면역세포의 염색 및 조직 슬라이드 제작

본 내용은 " 면역세포의 염색 및 조직 슬라이드 제작 예비레포트(A+) " 의 원문 자료에서 일부 인용된 것입니다. 2023.11.04

문서 내 토픽

• 1. 조직의 고정법

  조직 고정은 세포를 살아있는 상태와 같이 보존하는 과정으로 열고정과 화학고정이 있습니다. 화학고정은 고정액을 처리하여 염색약이 세포막을 통과하도록 돕고 세포 내 단백질과 핵산을 교차결합시킵니다. 포르말린 용액을 사용하며 고정액의 양은 조직 용적의 10-20배 정도이고 저온에서 약 5시간 소요됩니다. 포르말린은 공기 중 산소나 빛에 의해 포름산이 발생할 수 있으므로 산화방지제 사용이 필요합니다.

• 2. 슬라이드 제작 과정

  슬라이드 제작은 고정, 탈수, 투명화, 파라핀 침투와 포매, 절편화, 파라핀 제거, 수화, 염색 과정을 거칩니다. 탈수는 알코올을 이용하여 물을 제거하는 전처리 과정이며 급격한 수축을 막기 위해 알코올 농도를 점진적으로 높입니다. 투명화는 자이렌을 사용하고 침투는 파라핀을 세포 내로 침투시켜 세포 구조를 유지한 채 박절이 용이하도록 합니다.

• 3. H&E 염색

  헤마톡실린과 에오신을 이용한 루틴염색으로 헤마톡실린은 양이온을 가진 염기성 염료로 DNA와 결합하여 핵을 청색으로 염색합니다. 에오신은 음이온을 가진 산성염료로 세포질과 결합조직을 분홍색으로 염색합니다. 염색 후 청색화 과정을 거쳐 색을 더 선명하게 하고 에오신과의 대조효과를 나타냅니다.

• 4. 면역항체 검출법

  면역항체 검출법은 항원과 항체의 결합을 이용하여 단백질을 분리하는 방법으로 민감도와 특이성이 높습니다. 웨스턴 블랏팅은 SDS-PAGE로 분리된 단백질과 형광 또는 효소 표지 항체를 결합시켜 특정 단백질을 파악합니다. ELISA는 효소가 결합된 항체를 사용하여 색이나 형광으로 단백질 존재 유무를 확인하며 간접 ELISA와 직접 ELISA로 나뉩니다.

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• 1. 조직의 고정법

  조직의 고정법은 병리학 검사의 가장 기초적이면서도 중요한 단계입니다. 적절한 고정은 조직의 자가분해를 방지하고 세포 구조를 보존하여 정확한 진단을 가능하게 합니다. 포르말린 고정이 가장 널리 사용되지만, 고정 시간, 온도, 고정액의 pH 등 여러 변수가 최종 결과에 영향을 미칩니다. 고정 과정에서의 작은 오류도 조직 변성, 항원성 손실 등을 초래할 수 있으므로 표준화된 프로토콜 준수가 필수적입니다. 현대 병리학에서는 신속 고정법 등 다양한 방법이 개발되고 있어 진단 효율성이 지속적으로 향상되고 있습니다.

• 2. 슬라이드 제작 과정

  슬라이드 제작은 조직 표본을 현미경으로 관찰 가능한 형태로 변환하는 핵심 과정입니다. 포매, 절편, 염색 등 각 단계가 정밀하게 수행되어야 고품질의 슬라이드가 완성됩니다. 특히 절편의 두께, 온도 조절, 염색액의 농도 등이 최종 이미지 품질을 결정합니다. 자동화 장비의 도입으로 일관성 있는 슬라이드 제작이 가능해졌지만, 여전히 숙련된 기술자의 역할이 중요합니다. 슬라이드 제작 과정의 표준화는 진단의 정확성과 재현성을 보장하는 데 필수적입니다.

• 3. H&E 염색

  H&E 염색은 병리학에서 가장 기본적이고 광범위하게 사용되는 염색 방법입니다. 헤마톡실린과 에오신의 조합으로 핵과 세포질을 명확히 구분하여 조직 구조를 효과적으로 시각화합니다. 이 방법의 단순성과 경제성, 그리고 우수한 조직 분화능은 수십 년간 표준 염색법으로 유지되게 했습니다. 다만 특정 미생물이나 물질 검출에는 한계가 있어 특수 염색이 필요한 경우도 있습니다. H&E 염색의 품질은 염색액의 신선도, 염색 시간, 수세 과정 등에 의존하므로 정확한 프로토콜 준수가 중요합니다.

• 4. 면역항체 검출법

  면역항체 검출법은 현대 병리학에서 진단 정확도를 획기적으로 향상시킨 기술입니다. 특정 항원에 대한 항체의 특이성을 이용하여 종양 표지자, 감염 병원체, 염증 매개물질 등을 정확히 검출할 수 있습니다. 면역조직화학, 면역형광, 면역전자현미경 등 다양한 방법이 있으며, 각각의 장단점이 있습니다. 이 기술은 암 진단, 분류, 예후 판정에 필수적이 되었으며, 표적 치료제 선택에도 중요한 역할을 합니다. 다만 항체의 특이성, 교차반응, 위양성 등의 문제를 최소화하기 위해 적절한 대조군 설정과 결과 해석이 필요합니다.