Competent cell preparation & Transformation 실험

소개

Competent cell preparation & Transformation 실험보고서 입니다.

목차

#Title
#Purpose
#Material
#Method
Competent cell preparation
#competent cell 이란…….
#Transformation 이란…….
✽Competent cell을 이용한 Transformation의 과정
Step1>.
Step2>.
#Result
#Discussion
#Reference

본문내용

#Purpose
- DNA에 의해 형질이 전환되는 것을 알고, 세포 배양을 통해 다량의 DNA를 얻는 것이 이번 실험의 목적이다.

#Material
- Sample : DH5a
LB plate, single colony, 5ml LB broth, 37C shaking incubator, 100ml LB broth, 50ml tube, high speed centrifuge, TSS solution, 액체 질소, ligation product, water bath, centrifuge, X-gal, Amp Plate, Pipette, Tip, 알코올램프, 70%EtoH

#Method
<Competent cell preparation>
#competent cell 이란…….
legation을 마친 DNA나, CIRCULAR 형태의 PLASMID를 증폭하기 위해서 혹은 클로닝을 끝내고 완성된 vector가 있는데 그것을 expression하기 위해서 E.coli에 transformation을 해야 한다. 이때 E.coli가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 후에 열 충격이나 전기 충격을 주어 이루어지게 된다.
이렇게 E.coliI가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 세포를 competent cell이라고 한다. 박테리아는 cell wall을 가지고 있게 때문에 흐물흐물하게 만들어 주어 외부 DNA가 cell내로 쉽게 들어가도록 해준 상태의 세포를 말한다.

#Transformation 이란…….
유전자가 삽입된 vector(recombinant DAN)를 bacteria세포 내로 주입하는 과정, 즉 DNA를 세포에 주입하는 것이다.

참고자료

· Purves, William K., Sadava, David, Orians, Gordon H., Heller, H.Craig.
· 2001. Life-sixth edition. W.H FREEMAN AND COMPANY
· Berg, Jeremy M., Tymoczko, John L., Stryer, Lubert. 2002. Biochemistry.
· W.H.Freeman. 박인원 역. 2003. 생화학. 서울외국서적
· http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=QbMLRVBtZFPVxQw/74tv5zjbNAh2kpak&qb=REg1YQ==&pid=fMn/7doi5TGsscXz3cGsss--009304&sid=SOP9g3KQ40gAADfEbO0
· http://ynucc.yu.ac.kr/~mmblab/5-5.html
· http://home.donga.ac.kr/~mbgl/유전공학_2.htm
· http://www.elpisbio.com/html-sub/protocols/SDS-PAGE-gel.htm
· http://yasuar.hihome.com/wordhtm/proteinpront.htm
· http://takara.co.kr/catalogue2002/G/HA001.htm
· http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=8pzEG+4f7bj6MwOnvw1HRF10lY67D/ew&qb=VFNTIHNvbHV0aW9u&pid=fMdSlsoi5TGsssAJ90Ksss--295878&sid=SOQVbQgB5EgAAEHDzV0