생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 8. 단백질 분리 및 정량

소개

생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 8. 단백질 분리 및 정량 관련 리포트입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 재료 및 기구

3. 방법

4. 실험 결과

5. 실험 원리(배경) 및 실험 고찰
가. 실험 원리(배경)
나. 실험 고찰

6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
웨스턴 블로팅을 위하여 세포를 용해한 후 단백질을 분리한다.

2. 실험 재료 및 기구
파이펫에이드, 10 ml 파이펫, 원심분리기 (4°C), 얼음, Lysis buffer, scraper, 1.5 ml tube, 1 ml 파이펫, PBS (phosphate buffered saline), 세포(LNCaP)

3. 방법
① 세포가 있는 배양접시에서 배지를 버리고, ice-cold PBS 10mL를 사용하여 세포를 씻는다.
② PBS를 버리고, ice cold lysis buffer 100µL를 추가한다.
③ 세포 scraper를 이용하여 세포를 긁어낸다.
④ 마이크로 원심분리기 튜브 내에 세포를 수집한다.
⑤ 마이크로 원심분리기 튜브 내의 내용물을 4℃에서 20분간 교반한다.
⑥ 튜브를 4℃ 14,000 rpm에서 15분간 원심분리한다.
⑦ 상층액을 깨끗한 튜브에 수집한 뒤 ice에 두고, Pellet은 버린다.
⑧ -20℃에 얼려 보관한다. (장기간 보관할때는 -80℃에서 보관한다.)

4. 실험 결과
웨스턴 블로팅을 위해 세포를 lysis buffer를 통해 용해한 후, 원심분리기를 통해 단백질을 분리하는 실험을 진행했다.

4℃ 14,000 rpm에서 15분간 원심분리 하고, 원심분리에 의해 분리된 Pellet과 상층액을 분리했다. 이후, 단백질이 함유된 상층액만을 분리하여 -20℃에 얼려 보관하였다.

참고자료

· 신경옥, ”생화학 실험”, 국내서 단행본, 서울: 파워북, 2014, p.126-133
· 이종호, “의생명과학 실험서. 상권”, 국내서 단행본, 서울 : 라이프사이언스, 2021, p.4-11, 22-24