(A+레포트)[화공생물공학단위조작실험1] 5.단백질 정량법 비교(BCA, Bradford)(결과)

소개

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목차

1. Results
2. Discussion
3. References

본문내용

(1) 실험 결과 분석
본 실험은 두 가지 단백질 정량법인 BCA Assay와 Bradford Assay를 이용하여 미지시료의 단백질 농도를 측정하는 실험이다. 두 정량법 모두 시료의 흡광도를 측정하여 단백질의 농도에 대한 흡광도 그래프를 이용한다. 그리고 흡광도는 투과율의 음의 상용로그 값을 가지기 때문에 농도와 흡광도는 선형적으로 비례한 관계를 가진다. 각 정량법에 대하여 각 농도별로 2개씩 총 2set의 시료를 제작하였고, 흡광도 측정을 반복하여 가장 이상적인 결과값(Blank의 흡광도가 0으로 수렴하고 시료 A~D의 흡광도가 선형적으로 감소하는 값)을 선택하여 사용하였다.
결과 분석을 위해 측정된 흡광도 값을 plot하고 BSA 농도를x축, 흡광도를 y축으로 하는 추세선을 그려 식을 얻어냈다. 추세선의 R2 값이 1에 가까울수록 정확도가 높다고 판단할 수 있다. BCA assay와 Bradford assay 추세식의R2 값은 각각 0.9519와 0.9493로 둘 다 유의미한 결과로 볼 수 있으며 BCA assay의 결과가 더 정확하게 나오는 것을 알 수 있다. 또한 두 그래프 모두 선형적인 모습을 나타내었다. 일반적으로 미지시료의 정량 분석 시 서로 다른 단백질 간의 반응 차이를 보이지 않고 WR-SDS 복합체를 형성하지 않기 때문에BCA Assay가 더 적절하다.
추세선 방정식의 y에 측정한 sample의 흡광도 값을 대입하여 BSA 농도 x를 계산해보았다. BCA Assay에서 미지시료의 BSA 농도는 16.7666 µg/mL, Bradford Assay에서 미지시료의 BSA 농도는 14.1345 µg/mL로 구할 수 있었다.

참고자료

· 류승훈 외 3인, “화공기초실험”, 휴먼싸이언스, 2012, pp.126~132.
· 박철호 외 9인, “생명공학실험서”, 강원대학교 출판부, 2009, pp. 34-38
· 함경수 외 1인, “펩타이드/단백질공학: 펩타이드 및 단백질 실험노트”, 전통식품첨단화인 력양성사업단, 2007, pp.55-59.
· C.S James, “알기쉬운 식품분석학”, 광문각, 2001, pp.67-136.