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[만점보고서]Plasmid DNA 추출과 DNA 정량 실험보고서2025.01.171. Plasmid DNA 추출 Plasmid DNA는 세균의 세포 내에서 염색체와 별개로 존재하는 자가복제 DNA이다. Plasmid DNA 추출을 위해 Alkaline Lysis 법을 사용하여 세포를 용해시키고 plasmid DNA를 염색체 DNA와 분리한다. 이 과정에서 다양한 buffer를 사용하여 pH 변화를 조절하고 불순물을 제거한다. 2. DNA 정량 Nanodrop 분광광도계를 이용하여 추출한 plasmid DNA의 농도와 순도를 측정한다. 260nm 흡광도로 DNA 농도를 측정하고, 260nm/280nm 및 260n...2025.01.17
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미니프렙을 통한 플라스미드 DNA 분리 및 정량2025.11.161. 미니프렙(Minipreparation) 방법 E. coli에 형질전환된 플라스미드를 미니프렙 방법으로 분리하는 실험이다. Solution I(glucose, Tris-Cl, EDTA)에서 세포 용해 준비, Solution II(SDS, NaOH)에서 세포 용해 및 DNA 변성, Solution III(potassium acetate, glacial acetic acid)에서 중화 과정을 거친다. 최종 DNA 농도는 0.2322 µg/µl이었다. 효율 향상을 위해 bacterial pellet 제거, inverting으로 혼합,...2025.11.16
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생명과학에서의 흡광도 측정 (비어-램버르트 법칙, 단백질, DNA 정량)2025.05.091. 흡광도와 Beer-Lambert's law (비어-램버르트 법칙) 흡광도(absorbance)는 물질이 특정 파장의 복사선을 얼마나 잘 흡수하는지를 나타내는 척도이다. Beer-Lambert 법칙은 흡광도와 시료의 몰농도, 빛이 물질을 통과하는 길이의 관계를 설명한다. 이에 따르면 흡광도는 빛이 물질을 통과하는 길이와 시료의 몰농도에 비례한다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 빛을 쬐어주어 물질의 에너지 상태를 변화시키고, 이를 통해 물질의 정성 및 정량 분석을 수행하는 방법이다. 자외선-가시광선 분광광도계를 이용하여 20...2025.05.09
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파이펫 사용법과 DNA 정량 실험2025.11.131. 마이크로파이펫(Micropipette) 사용법 마이크로파이펫은 마이크로리터 단위의 액체를 정확하게 흡입하고 분출하는 분자세포생물학 실험에서 가장 자주 사용되는 파이펫이다. 사용 시 주의사항으로는 팁 끝이 오염되지 않도록 주의하고, push button을 천천히 눌러야 한다. 빠르게 누르면 버블이 생겨 오차가 발생할 수 있으며 파이펫이 오염될 수 있다. First stop과 second stop 두 지점이 있으며, 각 단계에서 적절히 눌러야 한다. 정기적인 내부 클리닝, 멸균, 연 1회 calibration이 필요하다. 2. 흡...2025.11.13
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 4. Plasmid perp & Gel Electrophoresis2025.01.041. Plasmid DNA 플라스미드 DNA는 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA이다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다. 2. Plasmid DNA 추출 방법 플라스미드 DNA를 추출하는 방법에는 크기 차이를 이용한 방법과 구조 차이를 이용한 알칼리 용해 방법(Alkaline Lysis method)이 있다. 알칼리 용해 방법은 높은 pH의 알칼리성 용액...2025.01.04
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[생명공학] RNA extraction, cDNA synthesis, qRT PCR2025.05.031. RNA extraction RNA를 분리하는 과정에서 가장먼저 첨가해주는 물질이 Trizol이다. Trizol은 phenol과 guanidinium thiocyanate라는 두가지 중요한 성분으로 이루어져있고 이들이 cell을 lysis하고 RNA를 안정화시키는 역할을 한다. 추가적으로 chloroform을 첨가하여 RNA와 다른 물질들을 분리한다. 2. cDNA synthesis cDNA 합성 과정에서는 reverse transcriptase 효소가 핵심적인 역할을 한다. 이 효소는 RNA를 DNA로 역전사하는 기능을 가지고...2025.05.03
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유전자 발현 분석을 위한 RT-PCR 실험2025.01.041. PCR (중합효소 연쇄반응) PCR은 target DNA의 특정 염기서열을 복제하는 기술로, template DNA, primer, dNTP, DNA 중합효소 등이 필요합니다. 온도 조절을 통해 DNA 변성, primer 결합, 신장 단계를 반복하여 DNA 단편을 기하급수적으로 증폭할 수 있습니다. 2. real-time PCR real-time PCR은 PCR 과정 중 증폭되는 DNA를 실시간으로 모니터링할 수 있는 기술입니다. 형광 검출법을 사용하여 증폭되는 DNA 양을 정량적으로 분석할 수 있습니다. 이를 통해 초기 DN...2025.01.04
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식품 생화학 실험 real time qPCR과정과 결과값2025.01.141. GAPDH GAPDH 유전자는 glyceraldehyde-3-phosphate 탈수소효소 단백질 계열의 구성원을 암호화한다. 암호화된 단백질은 기계적으로 구별되는 능력을 기반으로 월광 단백질로 확인되었다. 이 유전자의 산물은 무기 인산염과 nicotinamide adenine dinucleotide (NAD)의 존재 하에서 glyceraldehyde- 3-phosphate의 가역적 산화적 인산화인 탄수화물 대사에서 중요한 에너지 생성 단계를 촉매한다. 암호화된 단백질은 핵에서 uracil DNA glycosylase 활성을 갖...2025.01.14
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RT-reaction & qPCR을 이용한 p21 단백질 발현 분석2025.11.171. 역전사 반응(RT-reaction)과 cDNA 합성 역전사효소는 RNA를 주형으로 하여 DNA를 합성하는 효소이며, 결과물인 cDNA는 mRNA의 상보적 DNA이다. cDNA는 전사 가능한 엑손 영역만 포함하고 인트론이 제거되어 있어 genomic DNA와 다르다. RT-reaction에서는 Random Hexamer, dNTPs, RNase inhibitor, Reverse transcriptase 등을 사용하여 mRNA로부터 cDNA를 합성한다. 이 기술은 cDNA 라이브러리 제작과 RT-PCR 등 분자생물학의 핵심 기술에...2025.11.17
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