일반생물학 실험보고서-제한효소에 의한 DNA절단

소개

유전자 연구의 가장 기본적이고 필수적인 단계인 제한효소를 이용하여 유전자를 절단하는 실험을 했습니다. E.coil을 이용한 플라스미드 절단 실험이었구요.

다른 아이들에 비해 실험 결과가 정확하게 나와 조교에게 칭찬받은 결과이므로 큰 도움이 될 것입니다.

전기영동을 통해 얻은 그림자료와 그것을 정리한 표 및 그래프가 포함되어 있으며,
디스커션 파트에서는 실험 전반에 대한 이해를 높일 수 있는 몇가지 질문들과 그에 대한 연구가 포함되어 있습니다. 마찬가지로 사진자료 포함이구요.

분명 큰 도움이 될 것이라 확신합니다.

목차

Ⅰ. Introduction

1. 실험 목적

2. 실험 원리

(1) 제한 효소

(2) Methylation

(3) 회문 구조

Ⅱ. Materials & Methods

1. 단일 제한 (single digestion)

2. 중복 제한 (double digestion)

Ⅲ. Result
전기영동결과 얻어진 그림자료, 표, 그래프, 표 포함

Ⅳ. Discussion

1. 앞의 표에 나타난 제한효소 인식 부위를 참조하여 DNA의 이중나선을 EcoRI으로 제한하였을 때 잘린 부위의 염기서열은 어떤 형태를 하겠는가(양 가닥 모두를 고려함)?

2. DNA의 염기는 4가지 (A, T, G, C)로 되어 있다. DNA의 염기 서열 중 EcoRI부위가 발견될 확률은 얼마인가?

3. 전기영동 gel의 각 lane에 나타난 DNA 절편의 크기 합은 항상 동일해야 한다. 실제로 동일한가? 아니면 어떻게 설명하겠는가?

4. 전기영동의 결과 나타난 그림에서의 의문점


Ⅴ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction

1. 실험 목적

시험관 내에서 (in vitro) 유전자 조작을 행할 때 쓰는 가장 기본적인 도구인 제한효소 (restriction enzyme)와 제한효소의 제한기작을 알아보고 플라스미드를 제한 절편들로 잘라 다시 맞추는 과정을 수행한다.

2. 실험 원리

(1) 제한 효소
제한효소란 DNA 분자의 특정 염기서열을 인지하여 이중가닥 DNA를 절단하는 균주 특이성을 갖는 endonuclease이다. 이것의 원래 기능은 세포 내로 침입해 오는 virus나 외래 DNA를 절단, 제거함으로써 그것이 복제되는 것을 막기 위한 박테리아의 자기방어 기구라 할 수 있으며, 자신의 DNA는 methylation시켜 외부의 DNA와 구분하여 보호한다. 제한효소는 크게 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ군으로 분류되며 우리가 흔히 쓰고 있는 것들은 회문구조를 가진 짧은 염기쌍(4 - 6개가 가장 흔함)을 인식하는 Ⅱ군에 속하는 효소이다. 제한효소는 세균의 세포로부터 분리하여 실험실에서 유전자를 포함하고 있는 DNA 조각을 조작하는 데 사용할 수 있다. 이 때문에 제한효소는 DNA 재조합 기술에서 필수적인 도구로 사용된다.
제한효소는 각기 알맞은 반응 조건을 가지며 반응 완충액 (reaction buffer)의 경우 염의 농도에 따라 low, medium, high salt buffer로 나누어진다. 이외에도 pH, 반응 온도, DNA와 효소의 양 등이 변수로 작용한다. 제한효소는 뉴클레오티드 염기들(이중나선의 DNA 분자를 이루는 4가지 기본 단위인 아데닌시토신티민구아닌)의 짧은 특정 배열을 인식한다. 이러한 부위들은 인식 배열(recognition sequence)이라 부르며, DNA 전체에 무작위적으로 분포하고 있다. 세균의 종류에 따라 제한효소가 인식할 수 있는 뉴클레오티드의 배열이 모두 다른데, 몇 가지 주요 제한효소의 인식 부위와 제한 조건들은 다음과 같다.

참고자료

· ★`회문`에 대한 Daum 백과사전 검색
· http://enc.daum.net/dic100/viewContents.do?&m=all&articleID=b25h2909a
· ★`제한효소`에 대한 Daum 백과사전 검색
· http://enc.daum.net/dic100/viewContents.do?&m=all&articleID=b19j2015a