단백질 정량 분석

소개

단백질 정량 분석에 관한 실험 방법

목차

introduction
BCA법
분광법
분광광도법과 Beer-Lambert법칙
분광광도계의 구조
분광광도법의 응용 - 정량분석
Materials and Methods
Methods

본문내용

Introduction

BCABicinchoninic acid는 2개의 carboxylated quinoline ring 구조로 되어있는 약산이다.
Bicinchoninic acid는 생화학자들이 용액의 단백질 농도를 결정하기 위해 BCA 분석실험에 자주 사용하는 물질이며 이 실험과정에서 2개의 bicinchoninic acid chelate는 1개의 Cu1+이온과 결합하여 562nm 파장의 빛을 강하게 흡수하는 물에 녹을 수 있는 보라색 complex를 형성한다.

Bicinchoninic acid Bicinchoninic acid chelate 와 Cu1+이온의 결합물

Molecular formula: (HO2CC9H5N)2
Molar mass : 344.33 g/mol
외관 : 크림색의 가루, 특징적인 냄새
녹는점 : 365~367℃
주의점 : 눈과 점막을 자극한다. 화학적 물리적 독성.


BCA법
단백질 농도를 정량 하는 방법에는 UV법, Lowry법 BCA법, Bradford법 등이 있다. 각각의 감도, 간편함, 단백질의 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용농도 및 반응액의 pH등에 차이가 있으므로 측정할 대상에 따라 적당한 방법을 선택하여야 한다.
BCA법은 Lowry법을 계량한 것으로 Folin 시약의 반응대신에 Bicinchoninate(BCA)가 Cu1+와 복합체를 형성해 자색으로 발색하는 반응을 이용한다. Lowry법과 비교해서 방해물질 특히 계면활성제의 영향을 받지 않고 감도, 신뢰성, 직선성, 모두 향상되어 있으며 Bradford법과 함께 현재 가장 널리 이용되어지고 있는 방법이다. Peptide결합과 적자색의 complex를 형성하기 때문에 이것을 분광 광도계로 측정한다. 감도는 낮지만(1~10mg/ml) 단백질의 종류에 따른 발색의 차이가 적고, 계면활성제의 영향을 잘 받지 않는다. 또한 반응액이 알칼리성이기 때문에 homogeneity와 같은 지질을 많이 함유하고 있는 샘플도 가용화 되어 그대로 측정이 가능하다. 농도에 비례해서 초록색에서 보라색으로 색이 변화되므로 colorimetric technique를 이용하여 용액의 단백질 농도를 측정할 수 있다.
BCA 분석실험은 2개의 반응에 의지한다. 첫째로, 단백질에 있는 펩티드 결함은 황산구리염의 Cu2+이온을 Cu1+로 환원시킨다. Cu2+이온의 환원된 양은 용액에 존재하는 단백질의 양과 비례한다. 다음으로 2분자의 bicinchoninic acid chelate와 Cu1+이온의 결합은 562nm파장의 빛을 강하게 흡수하는 적자색 물질을 형성한다

참고자료

· 인터넷
· http://www.biochemie.de/publi/bca1.htm
· http://en.wikipedia.org/
· 서적
· 단백질 실험노트 (월드사이언스) 역자 김승호 외 p.38
· 실험생화학 개정3판 (탐구당) 한국생화학회 p.53~p.61
· 기기분석 (대한교과서) 이대운 외 p.195~p.196