E-coli plasmid DNA 분리 실험보고서

소개

E.coli plasmid DNA 분리 실험 보고서 입니다.
Alkaline lysis 방법에 의한 plasmid DNA miniprep에 관한 내용입니다.

목차

1. 플라스미드(plasmid) 란?
2. Plasmid DNA 정제 방법의 종류
3. Alkaline lysis에 의한 정제 방법
4. 실험재료
5. 실험과정
6. 실험결과
7. 실험고찰

본문내용

1. 플라스미드(plasmid) 란?

플라스미드는 외부염색체 DNA분자를 작은 염색체로 전이 이동시키는 것이다. 정의에 따라 플라스미드는 복제단위(replicon)로써 외부염색체 상태에서 안정적으로 유전되는(특별한 분리 없이 유지되는)물질 이다. 전부는 아니지만 대개의 플라스미드는 세포의 생존에 꼭 필수적인 것은 아니다. 그러나 항생제가 존재하는 여러 경우에서는 생존에 필수적인 존재가 되기도 한다.

2. Alkaline lysis에 의한 정제 방법

Solution I 조성 및 특징
-세포벽을 깨며, 이때 세포막은 유지되도록 한다.
-10mM EDTA :세포벽의 integrity를 유지하는데 필수적인Ca2+, Mg2+ion을
제거하여 세포벽이 군데군데 무너지게 한다.
-50mM glucose : 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시켜 준다
-25mM Tris-Cl, pH 8.0 : buffer의 역할을 한다.

Solution II 조성 및 특징
-1% SDS (Sodium dodecylSulfate): 세포막의 지질 제거
(음전하를 띄는 계면활성제역할)
-0.2N NaOH: 세포외 환경을 alkali로형성: Chromosomal DNA, Plasmid DNA,
단백질등을 변성: 하지만 Plasmid DNA는 크게 손상을 입지 않음

Solution III 조성 및 특징
-5M Potassium acetate, Glacial acetate에 의해 pH가 6.5~7.5로 변함.
변성된plasmid DNA가재생됨.
-Chromosomal DNA는 정확한 재생이 않 되고 덩어리 형태로 단백질들과 엉클어짐

참고자료

· 없음