sogang 2-3 full report

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. References

본문내용

I. Abstract
위 실험은 HindⅢ, NdeⅠ의 제한 효소를 가지고 cut한 insert DNA를 pET-21a vector에 넣어 ligation한 생성물로 Escherichia coli DH5α competent cell 형질전환을 했다. 벡터가 가진 ampicillin 저항으로 콜로니 선별, 배양한 cell을 kit를 통해서 mini-prep (;mini scale plasmid DNA prep)로 DNA추출을 진행했다. 후에 HindⅢ, NdeⅠ을 통해 DNA의 절단을 진행하고 전기영동을 통해 vector랑 insert의 분리를 목표로 한다. Ligation이란 DNA ligase를 통해 핵산끼리 phosphodiester bond를 이용해 DNA의 연결을 이끌어내는 과정이다. 말단에서 상보적 서열을 지닌 DNA는 서로 양끝이 연결되어지는 self-ligation이 발생할 수 있다. 위 실험에선 이것을 막으려 제한효소 2종류를 쓰는 Double-digesstion을 했다. 위 실험에선 ampicillin 저항 gene을 가지는 pET-21a vector를 통해 ampicillin의 저항성을 가지는 콜로니의 선별을 진행했다. 박테리아 cell에서의 플라스미드를 추출해내는 방법이 Mini-prep이다. 크게 manual과 kit인 방식으로 나뉘고 위 실험에선 후자를 택했다. Kit는 chaotropic salt로, 실리카막과 DNA사이에 salt bridge의 형성으로 membrane-DNA 결합의 촉진을 이끈다. Wash buffer로 불순물을 제거하고 높은 pH 및 낮은 salt의 특징을 가지는 Elution buffer로 plasmid elution을 진행한다. 제한효소로 특이적 염기서열의 인식을 통해 DNA의 cut을 하고 DNA 인산의 골격 음전하의 특징을 사용해 전기영동에서 DNA를 분리한다.

참고자료

· Geoffrey M. Cooper, 2013, The Cell: A Molecular Approach, 6th ed, WORLD SCIENCE Co, pp 101-121
· Kenneth W. Raymond, 2019, General, Organic & Biological, 4th ed, WORLD SCIENCE Co, pp 95-118
· Campbell et al, 2016, Biology, 11th ed., New York, Pearson, pp 311-358