단백질 정량 실험

소개

단백질 정량법에 대한 간단한 소개와 함께 정량법의 종류, 및 종류에 따른 실험 절차등을 실험 보고서 형식으로 썼습니다. 실험 중간에 주의해야 할점 같은것을 기입했습니다. 주의 사항의 예중에서 spectro photometer를 이용하여 단백질 정량을 바로 할 수 없는 이유
같은 것들도 담았으니, 많은 참고 부탁드립니다. 또한 두번의 실험을 통해서 실험 데이터값,즉 흡광도아 standard curve를 그려본 자료와 실험에 대한 디스커션까지 완벽한 자료라고 생각되어집니다.

목차

1. 단백질 정량

2. 단백질 정량 관련 이론
(1) Lowry method
1) 실험 도구
2) 실험방법
3) 주의사항
(2) Bradford assay
1) 실험 도구
2) 실험방법
3) 주의사항

3. 실험방법

4. 실험결과

5. 고찰

6. 참고문헌

본문내용

1. 단백질 정량

단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로서, 대부분의 생화학실험의 기본 과저이라고 할 수 있다, 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에, 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한 정확성 뿐만 아니라 대부부느이 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로, 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다.


2. 단백질 정량 관련 이론
(1) Lowry method

- 단백질 정량에 있어서 Lowry 법의 감도는 비교적 넓게 적용되기 EOans에 오랫도안 광범위하게 이용되고 있다. 이 방법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu+ 이론을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. 발색의 정확한 기작은 밝혀지지 않았지만 Cu+ 이온은 방향족 암노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원 시킨다. 이러한 반응 결과 강한 푸른색을 생성하며 그 강도는 tryptophan과 tyrosine 양에 영향을 받는다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01~1.0mg/ml의 경우에 측정 가능하다.

1)시약 및 기구

- Lowry시약 : 시약 A : B : C를 100:1:1로 혼합하여 사용하며 매일 새로 혼합하여 사용한다.

. 시약 A : 2%(w/v)Na2co3 in distilled water

. 시약 B : 1%(w/v)CuSO4․5H2O in distilled water

. 시약 C : 2%(w/v)sodium potassium tartrate in distilled water

- 2N NaOH

- Folin reagent(시판되는 시약을 3배로 희석하여 사용)

- 감량곡선 작성 : 표준 단백질로서 BSA를 0~1.0mg/ml의 범위 내에서 여러 농도로 제조하여 실험 방법에 의하여 흡광도를 측정하여 최소제곱법에 의하여 검정곡선을 구한다.

참고자료

· 생화학 실험』 최병법, 방병호, 방선권 공저 (문운당) (실험전반내용)
· 최신생화학』 김을상, 이남철, 이재철, 전병영, 정동효, 정영철, 정재현 (신광문화사)
· 生化學』 ( 淸文閣 Frank B. Armstrong 강신원. 1992, )