[A+ 결과보고서]생화학실습_ DNA Gel Electrophoresis 및 제한효소를 이용한 절단

소개

"[A+ 결과보고서]생화학실습_ DNA Gel Electrophoresis 및 제한효소를 이용한 절단"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
실험9(박테리아에서의 플라스미드 DNA 분리)에서 얻은 플라스미드(pUC19)를 제한효소 처리하여 전기영동한다. 추가로 실험10(PCR 실험)에서 GAPDH 유전자의 mRNA 로부터 합성된 cDNA 를 주형으로하여 약 500 bp 크기의 특정 DNA 단편도 전기영동하였다.

2. 이론
1) 제한효소
제한효소는 특정한 염기서열을 인식하여 그 부위를 절단하는 endonuclease 의일종으로, 주로 세균에서 유래된다. 이 효소는 세균이 외부에서 침입한 바이러스 DNA 를 인식하고 분해하여 스스로를 보호하는 자기방어 시스템의 구성 요소이다. 제한효소는 특정 염기서열을 정확히 인지하고, 그 부위의 포스포다이에스터 결합을 물과 함께 가수분해(hydrolysis)함으로써 DNA 의 이중가닥을 절단한다. 이때 Mg2+가 가수분해 반응에서 필수적인 보조인자(cofactor)로 작용한다.[8] 한편, 세균은 자기 자신의 DNA 가 제한효소에 의해 잘리지 않도록 같은 인식서열에 메틸기(-CH₃)를 붙이는 메틸레이즈(methylase)라는 효소도 함께 가지고 있다. 메틸레이즈는 DNA 의 특정 염기에 메틸화를 통해 보호 신호를 부여함으로써, 제한효소가 자기 DNA 는 인식하지 못하고 외래 DNA 만을 절단하도록 만든다.[15] 이중나선 구조의 플라스미드를 제한효소로 처리하면, 해당 제한효소가 인식하는 특정 염기서열에서 양쪽 가닥을 동시에 절단하여 선형 DNA 로 변환시킨다. 이때 생성되는 DNA 말단은 제한효소의 종류에 따라 평활 말단(blunt end)또는 sticky end 을 가질 수 있으며, 이러한 말단은 다른 DNA 단편과의 연결(ligation)에 사용된다. Sticky end 는 제한효소가 DNA 를 자를 때, 두 가닥을 서로 어긋나게 절단하여 생성된 돌출된 단일가닥 말단을 말한다. 이러한 말단은 상보적인 염기서열을 가진 다른 DNA 조각과 수소 결합을 통해 쉽게 결합할 수 있어, 유전자 클로닝 등에서 다른 DNA 단편과의 연결(ligation)에 매우 유리하다.[23]

참고자료

· thermofisher, Nuclease-Free Water (not DEPC-Treated)
· Wikipedia, Parafilm
· 위키백과, 비커
· Wikipedia, Buffer solution
· Wikipedia, Centrifuge
· Wikipedia, BamHI
· Wikipedia, Ethanol
· Wikipedia, Magnesium in biological systems
· Wikipedia, palindromic sequence
· Wikipedia, Complementary DNA (cDNA)
· Wikipedia, Incubator (culture)
· 위키백과, 피펫
· Wikipedia, Microcentrifuge tube
· Wikipedia, Primer
· Wikipedia, Restriction enzyme
· Wikipedia, Agarose gel electrophoresis
· Wikipedia, gel electrophoresis
· Wikipedia, TAE buffer
· Wikipedia, DNA ladder
· Wikipedia, Erlenmeyer Flasks
· Wikipedia, Agarose
· Nippongenetics, MIDORI Green Advance
· Wikipedia, Sticky and blunt ends
· Wikipedia, Restriction enzyme types
· Wikipedia, Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase
· Wikipedia, Base pair