[A+] 2024 서강대 현대생물학실험2 3차 (restriction enzyme)

소개

"[A+] 2024 서강대 현대생물학실험2 3차 (restriction enzyme)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

이번 실험에서는 지난 실험에서 mini-prep을 통해 추출한 plasmid DNA와 pET21a vector에 제한효소인 HindⅢ와 NdeⅠ을 처리하여 DNA의 절단을 확인하고 gel extraction을 통해 분리한 insert DNA를 회수했다. 회수한 insert DNA는 ligation을 통해 pET21a vector에 삽입하여 대장균에 transformation했다. Transformation은 LB ampicillin agar plate에서의 배양을 통해 확인할 수 있었다. 정상적으로 transformation되어 LB ampicillin agar plate에 colony를 형성한 대장균 세포로부터 mini-prep kit를 통해 plasmid DNA를 얻었으며 HindⅢ와 NdeⅠ을 처리하여 vector와 insert DNA를 분리했고 이를 전기영동으로 확인하였다. 지난 실험에서 얻은 prep DNA에 제한효소를 처리한 결과, 3800bp의 DNA가 750bp insert와 3050bp vector로 절단되는 것을 확인할 수 있었고 pET21a 또한 제한효소 처리 시 65bp가 절단되어 5378bp가 되는 것을 관찰할 수 있었다. pET21a vector와 insert DNA를 ligation하여 대장균에 transformation한 결과 vector를 self-ligation시킨 것보다 더 많은 colony가 형성되었다. 이는 서로 다른 제한효소를 사용하여 서로 상보적이지 않은 vector의 양 말단이 만들어졌기 때문이라고 예상할 수 있다. 형성된 colony에서 plasmid를 분리하여 제한효소 처리한 결과 5378bp와 750bp의 DNA band가 관찰되었으므로 insert가 정상적으로 vector에 삽입되어 있었음을 알 수 있다.

참고자료

· Neil A. Campbell (2019), Biology A Global Approach. 12th, Pearson, pp. 450~460
· David L. Nelson (2021), Lehninger Principles of Biochemistry, 8th, W.H. Freeman and Company, pp. 1155-1179
· Geoffrey M. Cooper (2019), The Cell A Molecular Approach, 8th, Oxford University Press, pp. 128-140
· Heiko Khun, Maxim D. Frank-Kamenetskii (2005), Template-independent ligation of single-stranded DNA by T4 DNA ligase, The FEBS Journal, 72(23):5991-6000
· Sergey A. Yazynin, Sergey M. Deyev (1996), A plasmid vector with positive selection and directional cloning based on a conditionally lethal gene, Gene, pp. 131-132