Peptide Mass Fingerprinting 1 In-Gel Proteolytic Digestion

소개

참고하는데 도움이 될 것입니다

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재
7. 방법
8. 결과
9. 고찰
숙제

본문내용

8. 고찰:
이번 실험에서는 Peptide Mass Fingerprinting을 하기위해 protein mixture로부터 SDS-PAGE을 이용해 분리한 미지의 단백질 시료를 MALDI-TOF로 분석하기에 적절하게 만들기 위해 gel에 있는 단백질 시료를 denaturation 및 digestion 하였다. 다시말해 sample preparation을 했다. 미지의 단백질 동정은 proteomics같은 단백질 연구의 시발점이라고 할 수 있다. Proteomics가 대두된 이유는 첫째, mRNA의 발현으로 단백질의 발현을 예측할 수 없으며, 둘째, 단백질이 변형(methylation, phosphorylation, Ubiquitination 등등)된 것을 gene sequence에서는 알 수 없으므로 proteome을 연구하게 된 것이다.
peptide mass fingerprinting 을 통하여 밝혀 낸 단백질에 대한 연구는 Cells와 tissues에서의 환경이 변화함에 따라서 proteins들이 어떻게 생성되고 변화하며 상호작용하는지를 규명 하고 세포 내의 물질 대사를 비롯한 질병 등의 기작을 보다 정밀하게 이해할 수 있게 하였다.
이번 실험의 주요 목적은 MALDI-TOF에 사용하기 위하여 주어진 미지의 단백질을 적절하게 digestion하는 것이었다. 처음에 gel을 blade로 자를 때 keratin 성분이 들어가지 않도록 gloves를 끼고 말도 하지 않아야 했다. 이는 gel안으로 우리 몸에서 나오는 keratin 과 같은 각종 단백질들이 들어가거나 침에 들어있는 효소들이 들어가면 우리가 원하는 결과를 얻지 못할 수도 있기 때문이다.

참고자료

· wikipedia, 생화학실험 (1) 실험교본, ppt 강의자료