Alkaline Lysis의 원리

소개

Alkaline Lysis의 원리

목차

1. Alkaline Lysis의 원리
2. Material과 Procedure

본문내용

주로 miniprep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법 중 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkaline lysis method이다. 현재 손쉽고 빠르게 plasmid를 분리하도록 고안되어 상업적으로 시판되는 kit의 대부분이 alkaline lysis 법을 그 기본원리로 이용하고 있다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다.
이 방법은 plasmid를 지니고 있는 bacteria의 소량 배양으로 시작된다. Bacteria는 sodium dodecyle sulfate(SDS), NaOH를 함유하는 용액으로 처리하여 용균되어 진다. (여기서 SDS는 bacterial proteins을 변성시키며 NaOH는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 변성시킨다). 다음 potassium acetate를 첨가하여 혼합액을 중성화시키는데 이것은 covalently closed plasmid DNA를 빠르게 reanneal 시킨다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. chromosomal DNA와 bacterial proteins의 대부분은 침전되며(SDS는potassium과 화합물을 이룬다) 침전물은 원심분리로서 제거할 수 있다. plasmid DNA는 상등액에 남아있게 되고 ethanol 침전법으로 농축시킬 수가 있다.

참고자료

· 생물공학실험