이화여대 생명과학실험2 A+ 레포트_ Real time 유전자 PCR을 이용한 유전자 발현 분석

소개

A+ 받은 레포트 입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
II. Result
III. Discussion
Ⅳ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. Introduction
1-1. RNA sequencing
RNA sequencing은 차세대 염기서열 분석(NGS) 기술을 활용하여 특정 시점의 생물학적 샘플 내 모든 transcriptome의 존재 여부와 양을 밝혀내는 기술이다. 기존의 microarray나 Sanger 기반의 Expressed Sequence Tag 분석과 같은 방식보다 훨씬 높은 해상도와 넓은 동적 범위로 lowly expressed와 highly expressed 유전자 모두를 정확히 측정 가능하다. 또한 단순히 유전자 발현량을 정량화하는 것을 넘어 새로운 전사체를 발견하고 alternative splicing 및 대립유전자 특이적 발현을 분석하는 데에도 활용될 수 있다는 장점이 있다.
RNA-seq의 실험 단계는 크게 RNA 추출 및 정제, cDNA 합성 및 라이브러리 제작, 시퀀싱으로 나눌 수 있다. 먼저 RNA 추출 및 정제 단계에서는 세포 또는 조직 샘플에서 전체 RNA를 추출한다. 이 과정에서 genomic DNA와 같은 불필요한 분자를 제거하여 순수한 RNA를 확보하는 것이 중요하다. 그러나 추출된 RNA 중 약 90%는 리보솜 RNA로 구성되어 있어 전사체 분석에 방해가 된다. 따라서 분석 목적에 따라 mRNA의 polyA 꼬리를 선택적으로 분리하기 위해 oligo-dT 비드를 사용하거나 rRNA 제거 프로토콜을 적용하여 필요한 RNA를 농축한다.
두 번째로 cDNA 합성 및 라이브러리 제작 단계에서는 정제된 RNA를 역전사효소를 이용해 cDNA로 전환한다.

참고자료

· Kukurba, K. R., & Montgomery, S. B. (2015). RNA sequencing and analysis. Cold Spring Harbor Protocols, 2015(11), 951–969.
· https://doi.org/10.1101/pdb.top084970
· Sigma-Aldrich. (n.d.). Northern & Southern blot protocols. Retrieved September 18, 2025, from
· https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/technical-documents/protocol/protein-biology/gel-electrophoresis/southern-and-northern blotting
· Bradburn, S. (2018, July 4). Random primers or oligo(dT) primers for cDNA synthesis?Top Tip Bio. https://toptipbio.com/cdna
· synthesis-primers/
· Thermo Fisher Scientific. (n.d.). Choosing an endogenous control for gene expression analysis using real-time PCR (qPCR). Thermo
· Fisher Scientific. https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/gene
· expression-analysis-real-time-pcr-information/choosing-endogenous-control-gene-expression-analysis-real-time-pcr.html
· International Atomic Energy Agency. (2020, March 27). How is the COVID-19 virus detected using real time RT-PCR?International
· Atomic Energy Agency. https://www.iaea.org/newscenter/news/how-is-the-covid-19-virus-detected-using-real-time-rt-pcr