[생물공학실험]IPTG induction & SDS-PAGE

소개

생물공학실험때 제출했던 레포트 입니다.
IPTG 처리하여 induction시킨 뒤 SDS-PAGE로 발현된 단백질을 확인하는 실험에 관한 레포트 입니다.
원리 정리 잘 되있으며 좋은 점수 받은 레포트이니 많은 도움 되시기 바랍니다. *^^*

목차

실험날짜
실험목적
실험원리
1. structural gene
2. regulatory gene
3. allolactose
4. lac operon is off
5. lac operon in action
6. induction 목적
7. 과량 발현의 방법
8. IPTG induction 이란?
9. SDS-PAGE
실험방법
실험원리
Discussion

본문내용

실험목적:
IPTG(Isopropyl-β-D-Thiogalactopyranoside)을 이용하여 protein을 induction하여 expression시키는 방법을 습득하고자 함이다.
실험원리:
1. structural gene
◆ β-galactosidase (lacZ): lactose를 glucose와 galactose로 가수분해한다.
◆ lactose permease (lacY): 외부에 존재하는 lactose를 cell 안으로 transport하는 transmembrane protein
◆ galactoside transacetylase (lacA): no known function in lactose metabolism
2. regulatory gene
◆ lac repressor (lacI) : lactose가 존재하지 않을 때 operator DNA site에 결합하
여 lac operon의 transcription을 repress하는 단백질
◆ lac promoter (lacP): RNA polymerase가 lac operon에 binding하는 DNA site
◆ lac operator (lacO): lac repressor가 binding하는 DNA site
◆ Pi: lacI의 promoter
◆ CAP: cAMP/CAP complex의 binding site
3. allolactose
◆ Glucose가 존재하지 않을 때 lactose는 세포 내로 들어가 세포 내에 적은 양으로 존재하는 β-galactosidae에 의하여 lac operon에 대한 natural inducer인 allolactose로 전환된다. Allolactose는 repressor에 결합하여 repressor의 3차 구조를 변화시킴으로써 더 이상 operator site에 결합하지 못하게 된다.
4. lac operon is off
◆ lac operon은 인접해 있는 lac repressor를 코드하는 I gene에 의해 조절 받는다. lacI gene은 자체의 promoter (poor promoter이므로 E. coli 내에 repressor 분자가 적게 존재)로부터 constitutive하게 발현된다. Repressor는 promoter와 겹쳐 위치하는 operator site에 결합한다......

참고자료

· 없음