SDS PAGE, Western blotting 자료!

소개

SDS PAGE,Western blotting에 관련된 기본적인 자료 입니다^^

목차

SDS-PAGE
1) SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리
2) SDS
3) Stacking gel과 running gel의 역할
4) Disulfide bond를 끊어주는 reducing agent

Western blotting
1.Chemiluminescent Detection
2.Bioluminescent Detection
3.Chemifluorescent Detection
4.Fluorescent Detection
5.Autoradiography
6.Colorimetric Detection

본문내용

SDS-PAGE
SDS-PAGE, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.

1) SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리
처음 단백질의 solution은 SDS를 첨가한 후에 분석된다. 이 비 이온화 detergent는 2차 구조와 disulfide bond에 의한 4차 구조를 denature 시킨다. 또한 단백질의 질량에 따라 일정 비율로 각 단백질을 – charge를 띠게 한다.

SDS가 없이는 분자량이 비슷한 다른 단백질들이 protein folding의 차이로 인해서 다르게 이동하는데, folding 방식의 차이에 따라 어떤 단백질들은 겔에서 다른 단백질보다 크기가 더 잘 맞아서 빠르게 이동할 수도 있다. SDS를 첨가함으로 이러한 문제점들을 해결하고 선형으로 단백질을 만들어 분자량(일차구조 또는 아미노산 수)의 크기에 따라 분리할 수 있게 된다. SDS가 단백질에 붙는 비율은 대략 1.4g SDS에 1.0g 단백질이다. 물론 그 범위는 1.1-2.2g SDS/g protein의 비율로 나타날 수 있다. 이 비율은 대략 전체 질량에 비례한다. 대부분 단백질은 이에 따라 오직 단백질의 사이즈만 겔 내 이동거리와 관련되어 겔 속을 움직이게 된다. Tracking dye가 단백질 solution에 첨가되어 실험에서 전기영동 시에 단백질의 이동을 구분할 수 있게 된다.

참고자료

· 없음