[분자생물학 실험] RNA extraction (RNA 분리)

소개

생물학과 분자생물학 실험 리포트 입니다.

목차

1. Title

2. Material

3. Principle
3-1. DNA와 RNA를 주형으로 쓰는 것의 차이
3-2. RT-PCR
3-3. Primer 제작

4. Method

5. Discussion

6. Reference

본문내용

1. 제 목
RNA Extraction

2. Material
Tissue, TRIzol kit, Chloroform, Isopropyl alcohol, DEPC-ethanol, SDS solution, DW.

3. Principle
[1] DNA와 RNA를 주형으로 쓰는 것의 차이
DNA 에서는 exon과 intron이 있으므로 DNA를 template로 하는 경우에는 exon과 intron이 모두 증폭될 수 있다. mRNA를 template로 하는 경우는 intron은 나오지 않는다. 하지만 intron은 exon에 비해서 대단히 크기 때문에 exon 중에 몇 개를 한꺼번에 증폭하려면 DNA로는 힘들게 된다. 더구나 intron sequence는 일부를 제외하고는 중요성이 떨어진다고 인식되어 밝히지 않은 것이 많아 GenBank에서도 찾을 수 없는 경우가 많다. 또한, mRNA는 같은 genomic DNA에서 유래하였다고 해도 splicing 방법에 의해 변화된 것을 찾을 수 있고, 각 조직마다의 expression 정도를 찾기에도 이용되며, 무엇보다 coding sequence만 연결된 구조를 원할 때 쓰인다. 돌연변이를 찾고자 할 때는 굳이 RNA를 template로 할 필요는 없다. 왜냐하면, 돌연변이는 거의 DNA의 변화에서 오는 것이기 때문이다.

[2] RT-PCR
PCR에 쓰이는 Taq DNA polymerase는 DNA를 template로 해서 DNA를 증폭하는 효소(DNA-dependent DNA polymerase)이므로 RNA로부터 직접 증폭할 수 없다. 따라서 RNA를 template로 할 경우는 일단 DNA로 복사한 다음 증폭한다.

참고자료

· Lehninger Principles of Biochemistry -4th Edition. Freeman
· Molecular Biology -Fox. Mcgrawhill