단백질 정량 방법 레포트

목차

1. Kjedahl법
2. Lowry법
3. Biuret 법
4. Phenol 시약법
5. 자외선 흡수 Spectrum법

본문내용

Kjedahl법
Kjedahl법은 단백질 또는 질소를 포함하는 유기물의 총 질소량을 정량하는데 널리 이용되는 방법이다. 단백질을 CuSO4와 같은 촉매의 존재하에 진한 황산과 오랫동안 끓이면 질소는 모두 (NH4)2SO4가 된다. 이 혼합물의 일정량에 과량의 NaOH를 넣고 증류하여 이때 발생하는 암모니아를 H8BO8 용액에 흡수 시킨 후 표준 산 용액으로 적정하여 질소의 양을 측정한다. 단백질은 평균하여 16^의 질소를 포함하고 있다. 1mg의 질소 양은 6.25mg의 단백질을 의미한다. 질소를 정량한 후 단백질량으로 환산하면 식품중의 단백 질량을 알 수 있다.

-실험방법
1. 분해
◦시료 1∼5g(질소 10mg에 상당 하는 양)을 정확히 칭량(고체일 경우 파라핀지 사용)
◦200ml keldahl flask에 넣음(이때 시료가 flask에 부착되지 않도록 주의)
◦여기에 분해촉진제 0.5g, 진한황산 10ml를 가하고
◦draft실(hood내) 또는 분해대 중에서 천천히 가열하여 비등 후 방냉
◦동시에 다른 분해flask에 시료없이 공시험을 행함
◦염류의 결정이 석출되지 않도록 증류수 20ml를 주의하여 첨가
◦100ml mess flask에 위 용액을 씻으면서 넣고 방냉후 표준선까지 증류수를 넣어서 100ml로 mess up. : 백색→담청색 (희석한 분해시료 용액)

<중 략>

Lowry법
단백질 정량에 있어서 Lowry법의 감도는 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 광법위하게 이용되고 있다. 이 방법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu+이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. 발색의 정확한 기작은 밝혀지지 않았지만 Cu+ 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시킨다. 이러한 반응 결과 강한 푸른색을 생성하며 그 강도는 tryptophan과 tyrosine양에 영향을 받는다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01~ 1.0mg/ml의 경우에 측정가능하다.

참고자료

· 없음