생화학실험 SDS-PAGE gel 제조 및 Electrophoresis 결과보고서

소개

생화학실험 SDS-PAGE gel 제조 및 Electrophoresis 결과보고서 입니다.

목차

1. 시약 및 기구
2. 실험 방법
3. 결과

본문내용

4. 실험 방법
4-1. SDS-PAGE gel 제조
<Seperating Gel (Lower gel) % 선택>
5% 100-300 kDa
7.5% 40-250 kDa
10% 20-200 kDa
12% 14-150 kDa
15% 4-100 kDa

1. 전기영동 키트의 고유한 방법에 따라 유리판을 casting한다.
2. Stacking gel과 running gel 용액을 준비한다. Mini-gel (10x8cm, 0.75mm thick)의 경우 running gel 5 ml과 stacking gel 3 ml이 소요된다.
3. Running gel 용액에 ammonium persulfate(APS)와 TEMED를 첨가한 후 거품이 나지 않을 정 도로 신속히 섞고 pipette을 사용하여 조심스럽게 유리판 사이의 공간에 붓는다.
4. Stacking gel의 높이를 고려하여 running gel용액을 부어준 후 그 위에 증류수를 조심스럽게 가해준다 (이는 running gel의 윗표면을 고르게 해주는 효과 외에 공기를 차단하여 산화방 지와 gel이 고르게 중합되게 하기 위한 것이다). Gel이 굳을 때까지 방치한다.
5. Gel이 굳으면 상층에 가한 증류수와 acrylamide사이에 뚜렷한 경계가 보이는데 이때 증류수 를 제거한다.
6. 미리 준비해 놓은 stacking gel 용액에 ammonium persulfate(APS)와 TEMED를 첨가한 후 신 속히 섞고 pipette을 사용하여 조심스럽게 유리판 사이의 공간에 붓고 comb을 끼운다. 주의 : gel 내부, 표면, comb과 gel 사이의 기포는 전기영동결과를 얻는데 치명적이므로 세심 한 주의가 필요하며 특히 comb밑의 기포를 주의해야 한다.
7. Gel이 다 굳으면 흐르는 물에 적셔 조심스럽게 comb을 빼낸다.

참고자료

· 없음