독성학 실험 레포트 / Cytochrome P450 Assay / 약대 실험 레포트

소개

독성학 실험 레포트 입니다.
Cytochrome P450 Assay를 통해 CYP3A4에 의한 약물대사를 알아보는 실험을 진행하였습니다.

MC38(mouse colon cancer cell line)에서 약물 5-FU (Fluorouacil)와 Dexamethasone 처리 후
P450-Glo를 이용하여 CYP3A4 activity를 측정한 뒤 결과를 분석합니다.

약대 독성학 실험 수강생 / 생명과학과 고급실험 수강새엥게 추천합니다.

목차

1. Title : Cytochrome P450 Assay
2. Purpose : CYP3A4에 의한 약물대사에 5-FU도 영향을 받는지 알아보고자 실험을 진행하였다.
3. Method
4. Result
5. Discussion
6. References

본문내용

3. Method
1) MC38(mouse colon cancer cell line)를 1x104 cell/well로 96 well plate에 seeding 하였다.
2) 16시간 동안 37°C CO2 incubator에서 배양하였다.
3) 5-FU (Fluorouacil)를 well에 각각 0, 1, 5, 10uM 씩 처리하였다, Dexamethasone (50 μM)도 well에 positive control로처리하였다.
4) 48시간 동안 37°C CO2 incubator에서 세포를 배양하였다.
5) P450-Glo를 이용하여 CYP3A4 activity를 측정하였다.
- Luciferin-PFBE (2 mM)를 media에 50 μM이 되도록 희석하였다.
- Dose별로 반응한 5-FU가 포함된 media를 제거하고 Luciferin-PFBE contained media 50 μl를 처리하였다.
- 3 h 동안 37℃ incubator에서 배양하였다.
- Luciferin-PFBE contained media 25 μl를 white 96 well plate에 옮겼다.
- Luciferin Detection reagent를 reconstitution buffer(25 μl)로 녹였다.
- 30 min동안 37도에서 Incubation한 뒤, Luminometer로 reading 하였다.

참고자료

· Park, J.Y., & Kim, K.A. (2003). Inhibitory effect of 5-fluorouracil on human cytochrome P(450) isoforms in human liver microsomes. European journal of clinical pharmacology, 59(5-6), 407-9.
· Cook, D.J., Finnigan, J.D., Cook, K., Black, G.W., & Charnock, S.J. (2016). Cytochromes P450: History, Classes, Catalytic Mechanism, and Industrial Application. Advances in protein chemistry and structural biology, 105, 105-26.
· Teo, Y.L., Saetaew, M., Chanthawong, S., Yap, Y.S., Chan, E.C., Ho, H.K., & Chan, A. (2012). Effect of CYP3A4 inducer dexamethasone on hepatotoxicity of lapatinib: clinical and in vitro evidence. Breast cancer research and treatment, 133(2), 703-11.