[생명과학실험]pGal을 활용한 대장균 형질전환

소개

"[생명과학실험]pGal을 활용한 대장균 형질전환"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론 및 원리
1) 박테리아의 형질 전환
2) 형질전환능
3) 플라스미드 사용한 박테리아의 형질 전환
4) 대장균의 젖당 오페론

3. 실험 기구 및 시약
1) 실험 재료

4. 실험 방법
1) 실험 과정

5. 실험 결과
1) 결과 DATA
2) 실험군과 대조군에 해당하는 배지
3) 푸른색 군체를 찾아보고, 형성된 그 이유(원리)
4) x-gal과 항생제의 목적

6. 토의 사항
1) 실험 고찰

본문내용

1. 실험 목적
1.1. Plasmid DNA에 의한 박테리아 형질전환을 할 수 있으며 파란색의 박테리아 콜로니의 존재로 Lac+형질을 설명하는 것이다.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 박테리아의 형질 전환
박테리아의 형질전환은 박테리아 세포 내로 플라스미드 DNA를 투입해주는 작업을 의미한다. 세포가 세포막을 통해 외부 DNA를 직접 받아들이고, 형질 도입 및 접합을 통해 박테리아의 형질 전환이 일어난다.

2.2. 형질전환능
형질전환능은 DNA 1㎍당 얻어진 변환수로 정의된다. 형질 전환에 1ng의 DNA가 사용되었고, 세포들은 1㎖의 부피에서 돌아올 수 있다고 생각하면, 이 부피의 0.1을 도말할 때, 선택적 배지에 100개의 군집이 생산되었다면, 1㎖당 100개의 형질전환 세포가 존재한다. 이를 통해 효율은 이라는 것을 알 수 있다. 대부분의 군집실험에서 10 ^{5}～10 ^{6}의 효율이 충분하며, 유전체의 DNA로부터 단일복사 유전자의 복제가 이루어질 때에는 10 ^{7}～10 ^{8}의 효율이 필요하다.
{NU u mber`of`transformants} over {㎍`of`DNA} TIMES {final`vol`at`recovery(㎖)} over {vol`plated(㎖)} `=` NU u mber`of`transformants`per`㎍

2.3. 플라스미드 사용한 박테리아의 형질 전환
박테리아의 세포막은 외부의 DNA를 받아들일 수 없기 때문에 이를 화학적으로 변화시켜야한다. 이를 위해 염화칼슘과의 온도 쇼크 방법을 사용한다.
형질 전환된 박테리아를 형질 전환되지 않은 박테리아와 선별하기 위해 외부 DNA에 암피실린 저항 유전자를 이용한다.

2.4. 대장균의 젖당 오페론

E.coli는 3가지 효소를 이용하여 젖당을 받아들여 물질대사를 수행한다. 이러한 3가지 효소를 암호화하는 유전자 lac Z, lac Y, lac A는 lac오페론에 모여 있다.

참고자료

· Mllmann, A.; Jacob, F.; Monod, J. (1967). “Characterization by in vitro complementation of a peptide corresponding to an operator-proximal segment of the beta-galactosidase structural gene of Escherichia coli”. 《Journal of Molecular Biology》