀 침투와 포매, 절편화, 파라핀 제거, 수화, 염색 과정을 거친다.

탈수는 포매 과정에서 세포를 채워워야하는 파라핀은 소수성이지만 세포내의 고정액은 친수성이므로 알코올을 이용하여 물을 제거하는 전처리과정이다. 고정한 시료를 알코올에 담가두되, 급격한 수축을 막기 위해 알코올의 농도는 점진적으로 높이며 물을 제거한다. 다만, 완전한 탈수가 진행되었다고 하더라도 조직수분 함유량을 3-4%이하로 물을 제거하기는 어렵다.

참고자료

· 서가영 핵심생물학 상권 p.68
· 허은영;조직표본의 제작과정
· https://ko.wikipedia.org/wiki/H%26E_%EC%97%BC%EC%83%89
· 식약처; 치료용 단백질의 항-약물 항체 검출 시험법 가이드라인
· 서가영, 핵심생물학 중권 p.129-139