[생명과학]Transfection - DNA into Cells

소개

서울대 생명과학실험 1 레폿입니다.

목차

‣ 실험 절차상의 개선과 문제점
‣ Discussion

본문내용

‣ 실험 절차상의 개선과 문제점

i. mammalian culture cell line 실험을 하면서 contamination을 방지하는 것이 중요하다는 것을 알게 해주는 실험이었다. polyglove를 끼고 하나 하나의 실험 과정에서 새 pipette tip을 사용했지만 가장 미묘한 공기 사항인 중에서의 오염을 막지 못하여 결과가 나오지 못한 것이 아닌가 생각해 보았다.

ii. step ④에서 HBS를 drop by drop의 방법으로 넣는 이유
HBS는 PO 와 NaCl등을 포함하는 buffer로서 DNA-CaCl2와 만나서 aggregation하게 하는 solution이다. (Ca cation과 Po anion이 DNA와 co-precipitating 되어 mammalian cell membrane에 부착되면 endocytosis 될 수 있다.)문제는 cell이 endocytosis하는 particle의 크기에 있는데(cell은 크지도 작지도 않은 적당한 크기의 particle만 endocytosis한다.) HBS의 농도가 갑자기 크게 증가하면 대체로 큰 DNA-Phosphate particle이 만들어지게 되므로 endocytosis 의 효율이 떨어지게 된다. 그러므로 particle의 크기를 even하게 보장하기 위해서 drop by drop method를 쓰는 것으로 보인다.

‣ Discussion
I. Chloroquine이 들어있는 media를 4시간 후에 fresh media로 갈아주어야 하는 이유는?
Chloroquine Diphosphate는 endolysosom의 acidification을
막고 lysosomal protease인 cathepsin B의 작용을 막는 아민
derivatives이다.(Wibo and Poole 1974) 그러나 이 물질은
동전의 양면과 같이 어떤 cell line 에서는 transfection의
효율을 증가시키지만 다른 종에서는 오히려 더 떨어뜨린다는 보고가 있다.(Chang 1994) endolysosome으로 들어간 외부

참고자료

· 없음