[중합 효소 연쇄반응(PCR), Ligation, Trans] 중합 효소 연쇄반응(PCR), Ligation, Transformation

소개

중합 효소 연쇄반응(PCR), Ligation, Transformation
PLASMID DNA의 소량분리에 실험 방법과 실험 결과 작용원리 기전, 분석에 대해 종합적이고 체계적으로 정리한 자료입니다. 평가에서도 좋은 점수를 받은 만큼 이 부분에 관심을 가지신 분들에게 많은 도움이 되리라 생각합니다.

목차

1. 중합 효소 연쇄반응(PCR),
2. Ligation,
3. Transformation
4. PLASMID DNA의 소량분리

본문내용

PCR반응은 크게 denature, annealing, renature과정으로 구성되어있으며 이는 자동화된 기계와 높은 온도에서도 효소 활성을 갖는 Taq polimerase를 통해서 손쉽게 시행 할 수 있었다. 이 첫 번째 실험은 비교적 간단하여 protocol에 나와있는 대로 시약을 넣고 정확에게 파이펫을 사용한 결과 예상했던 결과가 잘 나왔다. 증폭이 되었는지 확인하는 방법으로는 전기영동의 방법을 사용하였는데 Result의 첫 번째 사진을 보면 특징적인 한 개의 band가 굉장히 두껍고 밝게 빛나고 있는 것을 보면 알 수 있다. 이를 통해 우리가 얻고자 하는 특정 유전자가 증폭이 되어있다는 사실을 알 수가 있다.
이어서 이렇게 얻어진 유전자를 벡터를 이용한 방법으로 세균을 이용해서 증폭을 해보는 실험을 하였다. Vector는 크게 plasmid와 박테리아 파지, cosmid가 있는데 각각의 벡터는 그 종류마다 넣을 수 있는 유전자의 크기가 제한되어있으므로 실험의 종류와 목적에 따라 다른 것을 선택해서 사용한다. 일반적으로 plasmid 벡터는 크기가 5kb이상인 유전자를 삽입할 수 없다.

참고자료

· http://user.baitop.co.kr/~chemi/lab/bio/data/view.php?number=11
· http://genetics.hannam.ac.kr/lecture/GELab2002/GELAB23-transforamtion.htm