HPLC(High Performance Liquid Chromatography) 원리 및 이론 정리

소개

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목차

1. 크로마토그래피 원리
2. TLC(Thin Layer Chromatography)의 원리
3. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)의 원리
4. 외부표준법(ESTD) 및 내부표준법(ISTD) 원리 및 계산식
5. HPLC의 구조 및 Caffeine 정량 method
6. 이동상 제조
7. HPLC 안정화 작업
8. HPLC 컬럼
9. Detector의 종류
10. 복잡한 시료의 전처리(SPE처리법)
11. 결과분석

본문내용

․ HPLC란?

고성능액체크로마토그래피(high performance liquid chromatography)는 이동상으로 액체를 사용하여 고성능으로 물질을 분리해내는 분석기법이다. HPLC에서 시료는 고정상과 이동상에 대한 친화력의 차이에 의하여 분리되는데 주로 흡착, 분배, 이온교환, 크기배제작용 등의 차이에 의하여 분리된다. 특히 HPLC는 기체 상태의 시료를 분서하는 GC와 달리 액체 상태에서 시료를 분석하기 때문에 응용폭이 매우 넓어 실제 의약품 분석에 가장 널리 사용되는 방법이다.
HPLC에서는 대개 입자경이 3~10㎛ 정도로 작은 입자가 치밀하게 충진 된 스테인레스 컬럼을 이용하여 물질을 분리한다. 이를 다양한 종류의 검출기(Detector)로 인식하여 시간의 함수로 기록된다.

◎ 고정상 : 컬럼 내 충진된 물질, 즉 충진제를 말하며 충진제와 시료성분과의 흡착, 분배, 이온교환, 분자크기 배제 등의 작용에 의해 혼합물이 단일물질로 분리가 일어나는 곳이다.
◎ 이동상 : 시료성분을 주입구에서 검출기까지 이동시켜주는 역할을 하며, 분석시 시료 성분들 간의 분리 정도에도 영향을 준다.

․ 펌프(Pump)
: 이동상을 용매병에서 끌어내어 시료주입기로 연속적으로 밀어준다.

․ 시료주입기(Injector)
: 분석하고자 하는 시료를 이동상의 흐름에 실어준다.

․ 컬럼 & 컬럼오븐(Column & Column oven)
1) 컬럼(Column) : 혼합 상태의 시료를 화학적 또는 물리적 특성에 따른 머무름의 차이에 의해 분리한 다.
2) 컬럼오븐(Column oven) : 분리능 향상 및 분석 결과의 재현성 보장을 위해 컬럼 온도를 적절하게 설정 및 유지한다.

․ 검출기(Detector)
: 컬럼에서 분리된 시료의 성분이 Detector를 통과할 때, 성분의 유무 또는 그 양을 일정한 규칙에 의해 인식하여 전기적인 신호로 변환한다.

참고자료

· 없음