HPLC 시험법밸리데이션 실무

문서 내 토픽

1. 시험법밸리데이션 정의 및 대상

시험법밸리데이션은 의약품 등의 품질관리를 위한 시험방법의 타당성을 미리 확인하는 과정입니다. 공정서에 기재되지 않은 분석법, 공정서에 기재된 기시법, 대상물질에 대한 신규 분석법 개발 검증이 대상이며, 품질 보증을 위한 품질관리 시험법 검증 및 제품 제조 판매 허가 허용기준 설정에 적용됩니다. ICH guideline parameter를 선별적 또는 전체 적용하며, 위탁 시험기관, 신규 분석법 개발 과제 수행기관, GMP 제조사 등이 주요 적용 기관입니다.
2. 시험법 종류 및 밸리데이션 항목

시험법은 확인시험, 불순물 시험, 정량시험, 용출시험, 함량시험 등으로 분류됩니다. 각 시험법별로 정확성, 정밀성, 특이성, 검출한계, 정량한계, 직선성, 범위 등의 밸리데이션 항목을 선택적으로 적용합니다. 확인시험은 검체 중 분석대상물질을 표준품과 비교하여 확인하고, 불순물 시험은 유연물질, 중금속, 잔류용매 등의 한도 또는 정량시험을 수행합니다.
3. 특이성, 직선성, 범위 평가

특이성은 불순물, 분해물, 배합성분 등의 혼재 상태에서 분석대상물질을 선택적으로 정확하게 측정할 수 있는 능력입니다. 직선성은 표준원액을 농도별로 희석하여 최소제곱법으로 평가하며, 범위는 적절한 정밀성, 정확성 및 직선성을 제시할 수 있는 분석대상물질 양의 하한 및 상한값 사이의 영역입니다. 정량시험은 분석농도의 80~120%, 유연물질은 허용기준의 120% 범위가 권장됩니다.
4. 정확성, 정밀성, 검출한계, 정량한계

정확성은 측정값이 참값이나 표준값에 근접한 정도로, 규정된 범위의 최소 3 농도에서 최소 9회 반복 측정하며 정량시험은 80, 100, 120%에서 평균 회수율 98~102%를 기준으로 합니다. 정밀성은 반복성, 실험실 내 정밀성, 실험실 간 정밀성으로 구분되며, 정량시험의 경우 상대표준편차 2% 이하를 기준으로 합니다. 검출한계는 신호 대 잡음 비 2H/h로 평가하고, 정량한계는 표준편차의 10배 기준으로 평가됩니다.
5. 완건성 및 시스템적합성

완건성은 시험방법의 조건이 의도적으로 변경되었을 때 측정값이 영향을 받지 않는지에 대한 척도로, 시험용액의 안정성, 추출 시간, 이동상의 pH, 컬럼 변경, 온도, 유속 등을 평가합니다. 시스템적합성은 분석기기, 분석조작, 분석대상 검체 등으로 구성된 전체 시스템이 적절하게 가동되도록 하기 위한 것으로, 공시험액, 표준액, 내부표준액 및 검액의 주입 순서를 규정하고 이동상 조성의 조정이 피크유지시간에 미치는 영향을 포함시킵니다.

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1. 시험법밸리데이션 정의 및 대상

시험법밸리데이션은 분석 방법이 의도된 목적을 충족하는지 확인하는 필수적인 과정입니다. 의약품, 식품, 화학물질 등의 품질 관리에서 신뢰할 수 있는 결과를 보장하기 위해 매우 중요합니다. 밸리데이션 대상은 신규 개발 방법, 기존 방법의 변경, 다른 기관으로의 이전 등 다양한 상황을 포함합니다. 규제 기관의 요구사항을 충족하고 데이터의 신뢰성을 확보하기 위해 체계적이고 과학적인 접근이 필요합니다. 이는 단순한 형식적 절차가 아니라 분석 방법의 성능을 객관적으로 입증하는 중요한 활동입니다.
2. 시험법 종류 및 밸리데이션 항목

시험법은 정성시험, 정량시험, 한계시험 등으로 분류되며, 각 종류별로 적절한 밸리데이션 항목이 요구됩니다. 일반적인 밸리데이션 항목으로는 특이성, 직선성, 범위, 정확성, 정밀성, 검출한계, 정량한계, 완건성 등이 있습니다. 시험법의 특성에 따라 모든 항목을 동일하게 적용할 필요는 없으며, 과학적 근거에 기반하여 필요한 항목을 선택적으로 수행합니다. 이러한 체계적인 접근은 분석 방법의 신뢰성을 보장하고 규제 요구사항을 효율적으로 충족할 수 있게 합니다.
3. 특이성, 직선성, 범위 평가

특이성은 분석 대상 물질을 다른 성분으로부터 구별할 수 있는 능력을 평가하는 가장 기본적인 항목입니다. 직선성은 농도와 반응 신호 간의 선형 관계를 확인하여 정량 분석의 신뢰성을 보장합니다. 범위는 직선성이 입증된 농도 구간을 정의하며, 실제 시험 조건을 반영하여 설정되어야 합니다. 이 세 항목은 상호 연관되어 있으며, 분석 방법의 기본 성능을 평가하는 핵심 요소입니다. 적절한 표준물질, 충분한 데이터 포인트, 통계적 분석을 통해 객관적으로 평가되어야 합니다.
4. 정확성, 정밀성, 검출한계, 정량한계

정확성은 측정값이 참값에 얼마나 가까운지를 나타내며, 회수율 시험을 통해 평가됩니다. 정밀성은 반복 측정 시 결과의 일관성을 평가하는 항목으로, 반복성과 재현성으로 구분됩니다. 검출한계는 신호가 배경 잡음으로부터 구별될 수 있는 최소 농도이며, 정량한계는 정량적으로 신뢰할 수 있는 최소 농도입니다. 이들 항목은 분석 방법의 신뢰성과 적용 범위를 결정하는 중요한 성능 지표입니다. 적절한 통계 방법과 충분한 반복 측정을 통해 과학적으로 입증되어야 합니다.
5. 완건성 및 시스템적합성

완건성은 분석 조건의 작은 변화가 시험 결과에 미치는 영향을 평가하는 항목으로, 방법의 신뢰성을 보장합니다. 온도, pH, 유기용매 비율 등 주요 변수를 의도적으로 변화시켜 평가합니다. 시스템적합성은 분석 기기와 방법이 적절하게 작동하는지 확인하는 일상적인 품질 관리 활동입니다. 두 항목 모두 분석 결과의 신뢰성을 보장하는 데 필수적입니다. 완건성을 통해 개발된 방법의 견고성을 입증하고, 시스템적합성을 통해 일상적인 분석의 품질을 유지하는 것이 중요합니다.