sogang 1-1 full report

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. References

본문내용

Abstract
위 실험에서는 pTTQ18 vector에 속해있는 E.coli를 Thermus aquaticus (;Taq) DNA Polymerase가 준비한 후에, IPTG(;Isopropyl β-D-thiogalactoside)을 이용해 목적 단백질 과발현을 진행했다. 정제한 후에, Polymerase Chain Reaction (;PCR) 전기영동을 이용해서 확인해보았다. 위 실험에서는 목적단백질 합성을 위하여 대장균을 사용하였다. 열에 강한 생물로부터 유래되어진 단백질이 Taq DNA polymerase이다. 고온에서도 단백질 Denaturation이 잘 발생하지 않는다. 그러므로 Polymerase chain reaction(;PCR)에서도 변성되어지지 않기 때문에 위 실험 속에서 DNA중합효소로 적용했다. 목적 단백질의 과발현이 성공된 대장균에서의 목적 단백질을, 정제시켜내기 위해 위 실험에선 cell disruption을 진행해 세포막과 세포벽을 파괴했다. Enzymatic method, Detergent method을 선택했다. 후에 용해도를 통해 목적 단백질만 분리해내기 위해 황산 암모늄(Ammonium sulfate)을 salt로써 이용했다. salting out을 통해 침전시켰다. 후에 salting out에 쓰였던 불순물 제거를 위해서 protein dialysis을 했다. 정제를 끝낸 목적 단백질 Taq DNA Polymerase의 희석한 농도를 다르게 하여 PCR, 전기영동(electrophoresis)을 통하여 DNA 증폭 여부를 보았다. 전기영동으로 확인한 DNA band에서는 PC(;positive control), 1/256x를 제외하고 다른 band는 확실한 결과를 볼 수 없었다. 이 결과에 대한 원인으로는 높은 농도로 희석한 경우(1x, 1/4x, 1/16x, 1/64x)엔 목적유전자가 다른 위치에서 결합해 밴드

참고자료

· Reece, Wasserman, Minorsky, Jackson et al, 2016, Campbell Biology, 11th ed., New York : Pearson, pp.410-421.
· Mullis, K.B. and Faloona, F.A. 1987. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction.
· Kaledin, A.S. and Kaledin, V.I. , 2013. DNA polymerases and PCR. In DNA Polymerases: Discovery, Characterization and Functions in Cellular DNA Transactions ,pp. 347-366)